一种靶向性阳离子多肽载体的表达纯化

中国生物工程杂志

2007, Vol. 27

Issue (11): 57-60

技术与方法

一种靶向性阳离子多肽载体的表达纯化

王海王华茂李锦军石必枝李宗海

上海市肿瘤研究所复旦大学医学院上海市肿瘤研究所上海市肿瘤研究所上海市肿瘤研究所

Expression and purification of a targeted cationic polypeptide vector

WANG Hai Hua-mao WANG Jin-jun LI Bi-zhi SHI Zong-hai LI

全文: PDF(520 KB) HTML

摘要：

目的：原核表达靶向性阳离子多肽(KH)20-EGF，并对其DNA包装能力进行检验。方法：构建pET28a-(KH)20-EGF 原核表达载体。进行酶切和测序鉴定。转化BL21（DE3）后，经过IPTG诱导表达和NTA树脂纯化得到粗提蛋白产物，SDS-PAGE和Western blot鉴定后，将蛋白与质粒DNA混合，用于凝胶阻滞实验分析。结果：重组(KH)20-EGF的产量约为300μg/L。SDS-PAGE和Western blot表明该蛋白的凝胶迁移有些滞后；凝胶阻滞试验发现(KH)20-EGF对质粒DNA的迁移有阻滞作用。结论：成功表达非病毒载体(KH)20-EGF并确认其DNA包装能力。

关键词： 基因治疗; 非病毒载体; 阳离子多肽; 原核表达纯化; DNA包装

Abstract:

Objective: To obtain a targeting cationic polymers (KH)20-EGF and examine its capacity for DNA condensation. Method: Prokaryotic expresssion plasmid pET28a-(KH)20-EGF was constructed and transformed into BL21(DE3). The cationic polypeptide was induced by IPTG and purified using a Ni-NTA column. The purified polypeptide was determined by SDS-PAGE and Western blot analysis. The pDNA package ability of the resulted protein was examined by gel retardation assay. Results: The yield of (KH)20-EGF protein was about 300μg/L. The resulted protein was a little larger than expected when examined by SDS-PAGE and Western blot. Gel retardation assays indicated that (KH)20-EGF can retard the pDNA migration. Conclusion: We successfully expressed the non-virus vector (KH)20-EGF and confirmed its capability of DNA condensation.

Key words: gene therapy non-virus vector cationic polypeptide expresssion and purification DNA condensation

收稿日期: 2007-09-17 出版日期: 2007-11-25

通讯作者: 李宗海

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王海,王华茂,李锦军,石必枝,李宗海. 一种靶向性阳离子多肽载体的表达纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(11): 57-60.

WANG Hai Hua-mao WANG Jin-jun LI Bi-zhi SHI Zong-hai LI. Expression and purification of a targeted cationic polypeptide vector. China Biotechnology, 2007, 27(11): 57-60.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I11/57

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