重组线虫抗凝肽在毕赤酵母中的表达

中国生物工程杂志

研究报告

重组线虫抗凝肽在毕赤酵母中的表达

姜月华宋健王健伟韩金祥洪涛

山东中医药大学附属医院科研科中心实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所中国医学科学院病原生物学研究所中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

Expression of Recombinant Nematode Anticoagulant Peptide in Pichia Pastoris

全文: PDF HTML

摘要： 目的：获得具有抗凝活性的重组线虫抗凝肽（NAP）蛋白, 为新型抗凝药物的开发奠定基础。方法：将pPIC3.5K-rNAP质粒转化毕赤酵母菌株GS115，筛选出阳性菌株后，用甲醇诱导表达。收集酵母培养上清，用SDS-PAGE和Western blot分析表达产物，通过测定PT(血浆凝血酶原时间)、INR（血浆凝血酶原国际标准化比率）和APTT（活化部分凝血活酶时间）来验证其生物学活性。结果：获得了稳定表达NAP的重组酵母菌株。重组NAP被分泌表达，其分子量比预计分子量（8.7KD）稍大，约为10KD左右，可能与糖基化有关。体外活性检测证实其有较强的抗凝活性。结论：在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的重组线虫抗凝肽，可用于新型抗凝药物的开发。

关键词： 重组线虫抗凝肽; 毕赤酵母

Abstract: Objective: To acquire recombinant nematode anticoagulant peptide (NAP) with high anticoagulant activity to lay a foundation for the development of novel anticoagulant agent. Methods: Pichia pastoris GS115 strain was transformed with recombinant yeast expression vector pPIC3.5K-rNAP. Expression of rNAP was induced with methanol after the identification of positive strains. NAP expressed in the collected yeast culture supernatant was confirmed with SDS-PAGE and Western blot. The biological activity of the products was validated with PT (prothrombin time), INR (international normalized ratio) and APTT (activated partial thromboplastin time), respectively. Results: The yeast strains stably express NAP were identified. The rNAP was secreted into culture supernatant with a molecular weight of about 10 kD due to glycosylation, which is a little bigger than that predicted (8.7kD). The anticoagulant efficiency of rNAP was confirmed with the in vitro assays. Conclusion: The recombinant nematode anticoagulant peptide with high biological activity was successfully expressed in Pichia pastoris and can be used in the future development of novel anticoagulant agent.

Key words: Pichia pastoris recombinant nematode anticoagulant peptide

收稿日期: 2006-01-13 出版日期: 2006-07-25

通讯作者: 王健伟

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姜月华,宋健,王健伟,韩金祥,洪涛. 重组线虫抗凝肽在毕赤酵母中的表达[J]. 中国生物工程杂志, .

. Expression of Recombinant Nematode Anticoagulant Peptide in Pichia Pastoris. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I07/37

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