采用半定量RT-PCR和重组基因体内表达法观察了硫酸酯酶2基因（Sulfatase 2,Sulf2）在5-氟脲嘧啶（5-Fluorouracil, 5-Fu）诱发的小鼠骨髓抑制和再生过程中作用。结果表明：Sulf2在小鼠骨髓抑制和再生过程中呈现先上升，后下降的动态表达；电转pcDNA3.1-Sulf2基因实验组外周血白细胞数和血小板数在5-Fu注射后第7天分别为(1216.7±457.9)/μl和(8.1±5.4)万/μl，明显低于对照组［分别为(1691.7±228.9)/μl和(14.7±2.1)万/μl］，实验组单条腿骨髓细胞总数在第7天为(94.2±21.1)万，显著低于对照组（173±59.9）万，但在第11天为(585±337.9)万，又显著地高于对照组（255±65.3）万，实验组第7天10000个骨髓细胞总集落形成数为(9±8.4)，显著低于对照组（39±12.2)，统计均有显著性差异（p<0.05）。这些结果提示Sulf2可能对5Fu诱发的小鼠骨髓抑制后的再生具有促进作用。
利用RT-PCR技术将人源性PLC-γ1中的SH2-SH2-SH3 结构域基因扩增并克隆到载体pGEX-2T中，经热激反应转化到大肠杆菌BL21菌株内，在低温（33℃）下、利用IPTG诱导表达构建的重组基因的高效表达体系，利用谷胱甘肽琼脂糖（sepharose ）4B纯化得到高表达的重组蛋白。SDS-PAGE 和Western blot检测表明，PLC-γ1的SH2-SH2-SH3 结构域重组基因可在低温（33℃）条件下在E .coliBL21细胞中稳定完整表达，但是在较高温度下（37℃）会产生SH2-SH2-SH3 结构域不完全表达的现象。上述研究结果为人源性重组基因PLC-γ1中SH2-SH2-SH3 结构域的深入研究和广泛应用奠定了基础。
用纯化的猪戊型肝炎病毒DQ株重组蛋白ORF2-V1免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合，经3次克隆和间接ELISA 筛选，获得了αC11,αC12,γH1,γF8,BC4和CH8 6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA 测定，单抗效价为: 细胞培养上清1∶1.60×103～1∶3.20×103，腹水为1∶1.28×106～1∶2.56×106; 经ELISA法测定，6株单克隆抗体均与重组蛋白ORF2-V1反应， 而不与ORF2其它部分片段的蛋白反应; 将试验中制备的MAbs分别用HEV swDQ株感染的A549细胞涂片进行IFA检测，同时分别用猪的阳性、阴性血清和SP2/0细胞上清做对照，制备的6株MAbs对感染细胞均呈现阳性反应，说明其可以与天然的病毒发生反应，并且与阳性多克隆血清比较，以单克隆抗体为一抗，IFA反应表现出良好的特异性。单抗的亚类鉴定结果表明，所有MAbs均为IgG1型，而且所有单克隆抗体的轻链均为κ链。单克隆抗体抗原识别位点分析结果表明，6株单抗分别针对4个不同抗原位点，McAb-γH1,BC4,CH8识别的位点各不相同，其中McAb-γH1,BC4识别的位点有部分重叠，McAbαC11,αC12,γF8识别同一位点，位于γH1,BC4识别位点的重叠区内。
目的：采用反应器技术以细胞为基质培养流感病毒，并探索其纯化工艺。 方法：采用5L反应器无血清条件下以Vero细胞为基质培养流感病毒，病毒收获后，经灭活、澄清，采用阴离子柱去除宿主DNA，亲和柱浓缩流感病毒，最后采用分子筛三步层析法进行纯化。结果：整个纯化工艺HA回收率达102%，蛋白降低率为95.3%，宿主蛋白降低率为99.77%，DNA的降低率为99.99%。结论 本研究成功建立了一种细胞流感病毒的纯化工艺。
目的：筛选家蚕胚胎期重力相关基因。方法：对模拟失重与正常重力条件下的家蚕胚胎cDNA进行抑制消减杂交（Suppression subtractive hybridization，SSH），并对模拟失重过程中家蚕胚胎期表达发生变化的基因进行克隆、测序及同源性分析。结果：获得了34个与重力有关的序列标签。在模拟失重条件下有16个基因表达上调，其中15个为未知基因，1个为已知基因，其作用是维持mRNA的稳定性。在模拟失重条件下有18个基因表达下调，其中4个为未知基因，6个为蛋白合成相关基因，3个为基因组contig基因，5个为家蚕est库中功能未知基因。结论：模拟失重环境影响了家蚕胚胎发育期与mRNA稳定性和蛋白质合成相关基因的表达。
本文根据GenBank 中巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）的PGA基因序列设计了上下游引物，通过PCR扩增出巨大芽孢杆菌1.1741中的PGA基因。将该基因连接到T7lac启动子控制下的表达载体pYES2(amp+，ura+)上，构建了重组质粒pYES2-PGA。用LiAc/SSDNA/PEG方法将其转化进酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)H158中表达，在不需要苯乙酸诱导的重组菌株发酵液中检测到了青霉素酰化酶活性，最高酶活达到0.75 U/ml。将该PGA基因测序结果与GenBank中巨大芽孢杆菌L04471.1、U07682.1和Z37542三株的PGA基因序列比对，表现出很高的同源性，分别达到97.1%、99.8% 和99.8%。
由胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种 Erwinia carotovora subsp.carotovora （Ecc）引起的细菌性软腐病是世界性的重要流行病害，由于缺乏天然抗源，研究进展缓慢，拟南芥成为软腐病抗性研究的主要试材。本文选用 29 份拟南芥材料，制定了病情分级标准，以接种后 48 小时的病情指数作为软腐病抗性的鉴定指标，筛选出抗软腐病材料 CS906 和感病材料 CS20。通过分析抗、感材料接种 Ecc 后 AOS、ERF1-1、PR1、PDF1.2 和 PAL1 等 5 个基因的表达变化，发现 SA、ET 和 MJ 信号途径都参与了拟南芥对 Ecc 的防卫反应，且基因表达模式在抗、感材料中相似，差异体现在表达量上。本研究对深入探讨拟南芥软腐病抗病机制具有重要意义。
金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因，一个是葡萄球菌核酸酶（Staphylococcal nuclease，SNase），命名为nuc1，另一个是耐热核酸酶（Thermonuclease，TNase），命名为nuc2，nuc2是一个新的候选基因，以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1，为了进一步研究nuc2基因的功能，首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。本研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2Δnuc1，将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中，获得nuc1基因缺失突变株。经过了七轮培养和筛选，同源重组几率为2%（7/345），筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证，从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220Δnuc1。
针对细菌rRNA研发抑制细菌增殖的新型抗菌素是抗生素研究领域的新课题。细菌rRNA与基因mRNA一样自然形成折叠卷曲高级结构，其结构上可以结合反义核酸的位点即靶点，靶点的阐明是设计有效反义核酸、核酶（Ribozyme）和脱氧核酶（DNAzyme）的关键。MAST方法固定16S rRNA，将其与寡核苷酸文库杂交筛选出靶点，获得了大肠杆菌16S rRNA的6个反义核酸结合靶点，并鉴定5个靶点有效，其中1个为高效。5个靶点的反义核酸能在通透性大肠杆菌菌株培养中不同程度地抑制其生长，针对高效靶点的核酶在转化大肠杆菌中表达而抑制其生长。
由于Klebsiella pneumoniae 1,3-丙二醇合成途径中，加强甘油脱水酶基因表达，导致因NADH供应不足使3-羟基丙醛累积，并对菌体生长及1,3-丙二醇合成造成负面影响。为改善Klebsiella pneumoniae 1,3-丙二醇合成途径，本文利用PCR技术从大肠杆菌(Escherichia coli)中扩增出以NADPH 为辅酶的1,3-丙二醇氧化还原酶同工酶编码基因yqhD，从克雷伯氏杆菌中扩增出2.66kb的甘油脱水酶基因（dhaB），构建了产1,3-丙二醇关键酶基因的串联载体pEtac-dhaB-tac-yqhD，并将其转入到野生克雷伯氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)中，重组载体得到了表达。通过初步发酵，重组后的克雷伯氏杆菌产量比原始菌高20%左右，副产物中乙酸和丁二醇分别下降30%左右。
对21株真菌利用甲壳素解聚产物N-乙酰-D-葡糖胺（NAG）为碳源积累油脂的能力进行了筛选。碳源同化实验得到可同化NAG的真菌7株，进一步筛选出能利用NAG积累油脂的酵母3株。摇瓶实验表明，C. albidus ATCC 56298和T. fermentans CICC 1368利用NAG发酵菌体油脂含量可分别达到67%和48%。气相色谱分析表明菌油富含棕榈酸、硬脂酸和油酸，与常规植物油脂的脂肪酸组成相似。研究结果拓宽了微生物油脂发酵的原料。
【目的】用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体，并与常规方法比较效果。【方法】将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下，待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤，分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较，分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。【结果】做了6次融合，实体瘤融合组融合率为70.4％，常规法融合组44.6％，两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1:100000以上。【结论】利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。
通过膜分离法从Microbacterium sp.OU01的发酵液中分离到内切壳聚糖酶ChiN，并对其酶解制备壳寡糖条件进行了优化，获得的酶解产物数均分子量为1200。经薄层层析与HPLC分析，降解产物中不含单糖，初步说明降解产物为壳寡糖。酶解制备壳寡糖反应条件温和，操作简便，为实现壳寡糖产业化奠定了基础。
新颖的内含肽介导PHB纯化蛋白体系，是一种高效表达、自动切割、纯化方便、费用低廉的蛋白表达纯化体系，有利于蛋白规模化纯化。本研究选用对原核细胞具有毒害作用的小肽--人源抗菌肽LL-37作为纯化对象，通过基因工程技术，构建内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系，并利用该体系纯化LL-37。研究结果表明，本研究构建的内含肽介导PHB纯化人源抗菌肽LL-37体系可高效表达LL-37融合蛋白，利用构建的纯化体系能对目的蛋白进行纯化。
目的：建立基于DREAM设计和同源重组的简便、快速定点突变方法。方法：设计两条包含突变的反向PCR（inverse PCR）引物，使其5'端互补从而产生同源重组，同时使用DREAM设计方案在上述引物中引入限制性内切酶位点以便突变子筛选。用能扩增长片段的高保真耐热 DNA聚合酶扩增全长的质粒DNA，直接转化大肠杆菌。转化到细菌中的全长质粒DNA PCR产物可利用其末端同源序列发生同源重组而环化。利用引入的酶切位点方便地进行突变子的筛选。结果：我们用该方法成功地对长度大于7 kb的质粒进行了定点突变。结论：本定点突变无需任何突变试剂盒和特殊的试剂，只需一步反应即可完成；利用DREAM设计使克隆筛选简便可靠，高保真耐热DNA聚合酶可保证多数突变子克隆不发生意外突变，而该酶扩增长片段的能力使该方法适合于大多数质粒不经亚克隆直接突变。
为克隆表达幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）NCTC 11637 hp0527-c 基因，探讨其生物学功能。设计引物扩增，T-A克隆，测序正确后构建表达载体pET-28a- hp0527-c，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达后以Ni2＋-NTA柱获得纯度为98％重组蛋白。经Western blot鉴定正确后，免疫新西兰大白兔获得了较高滴度的多克隆抗体；将重组蛋白作用于BGC-823细胞，RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达增高；同时用MTT法来检测重组蛋白对细胞增殖的影响，结果呈现一定量的时间和剂量依赖性。已成功克隆了HP0527-C的重组蛋白，初步探讨了其与细胞之间的相互作用，为进一步阐明H.pylori致病机制奠定了基础。
趋化因子CCR5，作为G蛋白偶联因子超家族(GPCR)成员的细胞膜蛋白，是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一。以CCR5为靶点的HIV-1受体拮抗剂越来越受关注，主要有趋化因子衍生物、非肽类小分子化合物、单克隆抗体、肽类化合物等四类。这些抗病毒活性强、高亲和力的CCR5拮抗剂,已有一部分进入了临床试验阶段。本文对近年来CCR5拮抗剂的相关研究进展进行综述。
体细胞核移植技术具有极其广阔的应用前景，但极低的成功率限制了这项技术在实践生产中的应用。不同的学者在不同的物种上进行了一系列的尝试，试图提高体细胞核移植的成功率。本文就体细胞核移植技术在不同物种中的成功应用进行阐述，并就如何提高体细胞核移植成功率阐明一些观点。
流加培养是当前重组蛋白生产的主流培养模式。流加式操作主要是根据细胞对营养物质的不断消耗和需求，设计连续或半连续的流加浓缩营养物，使细胞持续高密度的生长，提高单位反应器体积内目的蛋白产量，从而达到高效生产的目的。流加培养工艺的关键技术主要包培养基的优化设计、流加策略的选择及优化、细胞代谢的调控。
基因定点突变技术在基因组原位改变基因特定序列，避免常规转基因过程中位置效应和插入失活。定点突变生物体不含转基因或标记基因，降低风险性。高等植物基因定点突变研究初见端倪，将可能为基因原位功能研究、作物遗传改良和分子设计提供有效策略。利用锌指蛋白核酸酶（Zinc Finger Nucleases, ZFN）引入DNA定点断裂（Double-Strand Breaks, DSBs）可以高效介导基因定点突变，使得ZFN在基因定点突变中倍受关注。文章综述了植物基因定点突变的一般策略，重点介绍了锌指蛋白的结构、原理、应用，特别是ZFN介导的植物基因定点突变与置换研究进展，并对ZFN介导的植物基因定点突变与置换应用前景进行了讨论。
植物抗虫基因工程为农林业生产中的害虫防治提供了新的途径，随着研究的不断深入，已经获得了很多抗虫基因。本文综述了目前源于植物的抗虫基因的种类，归纳了研究较多的抗虫基因的作用机制及其在转基因植物中的应用，提出了植物抗虫基因在虫害防治中面临的问题及相应的解决策略，展望了植物抗虫基因工程研究发展的方向和前景。
