利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平

中国生物工程杂志

2011, Vol. 31

Issue (8): 92-96

技术与方法

利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平

陈斌^1,2, 李建彬^2,3, 米志强², 安小平², 李存², 刘大斌², 姜焕焕², 王娟², 黄芬², 张宝中², 范华昊², 何后军¹, 童贻刚²

1. 江西农业大学动物科学技术学院南昌 330045;
2. 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京 100071;
3. 华南农业大学食品学院广州 510642

Improving Gene Expression by Introducing Upstream Frameshift and Stop Codon

CHEN Bin^1,2, LI Jian-bin^2,3, MI Zhi-qiang², AN Xiao-ping², LI Cun², LIU Da-bin², JIANG Huan-huan², WANG Juan², HUANG Fen², ZHANG Bao-zhong², FAN Hua-hao², HE Hou-jun¹, TONG Yi-gang²

1. College of Animal Science & Technology,Jiangxi Agricultural University,Nanchang 330045,China;
2. State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Institute of Microbiology and Epidemiology, Academy of Military Medical Science,Beijing 100071,China;
3. College of Food Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China

全文: PDF(1354 KB) HTML

摘要：

目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后,结果检测不到报告基因的表达。为了提高报告基因的表达水平,将报告基因的读码框向后移动一个碱基,同时在其上游增加一个终止密码子,然后检测报告基因的表达水平。结果:通过移动报告基因的读码框同时在上游增加终止密码子,使报告基因的表达水平大大提高。结论:在构建基因表达载体时,通过改变目的基因与上游起始密码子ATG之间的相对位置以及增加终止密码子,可以大幅提高目的基因的表达水平。

关键词： 慢病毒载体; 报告基因; 基因表达; 定点突变

Abstract:

Objectives:To improve the expression of gene of interest in a lentiviral vector with complicated gene distribution. Methods:Lentiviruses have complicated gene distributions such as overlapping Env,Rre,Rev and Tat on their genomes. To avoid damaging the reproduction efficiency of these vectors,it is better to retain as much as possible the original gene structure when replacing the unwanted Env gene with a gene of interest. A reporter gene luc was first inserted into the lentiviral vector in place of the Env gene. The resultant plasmid did not express detectable luciferase activity. In order to improve the target gene expression, a frameshift mutation and a stop codon upstream the luc gene were introduced. Results:After the introduction of the upstream frameshift mutation and a stop codon,the luciferase expression was greatly enhanced. Conclusion:By introducing frameshift mutation and stop codon in the upstream reading frame, the expression of the downstream open reading frame could be largely increased.

Key words: Lentiviral vector Reporter gene Gene expression Site-directed mutation

收稿日期: 2011-02-03 出版日期: 2011-08-25

ZTFLH:

Q789

基金资助:

国家自然科学基金(30872223)、"十一五"国家科技重大专项(2008ZX10001-013)资助项目

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陈斌, 李建彬, 米志强, 安小平, 李存, 刘大斌, 姜焕焕, 王娟, 黄芬, 张宝中, 范华昊, 何后军, 童贻刚. 利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(8): 92-96.

CHEN Bin, LI Jian-bin, MI Zhi-qiang, AN Xiao-ping, LI Cun, LIU Da-bin, JIANG Huan-huan, WANG Juan, HUANG Fen, ZHANG Bao-zhong, FAN Hua-hao, HE Hou-jun, TONG Yi-gang. Improving Gene Expression by Introducing Upstream Frameshift and Stop Codon. China Biotechnology, 2011, 31(8): 92-96.

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2011/V31/I8/92

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