酸性成纤维细胞生长因子 (acidfibroblastgrowthfactor,aFGF或FGF-1 )是成纤维细胞生长因子家族成员之一 ,是一种重要的生长因子。人FGF 1 (FGF-1 )是一个 1 7～ 1 8kDa的非糖基化多肽 ,三胚层来源的细胞都可以表达。FGF-1的生物学效应非常广泛 ,在组织和器官发育、血管发生、血细胞生成、肿瘤发生、伤口愈合等方面发挥重要的作用。FGF-1对人体的免疫系统也有重要的影响 ,能提高多种刺激诱导的T细胞增殖、凋亡及细胞因子的产生。主要概述了FGF-1的生物学效应、对免疫系统的影响及其潜在的临床应用价值。
用噬菌体展示技术进行体内筛选可以更好地模拟靶抗原的天然环境 ,以筛选到与活体内某些器官或组织有特异结合活性的肽或抗体。近年来利用该技术在动物体内的研究已取得了可喜的进展。综述了体内筛选技术在器官和组织血管靶向载体的筛选、基因治疗及绘制人类血管分子图谱方面的应用 ,并对其今后的研究发展方向进行了阐述。
氨基糖苷类抗生素在治疗感染性疾病尤其是革兰氏阴性菌引起的严重感染方面起着重要作用 ,但是耐药菌株的出现较大地限制了此类抗生素的发展 ,因此 ,如何控制耐药性已经成为一项迫切需要解决的任务。细菌对氨基糖苷类抗生素产生抗性的机制很多 ,目前普遍接受的主要有三种 :1. 通过减少对氨基糖苷类抗生素的摄取或减少药物在体内的累积而产生抗性。 2. 通过改变核糖体结合位点而产生抗性。 3. 通过表达氨基糖苷类抗生素修饰酶而产生抗性。目前细菌耐药性的控制主要集中在对原有氨基糖苷类抗生素进行改造或合成新的抗生素 ,开发氨基糖苷类抗生素修饰酶抑制剂。
从胚胎或成体大鼠脑组织、人胚脑组织均能分离到神经干细胞 ,将它们进行体外原代培养扩增或永生化后植入脑内 ,均能观察到其在脑内的迁移和分化现象。其分化能力主要取决于移植部位的脑内微环境 ,但这种影响作用是相对的。同时 ,体外培养环境如培养时间和细胞融合程度、维甲酸类诱导分化剂处理、NGF转导处理再移植或与嗜铬细胞 (分泌NGF)共移植等 ,也能决定神经干细胞脑内移植后向神经元方向分化的能力。神经干细胞移植为中枢神经系统功能重建和神经再生带来新的希望。
盾壳霉是世界性病原真菌核盘菌的主要拮抗真菌之一。许多研究表明盾壳霉具有控制温室和田间多种作物菌核病的潜力。目前欧洲一些国家已有盾壳霉商品制剂销售。为了加速盾壳霉产业化进程和更好地发挥其控制菌核病的作用 ,以及为了使人们对盾壳霉的研究不断深入 ,综述了盾壳霉生态学特性、遗传改良、对核盘菌的生防机制、在菌核病防治上的应用及基因工程研究等方面的研究进展。
目的 :了解太空诱变对生物工程细胞CHO(dhfr----
为建立一条简便、有效的构建哺乳动物细胞随机RNAi文库技术路线 ,首先通过PCR将 1 9～ 2 1ntsiRNA编码序列及终止信号等元件引入U6启动子下游 ,再将该扩增产物定向克隆至H1启动子的下游。构建的双启动子载体中 ,U6和H1相对排列 ,均以其间插入的靶序列为模板 ,分别转录出其正义和反义链 ,形成功能性siRNA。以EGFP和bcl-2为靶基因的实验表明 ,该方法构建的载体可有效地干扰相应基因的表达。
采用SDS PAGE、等电聚焦、脱磷酸反应、蛋白质N端氨基酸测序、KPTT及大鼠下腔静脉血栓形成观察 ,发现毕赤酵母重组Annexin32的分子特征较原核产物有了明显变化。有主、次 2条带 ,主带的分子量比原核产物大 ,等电点较理论值低 ,已被磷酸化 ,2条带的N端均携带了来自载体的 4个氨基酸 ,可能对其与活化血小板表面磷脂的结合有所下调 ,导致血凝与血栓形成受到一定的影响 ,但仍具有明显的抗凝及抑制血栓形成作用。
白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL-2 )与白细胞介素 6(interleukin 6,IL-6)能分别刺激T淋巴细胞增殖与B淋巴细胞分泌免疫球蛋白 ,从而促进动物机体的细胞免疫与体液免疫 ;另外IL2与IL6在发挥生物学活性时还有相互协同作用。因此 ,将去除信号肽的猪白细胞介素 6(pIL-6)与猪白细胞介素 2 (pIL-2 )cDNAs序列通过一段Linker相连 ,克隆到E .coli表达载体pPET-2 8a中。该融合蛋白IL6-IL2在E .coli表达菌BL2 1 (DE3)中获得成功表达 ,SDS-PAGE分析分子量约为40kDa ,表达量达到总菌体的 66.26%。用IL6依赖的B9细胞与IL2依赖的CTLL细胞增殖试验进行融合蛋白IL6 IL2的生物活性检测 ,其活性可分别达到 0.8× 103U /mg和 6.4× 103 U/mg。
目的 :构建tPA乳腺定位表达载体 ,使其在牛乳汁中高效表达 ,观察目的基因表达的规律及其影响因素 ,为建立新型牛乳腺生物反应器提供理论基础。方法 :RT-PCR法克隆目的基因 ,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含tPA-cDNA的乳腺定位表达载体 ;采用乳腺注射法将融合基因转入小鼠及牛的乳腺组织中。结果 :乳腺注射外源基因后 ,tPA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 :乳腺注射法可使目的基因在乳腺组织中稳定地表达较长的时间 ,其表达量与显微注射法没有明显的差异 ,表明外源基因的表达不受转基因方法的影响。但tPA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量 ,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异 ,可能受着不同的因素或调控系统的影响。
构建人胰岛素原突变体GIRR(A2 1Asn→Gly,B1 7Leu→Ile ,B31Arg ,B32Arg)基因的原核融合表达载体并进行表达和纯化 ,进一步对其性质进行研究。将人胰岛素原突变体基因重组到pTXB1融合表达载体上 ,在E .coliBL2 1 (DE3)中得到高效表达。表达产物经几丁质亲和柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶B的酶促转化等步骤 ,得到纯的人胰岛素突变体GIRR ,其纯度经HPLC鉴定达到 95 % ,氨基酸组成和设计相符 ,其受体结合活性是猪胰岛素的 1 0 5 % ,生物活性为 2 6.8IU/mg。其血浆半衰期为 2 0分钟 ,比标准猪胰岛素提高 3倍多。结果提示本突变体具有更长的半衰期 ,为长效胰岛素的制备提供了新的思路。
对magainin抗菌肽重组酵母菌的摇瓶发酵条件进行了优化。结果表明 :当重组酵母菌在BMGY培养基中增殖至OD600 为 5～ 6时转接BMMY培养基 ;BMMY培养基pH值为 6.0 ,表达后期pH值控制在 3.0 ;2 6℃培养 48h ;补加 0.5 %甲醇的同时补加 3%营养液 ;可提高magainin抗菌肽的表达量。优化后摇瓶发酵的表达量可提高到 195 μg/ml。
从轮枝链霉菌Streptoverticilliummobaraense细胞中获得其基因组DNA ,用一对特异性的引物通过PCR的方法扩增出转谷氨酰胺酶 (transglutaminase,TGase)全长基因 ,回收片段并将其连接到表达载体pET30a中 ,转化大肠杆菌DH5α。双向测序表明获得的转谷氨酰胺酶全长基因序列正确。纯化重组质粒转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,以 1mmol/LIPTG诱导 5h收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析 ,与阴性对照相比 ,明显多出了一条蛋白条带 ,紫外扫描显示此带约占总蛋白量的1 7% ,Westernblotting证实此带能够特异性地与兔抗MTG(味之素公司 )的抗体发生反应。测得纯化后得到的TGase蛋白的酶活可以达到 15.1U/mg蛋白。
利用重组PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV )E2蛋白主要抗原编码区基因 (mE2 )与T4噬菌体SOC基因融合 ,构建了大小为 643bp的SOC/mE2融合基因 ,再将其插入携带T4溶菌酶基因 (e)和(denV)基因的T4重组载体 (PRH) ,构建了重组载体pRsmE2。通过重组载体与缺失突变型T4发生同源重组 ,可将SOC/mE2融合基因整合入T4的基因组中 ,并成功地将大小约 2 1 5aaSOC/mE2融合蛋白展示于T4噬菌体衣壳表面。经Westernblot、胶体金免疫电镜等免疫学检测证实 ,展示于T4表面的mE2融合蛋白具有CSFV免疫学活性。
腺苷蛋氨酸具有转甲基、转硫和转氨丙基等重要生理作用 ,已成为治疗疾病的重要药物。研究了腺苷蛋氨酸发酵条件及发酵培养基的优化。结果表明 :发酵培养基的最适初始pH值为5.0 ;最佳发酵温度为 30℃ ;最适底物浓度为 1 % ;8%蔗糖为最佳碳源 ;0.5 %的NH4NO3 为最佳氮源 ;无机离子的最佳组合为 0.01 %MgSO4·7H2 O、0.03%CaCl2 、0.04%FeSO4·7H2 O和 0.01%LiCl。
为研究固定化的辣根过氧化物酶降解酚类有机污染物及检测环境有毒物质过程的动力学机制 ,利用伴刀豆蛋白A与糖蛋白的特异性吸附性质将辣根过氧化物酶层层固定在玻碳电极表面 ,制备了一种灵敏度高、性能稳定的辣根过氧化物酶多层膜生物传感器 ,并推导出了辣根过氧化物酶对过氧化氢、对苯二酚的催化反应以及苯肼对该反应的抑制作用的动力学模型。运用酶传感器实验数据 ,对推导出的动力学模型进行了拟合与参数估计。
目的 :通过改变冷冻干燥的工艺条件 ,缩短制备聚合物多孔支架的时间。方法 :把冷冻好的聚合物溶液在溶剂的冰点以上直接真空升华干燥 ,通过对支架的孔结构和外观的考察 ,评价其作为制备多孔支架工艺的可行性。结果 :制备了壳聚糖、胶原、明胶 3种不同材料的支架 ,都具有均匀的通孔结构 ,可应用于组织工程研究。结论 :在比冰点高的温度下对冷冻的样品进行真空干燥 ,可以制得多孔支架 ,并能使制备的时间大大缩短 ,但该工艺方案有时会产生开裂和塌陷 ,影响支架的质量 ,因此还有待进一步完善。
采用脉动平板流动腔 (flowchamber)系统 ,研究了的单水平流动剪应力加载 ,和从 5或 7.5dyne/cm2 开始的成梯度增加至 1 0或 1 5dyne cm2 的流动剪应力加载 ,在 5h、1 0h、2 4h对生长在明胶基底上的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)粘附性的影响 ,探讨了梯度增加的流动剪切力加载对细胞粘附能力的促进作用。实验结果表明 :与 7.5dyne cm2 的单一水平的加载相比 ,成梯度增加的流动剪切力可明显提高HUVEC在明胶基底上的粘附 ,增加HUVEC对流动剪应力的耐受程度 ,有利于引起HUVEC转变成与在体相同的形态和排列。
目的 :利用GC-MS分析了三种方法提取的光皮树籽油化学成分。方法 :采取超临界CO2 、超声波和微波三种方法提取光皮树籽油。结果 :超临界CO2 萃取的光皮树籽油与超声波和微波的主要化学成分有差异 ,超临界CO2 萃取的油酸含量最高 ,并且品质高 ,质量稳定 ,处理工艺简单 ;而后二者亚油酸含量最高 ,品质较低 ,质量不稳定 ,需要脱色 ,处理工艺复杂。结论 :超临界CO2 萃取的光皮树籽油更具天然性和稳定性 ,超临界CO2 萃取法为提取光皮树籽油的较理想方法。
首先从 8种溶剂中筛选出硫酸作为微波协助提取的浸提溶剂 ,然后用正交试验确立了千层塔生物碱的最佳提取条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标 ,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、微波处理时间等因素。结果表明 ,在室温下微波协助提取的最优条件为 :酸浓度 0.8% (v/v) ,液固比例 2 5∶1 ,微波处理时间 90s。 3次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是 93.7%和 93.9% ,相对标准偏差分别为 1.79%和 1.5 6% (n =3)。与传统的回流提取工艺相比 ,过程时间从 2h缩短为 90s,回收率提高了 1 0 %以上。
生物产业已经成为当今世界各国家和地区重点发展的高技术产业之一。美国、欧洲国家、亚洲国家及地区对促进生物产业发展各有重点不同的政策措施 ,但又有着共同的规律 ,即根据本地具体情况为生物产业提供不同程度的资金、技术、人才等要素的支持 ,政府在政策扶持方面起着的重要作用。通过对市场经济国家和地区经验的总结 ,探寻有益于发展我国生物产业的借鉴与启示。
随着现代生物技术的飞速发展 ,牛肉味的西红柿、含胡罗卜素的大米等种种幻想食品都将可能通过转基因技术变为现实。其实 ,在全球经济一体化的今天 ,此类转基因食品已经悄然摆上了我们的餐桌。由此引发的转基因食品安全问题也因此成为影响人类生活方式、影响世界各国贸易往来的主要议题之一。目前 ,美国和欧盟之间的转基因食品贸易争端最为激烈 ,这种分歧是由多种因素造成的 ,如政治制度、消费者观念等等。由于美国与欧盟对转基...
自从人类基因组计划完成以来 ,结构基因组、功能基因组、蛋白质组等研究计划相继启动 ,这为生物技术的发展注入了强大的活力。各国对此十分重视 ,并把生物技术产业的发展作为国家经济发展中新的增长点之一。美国生物技术药物产业化最早 ,投资最大 ,产品数量最多。由于ＦＤＡ新领导人致力于改革 ,加快了审批速度 ,2 0 0 3年批准的生物技术药物数量创历年来新高 ,达 37个 (图 1 )。其中 2 5个新药 ,比2 0 0 2年增加了 2 5 % ,另外....
