丙酮酸甲酸裂解酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及酶学性质的研究

中国生物工程杂志

研究报告

丙酮酸甲酸裂解酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及酶学性质的研究

杨登峰韦宇拓周兴黄志民黄日波

广西科学院广西科学院广西科学院广西大学生物生命科学与技术学院

Cloning、expression and characterization of pyruvate formate-lyase in Escherichia coli

全文: PDF HTML

摘要： 丙酮酸甲酸裂解酶（pyruvate format-lyas，PFL）是厌养或兼性厌养微生物中，代谢途径的关键酶之一，为了进一步研究其功能，我们以大肠杆菌JM109菌株基因组DNA为模板，进行PCR扩增大肠杆菌中的pfl基因，为测序方便将所得DNA片段连接到pMD18-T载体上，将测序正确后的pfl基因连接到表达载体pET-22b(＋)中，重组表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达, 通过SDS-PAGE电泳分析，在分子量为85kDa处出现新生的蛋白条带。利用金属亲和层析对添加了6×组氨酸标签的PFL进行纯化，对PFL的酶学性质进行了研究。结果表明：此酶的最适温度为35 ℃，最适pH为7.5，米氏常数Km＝2.3mmol，Tm＝49.9℃。

关键词： 表达; 酶学性质; 丙酮酸甲酸裂解酶; 克隆

Abstract: Pyruvate formate-lyase(PFL) is one of the key enzymes in the metabolic pathway of anaerobic or facultative anaerobic microorganism. In order to further study the function of PFL, the pfl gene was amplified by PCR using the E. coli JM109 genomic DNA, and the amplified fraction was ligated into the vector pMD18-T for DNA sequencing. The identified pfl gene was cloned into the expression vector pET-22b and the recombinant expression vector was induced and expressed in E. coli BL21(DE3). A new protein band appeared by analysis of SDS-PAGE compared to the control, whose molecular weight was 85kD. The PFL with 6×His-Tag was purified by metal affinity chromatography. The characterization of purified PFL was carried out. The result showed that the temperature optimum and pH optimum were 35℃ and 7.5 , respectively. The Km value of the enzyme was 2.3mmol, and the value of melting temperature was 49.9℃.

Key words: cloning expression enzymatic properties pyruvate formate-lyase

收稿日期: 2006-04-06 出版日期: 2006-08-25

通讯作者: 杨登峰

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章
	韦宇拓
	黄志民
	黄日波
	周兴
	杨登峰

引用本文:

杨登峰,韦宇拓,周兴,黄志民,黄日波. 丙酮酸甲酸裂解酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及酶学性质的研究[J]. 中国生物工程杂志, .

. Cloning、expression and characterization of pyruvate formate-lyase in Escherichia coli. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I08/28

[1]	贺立恒,张毅,张洁,任豫超,解红娥,唐锐敏,贾小云,武宗信. 基于转录组和WGCNA的甘薯花青素合成相关基因共表达网络的构建及核心基因的挖掘^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(9): 27-36.
[2]	乔圣泰,王曼琦,徐慧妮. 番茄SlTpx原核表达蛋白的体外功能分析^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(8): 25-32.
[3]	陈修月,周文锋,何庆,苏冰,邹亚文. 噬菌体Qβ病毒样颗粒的制备、纯化及鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(7): 42-49.
[4]	李冰,张传波,宋凯,卢文玉. 生物合成稀有人参皂苷的研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(6): 71-88.
[5]	王惠临,周凯强,朱红雨,王力景,杨仲璠,徐明波,曹荣月. 凝血因子VII及其重组表达新进展[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 129-137.
[6]	张磊,唐永凯,李红霞,李建林,徐逾鑫,李迎宾,俞菊华. 促进原核表达蛋白可溶性的研究进展 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 138-149.
[7]	刘美琴,高博,焦月盈,李玮,虞结梅,彭向雷,郑妍鹏,付远辉,何金生. 人呼吸道合胞病毒感染的A549细胞中长链非编码RNA表达谱研究[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 7-13.
[8]	杨茜,栾雨时. sly-miR399在番茄抗晚疫病中的初步探究^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(11): 23-31.
[9]	陈素芳,夏明印,曾丽艳,安晓琴,田敏芳,彭建. 抗菌肽Cec4a的重组表达和抗菌活性研究^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(10): 12-18.
[10]	梁爱玲,刘文婷,武攀,李倩,高健,张洁,刘卫东,贾士儒,郑迎迎. 来源于Exophiala aquamarina的新型玉米赤霉烯酮水解酶的性质及底物结合中心关键氨基酸的功能研究^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(10): 19-27.
[11]	石鹏程, 纪晓俊. 酵母系统表达人表皮生长因子研究进展 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(1): 72-79.
[12]	饶海密,梁冬梅,李伟国,乔建军,财音青格乐. 真菌芳香聚酮化合物的合成生物学研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(9): 52-61.
[13]	邓通,周海胜,吴坚平,杨立荣. 基于分子伴侣策略提高NADPH依赖型醇脱氢酶的异源可溶性表达 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(8): 24-32.
[14]	张潇航,李媛媛,贾敏晅,顾奇. 弹性蛋白样生物材料的制备及性质鉴定 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(8): 33-40.
[15]	吕一凡,李更东,薛楠,吕国梁,时邵辉,王春生. **LbCpf1基因的原核表达、纯化与体外切割检测 ^***[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(8): 41-48.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed