鲁氏酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因（ZrGPD1）在粉状毕赤酵母中的表达

中国生物工程杂志

研究报告

鲁氏酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因（ZrGPD1）在粉状毕赤酵母中的表达

张洁陈献忠沈微唐雪明诸葛健

无锡江南大学生物工程学院工业微生物研究中心无锡江南大学生物工程学院工业微生物研究中心江南大学工业微生物研究中心江南大学工业微生物研究中心江南大学工业微生物研究中心

Heterologous expression of Zygosacharomyces rouxii ZrGpd 1 in Pichia farinosa

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摘要： 为探索在野生型粉状毕赤酵母（Pichia farinosa）中整合表达来源于耐高渗鲁氏酵母（Zygosacharomyces rouxii）的3-磷酸甘油脱氢酶基因（ZrGPD1）以提高产甘油能力的可行性，应用PCR方法从P. farinosa的染色体中扩增出乳清苷酸脱羧酶基因（URA3）片段，以此作为同源整合的靶序列，构建了整合型表达载体pUR-ZG。电击转化粉状毕赤酵母，以抗生素Zeocin为筛选标记，获得转化子pfa-gu，摇瓶发酵结果表明：以P. farinosa作为对照菌株，发酵72h后，转化子pfa-gu的生物量和甘油含量均高于对照菌株，其中甘油含量达到37g/L，比对照提高了30%。结论：在P. farinosa中异源表达ZrGPD1能够提高细胞的产甘油能力和对渗透压的调节能力。

关键词： 耐高渗鲁氏酵母; 整合表达; 甘油; 3-磷酸甘油脱氢酶

Abstract: To examine the effects of heterologous expression of ZrGPD1 (encoding glycerol 3-phosphate dehydrogenase ) cloned from osmotolerant yeast Zygosacharomyces rouxii on glycerol production in wild Pichia farinosa, the URA3 gene was amplified from P. farinosa as the homology integrative region. A recombinant plasmid (pUR-ZG) was constructed then transformed into P. farinosa by electroporation. The transformant pfa-gu was obtained by the selectable marker ZeocinTM .Primary results showed that the biomass of pfa-gu was higher than the wild type in the flask and after 72h fermentation the concentration of glycerol of pfa-gu was 37g/L enhanced 30% in comparison with the wild type. It is concluded that heterologous expression of ZrGPD1 is useful for increasing glycerol production and the ability of osmoregulation in P. farinosa.

Key words: osmotolerant yeast Zygosaccharomyces rouxii integrative expression Glycerol Glycerol 3-phosphate dehydrogenase

收稿日期: 2006-03-31 出版日期: 2006-08-25

通讯作者: 诸葛健

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张洁,陈献忠,沈微,唐雪明,诸葛健. 鲁氏酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因（ZrGPD1）在粉状毕赤酵母中的表达[J]. 中国生物工程杂志, .

. Heterologous expression of Zygosacharomyces rouxii ZrGpd 1 in Pichia farinosa. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I08/32

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