人干扰素α1b突变体IFNα1b/31K的构建及其生物学评价

doi:Q786

中国生物工程杂志

2010, Vol. 30

Issue (06): 113-116 DOI: Q786

研究简报

人干扰素α1b突变体IFNα1b/31K的构建及其生物学评价

陶杉杉¹,毛德才²,刘金毅^2*,陈依军¹

1.中国药科大学生命科学与技术学院南京 210009
2.北京三元基因工程有限公司北京 102600

Construction and Biological Assay of Human Interferon α1b Mutant 31K

TAO Shan-shan¹,MAO De-cai²,LIU Jin-yi²,CHEN Yi-jun¹

1.School of Life Science and Biotechnology，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China
2.Beijing Tri-Prime Genetic Engineering Co. Ltd.，Beijing102600，China

全文: PDF(524 KB) HTML

摘要：

目的：构建干扰素α1b突变体IFNα1b/31K，以期获得高效低毒的新型药物分子。方法：根据合理药物设计，采用定点突变技术，将干扰素α1b第31位氨基酸残基突变为K，并构建表达IFNα1b/31K重组蛋白。纯化后，对其抗病毒活性、抗肿瘤细胞增殖活性和动物体内急性毒性进行考察。结果：IFNα1b/31K表达量占菌体总蛋白的30％以上。纯化后的IFNα1b/31K纯度大于95％，比活性约为IFNα1b的1.7倍，抗肿瘤增殖活性比IFNα1b降低，未见对实验动物的急性毒性作用。结论：成功设计构建并表达了高效低毒的IFNα1b突变蛋白分子。

关键词： 干扰素α1b; 高效; 低毒; 突变

Abstract:

Interferon alpha are used clinically to treat a group of viral diseases and cancer because of its broad anti-viral，anti-tumor and immune regulation activities. Nevertheless, the clinical usage of interferon-α can still be improved in many ways, such as increasing activity and so on．In order to obtain a new type of molecule with higher potency, human interferon α1b mutant IFNα1b/31K was constructed. ATG was substituted by AAG at 31 of IFN α1b through PCR site-directed mutagenesis in vitro. The amplified fragments were inserted into pET-23b expression vector, and the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21(DE3)．After being cultured in complex auto-inducing media and purification process, IFNα1b/31K was expressed as soluble protein with the yield more than 30% of total bacterial protein. The purity was more than 95%, the anti-viral activity was 1.7 times comparing with IFNα1b, anti-tumor activity was lower than IFNα1b, and the p-value of cytotoxicity & acute toxicity was more than 0.05．

Key words: Interferon α1b High potency Low toxicity Mutation

收稿日期: 2010-05-07 出版日期: 2010-06-12

通讯作者: 刘金毅 E-mail: liujy1207@sina.com.cn

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陶杉杉毛德才刘金毅陈依军. 人干扰素α1b突变体IFNα1b/31K的构建及其生物学评价[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(06): 113-116.

DAO Sha-Sha, MAO De-Cai, LIU Jin-Yi, CHEN Yi-Jun. Construction and Biological Assay of Human Interferon α1b Mutant 31K. China Biotechnology, 2010, 30(06): 113-116.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Q786 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I06/113

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