原生质体诱变选育高产异抗坏血酸菌株

中国生物工程杂志

2013, Vol. 33

Issue (6): 30-37

研究报告

原生质体诱变选育高产异抗坏血酸菌株

刘明霞¹, 张凤英¹, 周强², 孙超¹, 陈卫平¹

1. 江西农业大学食品科学与工程学院南昌 330045;
2. 百勤异Vc钠有限公司德兴 334221

Breeding Erythorbic Acid Yield Strains by Protoplast Mutagenesis

LIU Ming-xia¹, ZHANG Feng-ying¹, ZHOU Qiang², SUN Chao¹, CHEN Wei-ping¹

1. College of Food Science and Engineering, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China;
2. Parchn Sodium Isovitamin C Co. Ltd., Dexing 334221, China

全文: PDF(991 KB) HTML

摘要：

以灰黄青霉菌(Penicillium griseofulvum HL)为出发菌株,试验得到灰黄青霉原生质体制备的优化条件为:菌体培养48h,用0.7mol/L的NaCl溶液作为渗透压稳定剂,用0.5%的蜗牛酶+0.5%的纤维素酶,在pH为6,30℃条件下酶解3h,所得原生质体数最多,达到3.14×10⁷/ml。原生质体再生的最佳条件为采用双层平板培养法,在用0.7mol/L的蔗糖溶液配制的改进察氏培养基上其再生率最高,达到24.93%。灰黄青霉原生质体经过紫外线诱变,DES诱变,紫外线-DES诱变复合诱变,紫外线-氯化锂复合诱变选育异抗坏血酸高产菌株,通过对再生平板上长出的诱变菌株进行初筛和摇瓶复筛,最终获得一株异抗坏血酸产量较高的菌株ZD4,其产量为5.28mg/ml,提高到出发菌株产量(1.08 mg/ml)的488.9%,且连续传代6代遗传稳定。

关键词： 原生质体; 诱变; 选育; 异抗坏血酸

Abstract:

The results of experiment showed that the optimum condition for preparation of protoplast to Penicillium griseofulvum HL as the starting strain was incubation time of mycelium of 48h, osmotic stabilizer of 0.7 mol/L sodium chloride, enzyme combination of 0.5% snailase +0.5% cellulase, hydrolysis temperature of 30℃ and enzymolysis time of 3h with pH value of 6.0. Under this condition the yield of protoplast could reach 3.14×10⁷/ml.The optmium condition for regeneration of protoplast of Penicillium griseofulvum HL was improved examine’s medium as the regeneration medium with osmotic stabilizer of 0.7 mol/L sucrose and regeneration method of double-layer solid culture. Under this condition the regeneration rate of the protoplast was 24.93%. The protoplasts of Penicillium griseofulvum HL were induced by ultraviolet ray, diethyl sulfate, ultraviolet ray and diethyl sulfate, ultraviolet ray and LiCl,a high-yield strain of erythorbic acid ZD4 was obtained by first screening of flat plate and second screening of shake flask.The yield of erythorbic acid was increased from the initial 1.23mg/ml to 5.28mg/ml. And it can descend stably after six generation.

Key words: Protoplast Mutagenesis Breeding Erythorbic acid

收稿日期: 2012-09-19 出版日期: 2013-06-25

ZTFLH:

TS2

通讯作者: 陈卫平 E-mail: iaochen@163.com

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章
	刘明霞
	张凤英
	周强
	孙超
	陈卫平

引用本文:

刘明霞, 张凤英, 周强, 孙超, 陈卫平. 原生质体诱变选育高产异抗坏血酸菌株[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(6): 30-37.

LIU Ming-xia, ZHANG Feng-ying, ZHOU Qiang, SUN Chao, CHEN Wei-ping. Breeding Erythorbic Acid Yield Strains by Protoplast Mutagenesis. China Biotechnology, 2013, 33(6): 30-37.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2013/V33/I6/30

[1] 周德庆.微生物实验手册.第2版.北京:高等教育出版社,2006.377-378. Zhou D Q. Microbiology Laboratory Manual. 2^nd ed. Beijing:Higher Education Press,2006.377-378.
[2] 许鸿发,张润生,杨静仪,等. D-异抗环血酸产生菌的筛选及发酵条件的研究.食品与发酵工业,1980,4:7-11. Xu H F, Zhang R S, Yang J Y, et al. Mutation screening and fermentation conditions optimizing of D-erythorbic acid yield strains. Food and Fermentation Industries,1980,4:7-11.
[3] 吴谋成,食品分析与感官评定.北京:中国农业出版社,2002.136-137. Wu M C. Food Analysis and Sensory Evaluation.Beijing: China Agriculture Press,2002.136-137.
[4] 卢燕云,林建国,李明,等.复合诱变选育酸性蛋白酶高产菌株.中国酿造,2009,1:49-51. Lu Y Y, Lin J G, Li M, et al. Screening of high acid protease producing strains with compound mutagenesis. China Brewing,2009,1:49-51.
[5] 李平兰,贺雅非.食品微生物学实验原理与技术.北京:中国农业出版社,2005.27-29. Li P L, He Y F. Food Microbiology Experiment Principle and Technology. Beijing: China Agriculture Press,2005.27-29.
[6] 宋爱环,李红叶,刘小红.原生质体制备和再生条件.农业生物技术学报,2004,12(2):197-201. Song A H, Li H Y, Liu X H. Production and regeneration conditions of protoplast. Journal of Agricultural Biotechnology,2004,12(2):197-201.
[7] 施巧琴,吴松刚.工业微生物育种.第2版.北京:科学出版社,2003.73,292-301. Shi Q Q, Wu S G. Industrial Microbial Breeding. 2^nd ed. Beijing:Science Press,2003.73,292-301.
[8] 田媛,苑社强,白晓青,等. 康氏木霉原生质体制备及再生条件研究. 中国酿造,2010,7:75-79. Tian Y, Yuan S Q, Bai X Q, et al.. Production and regeneration conditions of Trichoderma koningii protoplast. China Brewing,2010,7:75-79.
[9] 吴红燕,郑喜群.紫外线-氯化锂复合诱变羧肽酶高产菌株.中国调味品,2004,6:15-17. Wu H Y, Zheng X Q. Uv-lithium chloride compound mutagenesis carboxypeptidase high-yield strains. Chinese Seasoning,2004,6:15-17.
[10] 林祖申.UE336-2米曲霉菌株的诱变选育.中国酿造,2004,11:24-26. Lin Z S.Mutation breeding of UE336-2 Meters aspergillus strains. China Brewing,2004,11:24-26.

[1]	张莉,丁涓,郝宇晨,叶城,蒲洋. 一株海洋微藻的鉴定及其原生质体制备条件优化 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(11): 42-50.
[2]	杨建伟, 薛正莲, 朱昊, 杨蒙, 王洲. ARTP辐照对磷脂酶A1重组质粒的诱变效应[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(6): 78-85.
[3]	姚长洪, 吴佩春, 曹旭鹏, 刘娇, 姜君鹏, 薛松. 两株筛自大规模生产跑道池的节旋藻性能比较研究[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(5): 28-37.
[4]	王曦,张光德,陈熙明,浦铜良. 溶葡球菌酶在乳酸克鲁维酵母中重组表达、诱变、优化及酶学研究^*[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(12): 49-58.
[5]	田淑翠, 牛延宁, 常忠义, 高红亮, 步国健, 金明飞. 常压室温等离子体(ARTP)诱变茂源链霉菌菌株[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(9): 47-53.
[6]	吉美萍, 庞艳波, 付丽丽, 那日, 郭九峰, 王志永. γ-聚谷氨酸基因工程研究进展与展望[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(6): 107-118.
[7]	张映曈, 陈海琴, 宋元达, 张灏, 陈永泉, 陈卫. *卷枝毛霉pyrG基因缺陷突变株的诱变筛选与鉴定*[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(3): 38-42.
[8]	郭玮婷, 张慧, 查东风, 黄汉峰, 黄静, 高红亮, 常忠义, 金明飞, 鲁伟. 产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(8): 83-89.
[9]	温赛, 杨建国. 地衣芽孢杆菌原生质体电转化方法的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(7): 76-82.
[10]	石漫漫, 乔长晟, 朱明, 李雪, 刘姗姗. 高产雷帕霉素的游动放线菌菌种的选育[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(2): 72-77.
[11]	黎亮, 王泽建, 郭美锦, 储炬, 庄英萍, 张嗣良. 头孢菌素C产生菌的诱变育种及培养基优化[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(8): 61-66.
[12]	严菊芬, 齐宁波, 王素萍, 赵健烽, 杨树林. *温莪术内生真菌Gibberella moniliformis* EZG0807诱变及其诱变株遗传稳定性研究**[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(5): 23-29.
[13]	陈宝珍, 李红梅, 王伟洁, 陈群毅. 产胸苷磷酸化酶菌株初筛方法的建立及其应用[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(12): 78-83.
[14]	林俊涵, 邱东凤, 林晨. 丁醇产生菌育种研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(12): 118-128.
[15]	曹旭鹏, 艾江宁, 刘亚男, 周建男, 吴佩春, 薛松. 基于常压室温等离子体技术的金藻诱变筛选方法[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(12): 84-90.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed