中国明对虾过氧化物还原酶基因在大肠杆菌中的重组表达、产物纯化及活性测定

中国生物工程杂志

2008, Vol. 28

Issue (2): 47-52

论文

中国明对虾过氧化物还原酶基因在大肠杆菌中的重组表达、产物纯化及活性测定

张庆利李富花张继泉蒋昊相建海

中国科学院海洋研究所中国科学院海洋研究所中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室

Expression, purification and activity analysis of Fenneropenaeus chinensis Peroxiredoxin gene in E. coli

全文: PDF(821 KB) HTML

摘要：

过氧化物还原酶（Prx）是生物体内广泛存在的一类酶，在消除过氧化氢和抗氧化胁迫中起着重要的作用。本研究采用PCR扩增编码中国明对虾Prx成熟肽的基因，并克隆到大肠杆菌表达载体pCR®T7/NT TOPO® TA中进行体外重组表达。重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS后，经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行LC–ESI–MS分析，结果表明融合蛋白的四个肽段与中国明对虾Prx相应肽段完全一致。将重组蛋白通过金属螯合柱进行纯化，进而透析、复性，最后获得了具有较高过氧化物酶活性的重组Prx。中国明对虾Prx的成功表达，为深入研究其在中国明对虾免疫反应和抗氧化胁迫中的作用奠定了基础。

关键词： 中国明对虾; 过氧化物还原酶; 重组表达; 纯化; 活性

Abstract:

Peroxiredoxin (Prx), one of the ubiquitous enzymes in organisms, plays an important role in eliminating oxidative stress. The cDNA encoding peroxiredoxin(Prx) of Fenneropenaeus chinensis protein was cloned and expressed in E. coli. The recombinant protein was expressed as inclusion body after IPTG induced. LC–ESI–MS analysis showed that four peptide fragments of the recombinant protein were identical to the corresponding sequence of F. chinensis Prx. The fusion protein was purified using the immobilized-metal affinity chromatography. After refolded, the purified recombinant protein was shown to reduce H2O2 in the presence of dithiothreitol. The fusion protein is useful for studies on the function of Prx in immune defense and against oxidative stress of F. chinensis.

Key words: Fenneropenaeus chinensis Peroxiredoxin Expression Purification Activity analysis

收稿日期: 2007-09-07 出版日期: 2008-02-25

通讯作者: 相建海

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张庆利,李富花,张继泉,蒋昊,相建海. 中国明对虾过氧化物还原酶基因在大肠杆菌中的重组表达、产物纯化及活性测定[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(2): 47-52.

. Expression, purification and activity analysis of Fenneropenaeus chinensis Peroxiredoxin gene in E. coli. China Biotechnology, 2008, 28(2): 47-52.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2008/V28/I2/47

[1]	邵映芝,车鉴,程驰,江志阳,薛闯. 分子生物学方法提高电活性微生物胞外电子传递效率的研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(6): 50-59.
[2]	张玲,曹小丹,杨海旭,李文蕾. 连续流层析技术在亲和层析中的应用及生产放大评估[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(6): 38-44.
[3]	张虎,刘镇洲,陈家敏,高保燕,张成武. 利用海洋硅藻生产生物活性物质研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(4): 81-90.
[4]	王惠临,周凯强,朱红雨,王力景,杨仲璠,徐明波,曹荣月. 凝血因子VII及其重组表达新进展[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 129-137.
[5]	魏子翔,张柳群,雷磊,韩正刚,杨江科. *疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶的理性设计提高其活性和温度稳定性*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 63-69.
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[7]	陈素芳,夏明印,曾丽艳,安晓琴,田敏芳,彭建. 抗菌肽Cec4a的重组表达和抗菌活性研究^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(10): 12-18.
[8]	陈东,李程程,史仲平. 植物乳杆菌胞外多糖包覆的高稳定性硒纳米颗粒的制备及其抗氧化活性的研究^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(9): 18-27.
[9]	吕一凡,李更东,薛楠,吕国梁,时邵辉,王春生. **LbCpf1基因的原核表达、纯化与体外切割检测 ^***[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(8): 41-48.
[10]	蒋丹丹,王云龙,李玉林,张怡青. 含RGD修饰的病毒样颗粒递送ICG靶向肿瘤的研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(7): 22-29.
[11]	梅雨薇,杨子云,于樊,龙旭伟. 生物表面活性剂脂肽的发酵生产及抑菌应用研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(5): 105-116.
[12]	谢航航,白红妹,叶超,陈永俊,袁明翠,马雁冰. 易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒的纯化^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(5): 40-47.
[13]	位薇,常保根,王英,路福平,刘夫锋. Tau蛋白核心片段306~378的异源表达、纯化及聚集特性验证^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(5): 22-29.
[14]	刘珍珍,田大勇. 狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(4): 25-33.
[15]	乐易林,傅毓,倪黎,孙建中. 热稳定性丙酮酸:铁氧还蛋白氧化还原酶异源表达及其在乙酰辅酶A合成中的应用 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(3): 72-78.

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