转谷氨酰胺酶基因在大肠杆菌中的克隆表达

中国生物工程杂志

2004, Vol. 24

Issue (11): 55-59

论文

转谷氨酰胺酶基因在大肠杆菌中的克隆表达

王莉¹, 常忠义¹, 李平作²

1. 华东师范大学生命科学学院, 上海 200062;
2. 上海伍佰豪生物工程研究发展有限公司, 上海 200233

全文: PDF(297 KB) HTML

摘要：

从轮枝链霉菌Streptoverticilliummobaraense细胞中获得其基因组DNA ,用一对特异性的引物通过PCR的方法扩增出转谷氨酰胺酶 (transglutaminase,TGase)全长基因 ,回收片段并将其连接到表达载体pET30a中 ,转化大肠杆菌DH5α。双向测序表明获得的转谷氨酰胺酶全长基因序列正确。纯化重组质粒转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,以 1mmol/LIPTG诱导 5h收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析 ,与阴性对照相比 ,明显多出了一条蛋白条带 ,紫外扫描显示此带约占总蛋白量的1 7% ,Westernblotting证实此带能够特异性地与兔抗MTG(味之素公司 )的抗体发生反应。测得纯化后得到的TGase蛋白的酶活可以达到 15.1U/mg蛋白。

关键词： 转谷氨酰胺酶; 克隆表达; 生物活性

收稿日期: 2004-03-23 出版日期: 2004-11-25

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王莉, 常忠义, 李平作. 转谷氨酰胺酶基因在大肠杆菌中的克隆表达[J]. 中国生物工程杂志, 2004, 24(11): 55-59.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2004/V24/I11/55

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