嗜热厌氧乙醇菌JW200转化条件的研究

中国生物工程杂志

研究报告

嗜热厌氧乙醇菌JW200转化条件的研究

彭惠傅百灵毛忠贵

江南大学生物工程学院南京师范大学生命科学院江南大学生物工程学院

Transformation Conditions of Thermoanaerobacter ethanolicus JW200

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摘要： 摘要嗜热厌氧乙醇菌遗传转化系统的缺少，制约了对该菌理论基础和应用领域的进一步研究。利用聚乙二醇（PEG6000）转化和电转化技术国际首次实现了嗜热厌氧乙醇菌JW200外源基因的导入。PEG转化效率很低，因此选择对电转化条件进行优化，转化效率从4±3.2个转化子/μg质粒DNA提高到50±7.4个转化子/μg质粒DNA。实验表明获得较高的转化效率的必要条件是在细胞密度为OD660 0.2时添加甘氨酸与蔗糖后继续培养2h以及细胞在电击前的收集与洗涤保持低温。本研究为利用基因工程手段改造嗜热厌氧乙醇菌和从分子水平研究胞内乙醇代谢途径奠定了基础。

关键词： 条件优化; 嗜热厌氧乙醇菌; 转化; 电转化

Abstract: Abstract: It is necessary to develop a genetic transformation system for Thermoanaerobacter. ethanolicus JW200 to study gene function and regulation. To realize this, the gene transfer techniques for this organism were first developed in this paper. Firstly, transformation using polyethylene glycol (PEG6000) was obtained using T. ethanolicus-Escherichia coli shuttle plasmid pTE16. Secondly, electrotransformation was employed to introduce plasmid pTE16 into Thermoanaerobacter. ethanolicus. Transformation efficiency of PEG method was very low.，so electrotransformation procedures were optimized to enhance transformation frequency from 4±3.2 to 50±7.4 transformants per μg plasmid DNA. The most crucial factors conducive to achieve higher transformation efficiency included the appropriate degree of weaken cell wall and the chilling of cells during cell collection and washing. The results reported here provide the first unequivocal gene transfer method functional in T. ethanolicus that is suitable for molecular manipulations.

Key words: Optimization of condition Thermoanaerobacter ethanolicus transformation electrotransformation

收稿日期: 2006-07-06 出版日期: 2006-11-25

通讯作者: 彭惠

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彭惠,傅百灵,毛忠贵. 嗜热厌氧乙醇菌JW200转化条件的研究[J]. 中国生物工程杂志, .

. Transformation Conditions of Thermoanaerobacter ethanolicus JW200. China Biotechnology, .

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