基因串联原核高效表达胸腺肽α1

中国生物工程杂志

2007, Vol. 27

Issue (1): 11-15

研究报告

基因串联原核高效表达胸腺肽α1

金明飞¹,徐伟东²,黄静¹,金丽¹,王嘉¹,叶海峰¹,吴自荣¹

1. 华东师范大学生命科学学院
2. 上海市药品检验所

High Level Prokaryotic Expression of Thymosin α1 by Gene Repeats

全文: PDF HTML

摘要： 人工合成含有SD序列、胸腺肽α1(Tα1)基因、纯化标签和酶切位点的DNA序列作为构建元件，利用同尾酶将其依次克隆到pET-32a(+)中，得到含有1-8个不同重复数目的含SD序列基因的串联表达载体，利用PCR初步鉴定和进一步的测序证实序列完全正确。进而利用lacZ基因作为指示基因，将带有SD序列的lacZ基因克隆到不同Tα1基因串数载体末尾，利用蓝白斑实验验证启动子后不同SD序列的效率，证实串联载体中的各个SD序列均能有效启动翻译。在此基础上对各串表达载体进行摇瓶发酵，SDS-PAGE电泳检测证实各串均可正确表达Tα1，且为可溶性表达。本文为小肽原核高效表达提出了新方法，有望成为小肽高效表达的新途径。

关键词： SD序列-基因串联; 高效表达; 小肽; 胸腺肽α1

Abstract: A new thymosin α1(Tα1) gene [SD-His.tag-EK- Tα1] named SD-Tα1 was synthesized, consecutively consisting of SD sequence, sequence encoding His.tag, enterokinase recognition site and Tα1 cDNA. This gene monomer was multiplied up to 8-tandems using Isocaudamer XbaI and SpeI. These different repeats of SD-Tα1 were inserted into plasmind pET-32a(+) respectively and then transformed into E. coli BLR(DE3) to achieve a series of genetic bacteria E. coli BLR(DE3) containing 1~8 copies of SD-Tα1.PCR analysis and the sequencing showed that 1~8 copies of SD-Tα1 were all correctly cloned into pET-32a(+) vector. Furthermore, the reporter gene lacZ with its own SD sequence (SD-lacZ) was added as a tail of SD-Tα1 tandems to verify the translation efficiency of the fusion gene through blue-white clone screening. The expected blue clones were obtained such as genetic E. coli BLR(DE3)strain containing pET32a-1Tα1-LacZ、pET32a-3Tα1-LacZ、pET32a-5Tα1-LacZ and pET32a-8Tα1-LacZ. The results implied that each SD-Tα1 repeat can be authentically transcribed and submitted for translation. Fermentation and SDS-PAGE analysis indicated that Tα1 peptide was expressed in a soluble form in all the genetic bacterial strains containing 1~8 repeats of SD-Tα1. In conclusion, a series of multiple repeats of Tα1 gene has successfully been constructed and expressed in E. coli with a new construction method. Also, a platform of high prokaryotic expression of small peptides was established.

Key words: SD-Tα1 gene repeats in tandem high expression small peptide thymosin α1

收稿日期: 2006-07-31 出版日期: 2010-05-10

基金资助: 上海市科委重大项目基金(编号：04DZ19207-1);其它项目基金

通讯作者: 吴自荣 E-mail: zrwu@bio.ecnu.edu.cn

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引用本文:

金明飞徐伟东黄静金丽王嘉叶海峰吴自荣. 基因串联原核高效表达胸腺肽α1[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(1): 11-15.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I1/11

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