用乙醇消除AOT/异辛烷反胶束体系萃取过程中蛋白质的变性失活

中国生物工程杂志

2007, Vol. 27

Issue (1): 75-84

研究报告

用乙醇消除AOT/异辛烷反胶束体系萃取过程中蛋白质的变性失活

陈霖杰¹,曹学君²

1. 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物工程系
2. 华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室（生物工程系）

AOT/Isooctane reverse micellar extraction by adding ethanol Chen Lin-Jie, Cao Xue-Jun

全文: PDF HTML

摘要： 用反胶束技术分离纯化蛋白质，具有高选择性、易于大规模操作等优点，具有良好的工业应用前景。但是离子型表面活性剂形成的反胶束体系萃取蛋白质容易引起蛋白质的变性，这是由于离子型表面活性剂的强电荷作用会导致蛋白质发生变性，从而在两相界面上产生沉淀。这也是离子型反胶束体系用于蛋白质萃取所存在的最大的困难。本文对用AOT/异辛烷反胶束体系从胰酶粗提物中萃取胰蛋白酶进行了研究，通过在反胶束相加入乙醇，解决了反胶束萃取蛋白质时使蛋白质变性失活的问题，并且大大减少了分相的时间。前萃取和反萃取之后的分相时间只需要10分钟左右，简化了实验步骤，优化了实验方法，在工业上的大规模应用成为可能。在本研究中，胰蛋白酶的前萃取率达到90%，反萃取率接近100%。最终得率为88%。纯化后的比活提高了5倍多，从300U/mg左右提高到了1800U/mg。

关键词： 反胶束; 胰蛋白酶; 乙醇

Abstract: Proteins denaturation or precipitation is a big problem during AOT-isooctane reverse micellar extraction due to strong electrostatic interaction between AOT-proteins molecules. In this paper, it has been resolved by adding ethanol into reverse micellar system, and no denaturation was observed. The phase separation time was shortened significantly. It is only 10 minutes or less to reach phases separation after forward and backward extraction. If this method can be applied in industry, efficiency will be greatly improved. In this study, trypsin was extracted from crude material of pig pancreas by using AOT/isooctane reversed micellar system. Forward and backward extraction recovery of trypsin reached almost 90% and neared 100%, respectively. Finally, about 88% of total yield was obtained, and the specific activity of trypsin was increased to over 1800U/mg with purification factor of 5 times more.

Key words: reversed micellar islet transplantation ethanol

收稿日期: 2006-08-23 出版日期: 2010-05-10

通讯作者: 曹学君 E-mail: caoxj@ecust.edu.cn;caoxj2@sina.com

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陈霖杰曹学君. 用乙醇消除AOT/异辛烷反胶束体系萃取过程中蛋白质的变性失活[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(1): 75-84.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I1/75

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