2007年, 第27卷, 第1期　
刊出日期：2007-01-25

  

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研究报告
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  睫状神经营养因子突变体蛋白的活性研究

  毕华 袁力勇 史新昌 赵阳 刘兰 饶春明 王军志

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 1-5.

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  为了进一步研究我室应用计算机分子模拟设计并表达纯化的睫状神经营养因子突变体蛋白的生物学活性,分别采用鸡胚背根神经节无血清培养法、TF-1细胞增殖法、正常小鼠减重法对其活性进行研究。结果是突变体蛋白能促进鸡胚背根神经节的生长；促进TF-1细胞增殖，MTT测定法表明突变体蛋白与国际参考品相比，比活不低于2.0×106U/mg；使正常小鼠的体重减轻，摄食量减少，脂肪指数下降，并且体重的减轻与突变体蛋白的给药剂量呈现良好的剂量依赖关系，其ED50为：150.986?g/kg/d。以上实验表明CNTF突变体蛋白具有促神经生长、促TF-1细胞增殖和减重的生物学活性。从而为其进一步的应用和开发提供了线索。
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  利用基因免疫进行日本血吸虫Sj22蛋白抗体制备的研究

  彭海林 宋凯 叶赛 宋怀光 刘锋 徐斌 张庆华

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 6-10.

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  应用基因免疫方法制备日本血吸虫Sj22蛋白的抗体，并研究CpG佐剂和蛋白加强策略在增强基因免疫效果中的作用。采用肌肉注射的方法免疫小鼠，实验动物分为四组：A组注射pVAX1-sj22质粒100μg /只；B组注射pVAX1-sj22质粒50μg /只，同时注射CpG佐剂20μg /只；C、D组注射pcDNA3.1-sj22质粒100μg /只。分别在0，3，6周进行免疫，第9周A、B、C组用30μg重组sj22蛋白加强免疫，D组则用pcDNA3.1-sj22质粒100μg加强免疫。第0，9，10周割尾采血，使用ELISA方法进行抗体效价测定，Western blot验证抗体的特异性。结果表明：使用基因免疫的方法获得了针对Sj22的特异性抗血清，CpG佐剂能够有效降低质粒用量，基因免疫-蛋白加强的策略使得抗体的滴度提高了40～1280倍。
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  基因串联原核高效表达胸腺肽α1

  金明飞 徐伟东 黄静 金丽 王嘉 叶海峰 吴自荣

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 11-15.

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  人工合成含有SD序列、胸腺肽α1(Tα1)基因、纯化标签和酶切位点的DNA序列作为构建元件，利用同尾酶将其依次克隆到pET-32a(+)中，得到含有1-8个不同重复数目的含SD序列基因的串联表达载体，利用PCR初步鉴定和进一步的测序证实序列完全正确。进而利用lacZ基因作为指示基因，将带有SD序列的lacZ基因克隆到不同Tα1基因串数载体末尾，利用蓝白斑实验验证启动子后不同SD序列的效率，证实串联载体中的各个SD序列均能有效启动翻译。在此基础上对各串表达载体进行摇瓶发酵，SDS-PAGE电泳检测证实各串均可正确表达Tα1，且为可溶性表达。本文为小肽原核高效表达提出了新方法，有望成为小肽高效表达的新途径。
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  OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究

  任萍 王淑艳 关云谦 徐艳玲 张愚

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 16-21.

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  OTX1基因是神经发育调控中关键转录因子之一。本实验构建表达OTX1基因慢病毒载体，探讨慢病毒介导OTX1基因体外过表达的可行性。将OTX1基因克隆到慢病毒穿梭质粒DUET101内，构建表达OTX1以及GFP－OTX1基因的慢病毒载体；将pDUET－OTX1、pDUET－GFP－OTX1及pDUET101（空载体对照）质粒分别与慢病毒包装质粒pCMV R8.91、pMD.G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞，获得携带OTX1基因、GFP－OTX1基因的重组慢病毒DUET－OTX1、DUET－GFP－OTX1以及仅携带GFP基因的DUET－GFP；用重组慢病毒分别转导293T细胞、SY5Y细胞、小鼠胚胎干细胞及大鼠胚胎15天皮层神经干细胞，证实慢病毒载体能够将外源基因转导入不同细胞，且转导的OTX1或GFP－OTX1在不同细胞中均仅在细胞核内表达；培养OTX1单克隆抗体细胞，浓缩抗体上清，通过Western Blot以及细胞免疫荧光法证实慢病毒介导的OTX1基因及GFP－OTX1基因转导入293T细胞后的过表达。本实验证实慢病毒载体是高效的基因转移载体；OTX1作为发育过程中至关重要的转录因子，经过重组慢病毒体外转导后均只在细胞核内表达。
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  高羊茅和黑麦草农杆菌介导转化体系的研究

  王艳丽 叶兴国 董芳 陶丽莉 乔卫华 李晓璐

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 22-27.

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  利用C58C1农杆菌菌系（携带的表达载体上含GUS基因和nptII基因）感染4个草坪草品种追寻者、爱神特、腾跃和守门员成熟胚来源的愈伤组织，共培养后部分愈伤组织进行X-Gluc组织化学染色检测，其余愈伤组织在含G418 10-25 mg/L的MS改良培养上先后筛选抗性愈伤组织和分化抗性再生植株，对移栽成活的144棵抗性再生植株分别进行了ELISA检测、PCR检测和组织化学染色检测。愈伤组织阶段X-Gluc染色检测结果表明，4个草坪草品种GUS基因瞬间表达率8.6%～46.9%，爱神特愈伤组织对农杆菌侵染最为敏感，其次是腾跃和守门员，追寻者最不敏感；ELISA检测结果表明，45株呈现阳性，证明nptII基因已转入草坪草并已表达；PCR检测结果与ELISA检测结果一致，表明nptII基因确实已经整合到了草坪草基因组中，且没有发生沉默现象；转基因植株X-Gluc染色检测结果表明，GUS基因在43株中得到了稳定表达，在2株中发生了沉默现象。4个草坪草品种抗性再生植株分化率0～43.5%，转化率0～21.5 %。结果还表明，GUS基因瞬间表达率与稳定转化率在草坪草上很不一致，不能作为衡量基因型转化效果的指标。
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  测序水稻品种SSR遗传连锁图谱的构建及其农艺性状基因座分析

  梁永书 张启军 王世全 邓启明 李平 李艳萍 闫双勇

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 28-34.

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  利用测序水稻品种"Nipponbare（粳）/广陆矮4号（籼）"杂交F2群体90个单株为作图群体，构建含148个SSR标记的水稻遗传连锁图谱，覆盖基因组全长1737.81cM，标记间平均距11.90cM。利用该图谱及Excel2000和Mapmaker/QTL1.1b软件对分蘖数、穗数、穗长、主穗长、株高、剑叶长等六个农艺性状间的相互关系和基因位点进行分析，结果在LOD>2.2和P<0.005的条件下共检测到28个QTLs，它们分布在水稻所有染色体上，单个QTL对性状的分子贡献率11.1%-42.9%，其中大于20%有10个，并对选用已测序材料为亲本构建图谱来探讨水稻农艺性状的分子基础及其育种意义进行了讨论。
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  共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因及猪γ-干扰素基因的腺病毒载体的构建与鉴定

  牛明福 郑其升 曹瑞兵 魏建超 姬向波 李鹏 周斌 陈溥言

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 35-40.

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  利用PCR方法分别扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒全长GP5基因（E蛋白），EMCV的核糖体介入位点（IRES）序列及猪γ-干扰素（IFN-γ）基因全长序列，序列测定正确后用DNA重组法将三者串联后插入pAdenoVator-CM V5-IRES-GFP穿梭质粒中,形成的穿梭质粒plRES-GP5-IFN-γ用PmeⅠ线性化后,与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转化感受态大肠埃希氏菌BJ5183,经同源重组,构建成含有GP5基因和IFN-γ基因的重组腺病毒载体,pacⅠ酶切线性化充分暴露反向末端重复序列后,脂质体转染HEK293A细胞,借助GFP的表达可以在转染后的2～3天观察到包装病毒rAdeno-GP5-IFN-γ产生,7～10天出现病毒蚀斑。经PCR法及酶切证实各中间过程载体及最终的包装病毒中携带有目的基因，western-blot证实两基因在腺病毒中得到了表达。大肠杆菌内同源重组法能有效和较为方便的构建出含有目的基因的腺病毒载体rAdeno-GP5-IFN-γ,重组子能够在HEK293细胞中稳定扩增,病毒包装的成功为进一步研究PRRSVE蛋白的免疫效果及IFN-γ的作用奠定了基础。
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  猪白细胞介素-18基因克隆、序列分析及其真核表达载体的构建

  郑兰兰 崔保安 陈红英 贾云飞 陈瑞亮 方忠意 李小康 赵丽

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 41-46.

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  采集6月龄河南良杂猪的脾脏，分离淋巴细胞后直接提取总RNA，进行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增，扩增产物进行T-A克隆、测序，获得了河南良杂猪IL-18全基因序列，序列测定表明，plL-18全基因核苷酸长度为579bp，编码 192个氨基酸。与GenBank上已发表序列ABO10003进行比较，核苷酸同源性为99.8%，在第550位处 (以ATG为1计)由A→G，存在有意义突变。与GenBank下载读取的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析，氨基酸同源性分别为99%、98.5%和99.8%、99%。将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1，构建重组质粒pcDNA-ILl8m，所获重组质粒经过酶切、测序鉴定，证实含有目的片段，且连接、构建正确，为核酸疫苗的研究应用奠定了基础。
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  外源丙氨酸提高蜘蛛牵引丝蛋白天然基因在原核系统中的表达

  马鹤雯 张立树 郑伟 张永亮 张玉静

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 47-51.

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  蜘蛛丝蛋白天然基因的体外表达受诸多因素的限制。本研究在获得生长于中国的Nephila clavipes蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2 cDNA（Genbank Accession No. AF441245）的基础上，利用限制性内切酶双酶切反应构建含有Spidroin2 cDNA的重组表达质粒pET-28b(+)-Sp。将该质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）宿主细胞感受态菌中，以不同浓度的IPTG进行诱导，并通过诱导时间、培养温度、加入外源丙氨酸等途径提高Spidroin2 cDNA的表达量，同时利用多克隆抗体对表达产物进行Western blot检测。重组质粒pET-28b(+)-Sp的测序结果表明Spidroin2 cDNA基因以正确的阅读框插入到原核表达载体中；SDS-PAGE结果表明菌体表达蛋白中存在着大小约为31 kDa的目的蛋白带（加入外源丙氨酸条件下），Western blot检测结果进一步证实，目的基因在大肠杆菌中得到正确表达。本研究证实，蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2 cDNA可在原核细胞内正确表达，外源丙氨酸的加入对于提高天然蜘蛛丝蛋白基因在原核系统的表达作用明显。
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  可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体

  张超 刘刚 余少文 邢苗

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 52-58.

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  从毕赤酵母表达载体pPICZαA出发，构建了可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体（毕赤酵母表达型T载体）。设计合适的引物扩增一DNA片段，使该片断的上游含XhoⅠ和Eam1105Ⅰ酶切位点，下游含Eam1105Ⅰ和XbaⅠ酶切位点。通过XhoⅠ和XbaⅠ位点将扩增产物与质粒pPICZαA连接形成重组质粒。用Eam1105Ⅰ酶切重组质粒，回收大片段即得到毕赤酵母表达型T载体pPICZαT。使用该表达型T载体进行了里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因（cbh2）的克隆和在巴氏毕赤酵母中的表达。结果表明，使用表达型T载体可以直接克隆PCR产物，而且可以使外源基因在毕赤酵母中成功表达。另一方面，使用该载体时不需要使用限制性内切酶，从而可以避免在所表达蛋白的N-末端引入多余的氨基酸。
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  谷氨酸棒杆菌高丝氨酸脱氢酶编码基因hom的敲除

  饶志明 张君胜 沈微 方慧英 诸葛健

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 59-63.

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  本研究以谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）标准菌株ATCC 13032染色体为模板，设计引物PCR扩增高丝氨酸脱氢酶编码基因（hom），在hom基因内部插入一段来源于质粒pET28a的卡那霉素抗性基因（Km），得到基因元件hom::Km；通过电击转化法将hom::Km转入出发菌株替换原菌株的hom，在含卡那霉素的平板上挑取阳性转化子，通过PCR验证得到高丝氨酸脱氢酶缺陷的重组菌。发酵结果表明重组菌C.g- hom::Km -8发酵60小时赖氨酸产量达到4.7 g／L，是出发菌株谷氨酸棒杆菌ATCC 13032（0.7 g／L）的6.7倍。
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  固定化氧化亚铁硫杆菌培养条件对黄铁矾沉淀的影响

  杨晓娟 王玉建 李红玉 涂玮

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 64-68.

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  以聚乙烯醇-海藻酸钠复合材料为载体，Ca(NO3)2为交联剂对氧化亚铁硫杆菌进行包埋固定化。该固定化细胞的连续培养技术可以用于处理H2S、SO2，为了减少减少固定化细胞培养过程中带来许多不利效应的黄铁矾沉淀 (NH4Fe3(SO4)2(OH)6），采取了改变初始pH值和目前普遍采用的9K培养基中的(NH4)2SO4浓度，K2HPO4浓度三种方法。结果显示：在三种方法中，降低(NH4)2SO4浓度是比较可行的一种方法，当(NH4)2SO4从3.0 g/L降低到0.5g/L,Fe2+氧化速率几乎没有受到影响，沉淀形成速率却减少了45%。在固定化细胞连续运行时，降低9K培养基中(NH4)2SO4的含量，当稀释率为0.4 h-1，运行时间为96 h，Fe2+氧化速率高达3.75 g/L.H,结果显示反应柱内沉淀明显减少，同时Fe2+氧化速率并没有明显变化。
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  过量表达苹果酸酶对E.coli FMJ39厌氧混合酸发酵的影响

  姜岷 谢鑫 许琳 严明

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 69-74.

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  为了考察苹果酸酶对厌氧混合酸发酵影响,从E.coli DH5α中PCR扩增苹果酸酶（NAD+-dependent, E.C1.1.1.38）基因sfcA，插入质粒pTrc99a构建了表达质粒pTrc99a-sfcA，有氧和厌氧的条件下，IPTG诱导在E.coli FMJ39（ldh，pfl）中均获得大量表达，从而构建和加强了一条在厌氧混合酸发酵中微弱的代谢途径。厌氧发酵结果表明，过量表达苹果酸酶会影响混合酸发酵中甲酸、乙酸、丁二酸途径。重组FMJ39甲酸和乙酸的量分别比FMJ39提高了17.58%和15.27%，丁二酸的量降低了26.87%，柠檬酸的量变化不大。证实即使pfl基因缺陷，高浓度的L-Thr和L-Ser也会诱导Tdc 操纵元把丙酮酸转化为甲酸和乙酸。实验结果为进一步改造和利用FMJ39奠定了基础。
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  用乙醇消除AOT/异辛烷反胶束体系萃取过程中蛋白质的变性失活

  陈霖杰 曹学君

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 75-84.

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  用反胶束技术分离纯化蛋白质，具有高选择性、易于大规模操作等优点，具有良好的工业应用前景。但是离子型表面活性剂形成的反胶束体系萃取蛋白质容易引起蛋白质的变性，这是由于离子型表面活性剂的强电荷作用会导致蛋白质发生变性，从而在两相界面上产生沉淀。这也是离子型反胶束体系用于蛋白质萃取所存在的最大的困难。本文对用AOT/异辛烷反胶束体系从胰酶粗提物中萃取胰蛋白酶进行了研究，通过在反胶束相加入乙醇，解决了反胶束萃取蛋白质时使蛋白质变性失活的问题，并且大大减少了分相的时间。前萃取和反萃取之后的分相时间只需要10分钟左右，简化了实验步骤，优化了实验方法，在工业上的大规模应用成为可能。在本研究中，胰蛋白酶的前萃取率达到90%，反萃取率接近100%。最终得率为88%。纯化后的比活提高了5倍多，从300U/mg左右提高到了1800U/mg。
研究简报
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  柞蚕核型多角体病毒PstⅠ-B、C片断克隆及序列分析

  石生林 潘敏慧 鲁成

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 85-85.

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  本研究克隆并测序分析了柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus，ApNPV) PstⅠ-B和C片断。结果表明：ApNPV PstⅠ-B片断长7406 bp，编码7个开放阅读框(open reading frames， orf)，包括p87、he65、pnk/pnl、odv-ec43基因及黄杉毒蛾核型多角体病毒病毒(Orgyia pseudotsugata multicapsid nucleopolyhedrovirus，OpMNPV) orf107、orf108同源区。ApNPV PstⅠ-C长6663 bp，编码11个orf，包括pk-1、orf1629、polh、lef-2、ptp-2、ctl-1、ptp-1及OpMNPV orf5、orf7、orf8和orf11同源区。ApNPV是已知的第三个编码pnk/pnl、第四个同时编码ptp-1和 ptp-2基因的杆状病毒。
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  用DREAM技术纠正人工合成基因中的突变

  童贻刚 朱晓峰 陈锦辉 张昕

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 86-92.

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  目的：介绍一种简便、有效的定点突变技术。方法：根据突变位点附近的DNA序列推导出氨基酸序列，再以此氨基酸序列进行逆翻译，这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变体（silent mutants），这些突变体中包含大量的限制性内切酶位点，选择合适的酶切位点设计引物用PCR技术扩增两侧DNA片段，然后以相应酶切融合这两个片段即可完成定点突变。结果：用该方法成功地在人工合成的含有缺失的可溶性组织因子基因的472位插入C，T两个碱基，校正了阅读框架，获得了预期的目的基因。结论：该方法简便、有效, 避免了多轮PCR和合成长引物导致突变的可能性，这种改进的PCR 定点诱变技术我们称之为“设计限制酶辅助突变”（Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis, DREAM）。此技术简单方便, 诱变的成功率高, 适于实验室常规应用。
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  抗FLAG标签单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

  闵玉涛 王云龙 李晨阳 李玉林 王真

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 93-97.

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  用碳化二亚胺法合成FLAG完全抗原，利用杂交瘤技术制备出5株分泌抗FLAG标签单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经鉴定，腹水效价均高于1：106 ，且5株单抗与其它融合蛋白标签无交叉反应性，并在免疫亲和层析实验中取得了满意的效果，为含标签的融合蛋白的纯化和研究应用提供了重要的工具。
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  牛分离精子对其IVF胚胎染色体影响的研究

  张明 陆阳清 卢克焕

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 98-101.

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  本研究采用传统的细胞遗传学方法，研究了由流式细胞仪分离的、染色未分离的及作为对照用的未染色未分离的分别来自于3头公牛的精子IVF（in vitro fertilization, IVF)后产生的6~8 d囊胚的染色体异常情况，以确定流式细胞仪分离精子的过程及染色对胚胎染色体异常的影响。结果显示，分离精子、染色未分离精子和未染色未分离精子的胚胎中，染色体组成为异常，即嵌合体的胚胎分别占40.7%（59/145）、35.8%（38/106）和37.0%（37/100），三者染色体异常的比例无显著差异。胚胎染色体异常的频率在不同公牛之间存在差异（33.0% 比 44.6%）（p<0.05）。本研究的结果证明，染料和分离过程没有影响精子的DNA进而影响胚胎的染色体组成；胚胎染色体异常的频率在不同公牛之间存在差异。
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  用于质粒DNA规模化生产的大肠杆菌发酵培养基的筛选

  张泉 郭晓宇 袁维峰 孙怀昌 朱鸿飞

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 102-105.

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  为降低质粒DNA的生产成本，在标准LB培养基的基础上，利用国产试剂配制成十种大肠杆菌液体培养基，以pEGFPC3、pcDNAlacZ和pcDNKLYZ质粒转化的JM109和DH5α大肠杆菌为指示菌进行小规模发酵培养，定时采样测量OD600值及质粒产量，获得一种高性价比培养基。用该培养基培养重组大肠肝菌，绘制生长曲线，并于其对数生长中期进行42℃诱导。结果表明经42℃诱导后，重组大肠肝菌JM109和DH5α的质粒产量均有提高，重组JM109的产量比重组DH5α约提高20％，为低成本、大规模生产重组质粒提供了良好的技术保障。
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  红谷霉素对细菌抑制效果研究

  熊智强 张嗣良 涂国全

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 106-109.

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  红谷霉素是链霉菌702发酵后所产的一种生物活性物质，具有较强抗细菌活性。研究表明，红谷霉素对大肠杆菌的最低抑菌浓度为40mg/L，对枯草芽胞杆菌的最低抑菌浓度为0.08mg/L。红谷霉素在微生物生长迟滞期添加比在其它生长阶段添加抑菌效果更好，红谷霉素对热和紫外比较稳定。通过与其他防腐剂的抑菌效果比较表明，红谷霉素对细菌的抑菌效果优于比较的防腐剂。
综述
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  动物细胞无血清培养基的研究与设计方法

  王永民 陈昭烈

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 110-114.

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  随着哺乳动物细胞培养规模的扩大和生物药物需求的增长，基于细胞及产品特性的无血清培养基的研制已成为细胞工程领域的重要课题。运用统计学实验方法，可科学有效地考察细胞培养基中多因素、多水平间的交互作用。应用新型蛋白质组分析技术及生物芯片技术定位胞浆信号通路相关蛋白、膜表面的生长因子受体、激素受体、细胞因子受体、粘附分子等，用于确定细胞培养基中调控分子的添加组合。本文系统概述了目前无血清培养基几种新型及常用的研究和设计方法，并对其应用特点做了分析，希望为动物细胞无血清培养基的研制提供可借鉴的思路。
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  抗菌肽及其功能研究

  徐灵龙 王云峰 石星明 童光志

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 115-118.

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  抗菌肽是近年来发现的广泛存在于自然界的一类阳离子抗菌活性肽，越来越多的证据表明它们在宿主先天性免疫和适应性免疫中有着重要的作用。对抗菌肽的研究正不断深入。本文先从抗菌肽研究的历史背景出发，简要介绍了抗菌肽的一般特性；然后从抗菌肽的直接抗菌活性和免疫调节功能这两个方面重点阐述其在宿主防御过程中的作用，最后对抗菌肽的临床应用及前景做了一个概述。
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  丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗的研究进展

  杨化强 曹以诚

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 119-125.

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  丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是非甲非乙型肝炎的主要病原，目前还没有有效的预防和治疗手段。多表位DNA疫苗(multi-epitope DNA vaccine, minigenes/epigenes)是指通过筛选与组合优势抗原表位(包括T细胞、B细胞表位)基因，以能产生高效细胞、体液免疫应答进而清除HCV病毒为目的的新型核酸疫苗。其优势在于通过选择最具免疫保护潜力的表位以覆盖尽量多的病毒亚型和诱导全面的机体抗病毒免疫应答，并尽量减少无关、干扰和抑制序列可能产生的负面影响。本文介绍近年来国内外在丙型肝炎多表位DNA疫苗方面的研究进展，并展望了其发展方向。
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  重组杆状病毒：一种新型哺乳动物细胞基因转移载体

  彭伍平 仇华吉

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 126-130.

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  昆虫杆状病毒表达载体系统已广泛应用于表达重组蛋白。近年来研究显示，含有哺乳动物细胞启动子元件的重组杆状病毒可有效地转导多种哺乳动物原代和传代细胞。借助于杆状病毒载体，已成功实现了外源基因在哺乳动物细胞内的瞬时或稳定表达；而在体内，杆状病毒可被血清中的补体成份所灭活，从而抑制了转导效率，但是通过对杆状病毒进行修饰（如伪型杆状病毒），可以抵抗补体的灭活作用。研究人员对杆状病毒转导机制进行了探索，但是至今尚未完全弄清。杆状病毒基因转移系统最大特点是，杆状病毒能在昆虫细胞内大量繁殖，而不能在哺乳动物细胞内复制，因而具有很高的生物安全性；同时，此系统还具有操作简便、插入外源基因容量大等优点，使得杆状病毒作为哺乳动物细胞的基因传递载体，具有广泛的应用前景。
产业发展
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  发酵工程与验证理念

  刘明力

  中国生物工程杂志. 2007, 27(1): 131-136.

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  摘要：发酵是科学技术，验证是科学管理，技术离不开管理，管理也离不开技术，技术如果想飞得更稳，飞得更高，则必须插上管理的翅膀。本文将验证的理念融入到发酵技术中，建立发酵系统的验证思维，阐述了发酵系统验证由人员的确立、方案的制订、验证的实施到报告的总结的全过程。事实证明，建立发酵系统的验证是发酵过程中不可缺少的环节，经过验证的发酵系统才是可靠的系统，经过验证的发酵工艺才是稳定的工艺。