OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究

中国生物工程杂志

2007, Vol. 27

Issue (1): 16-21

研究报告

OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究

任萍¹,王淑艳¹,关云谦¹,徐艳玲²,张愚²

1. 北京市宣武医院细胞治疗中心
2. 首都医科大学宣武医院老年病研究所细胞生物学研究室

Construction of OTX1 lentiviral vector and overexpression research

全文: PDF HTML

摘要： OTX1基因是神经发育调控中关键转录因子之一。本实验构建表达OTX1基因慢病毒载体，探讨慢病毒介导OTX1基因体外过表达的可行性。将OTX1基因克隆到慢病毒穿梭质粒DUET101内，构建表达OTX1以及GFP－OTX1基因的慢病毒载体；将pDUET－OTX1、pDUET－GFP－OTX1及pDUET101（空载体对照）质粒分别与慢病毒包装质粒pCMV R8.91、pMD.G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞，获得携带OTX1基因、GFP－OTX1基因的重组慢病毒DUET－OTX1、DUET－GFP－OTX1以及仅携带GFP基因的DUET－GFP；用重组慢病毒分别转导293T细胞、SY5Y细胞、小鼠胚胎干细胞及大鼠胚胎15天皮层神经干细胞，证实慢病毒载体能够将外源基因转导入不同细胞，且转导的OTX1或GFP－OTX1在不同细胞中均仅在细胞核内表达；培养OTX1单克隆抗体细胞，浓缩抗体上清，通过Western Blot以及细胞免疫荧光法证实慢病毒介导的OTX1基因及GFP－OTX1基因转导入293T细胞后的过表达。本实验证实慢病毒载体是高效的基因转移载体；OTX1作为发育过程中至关重要的转录因子，经过重组慢病毒体外转导后均只在细胞核内表达。

关键词： 慢病毒; OTX转录因子; 基因表达

Abstract: OTX1 gene is one of the pivotal transcriptional factors involved in the neurogenesis. In order to overexpress the OTX1 gene in distinct cell types and find out its contribution to the proliferation and differentiation of stem cells in vitro, OTX1 cDNA was subcloned into lentiviral vectors. The resulting constructions pDUET－OTX1、pDUET－GFP－OTX1 and pDUET-GFP were packaged in 293 cells producing viral particles to transduce 293T cells、SY5Y cells、mouse embryonic stem cells and E15 neural stem cells. It was proved that the transferred OTX1 gene was located in the nuclei of the transduced cells in stead of plasma. Lentivirus is an ideal vector delivering gene to different cells. The overexpression of OTX1 in transduced 293T cells were validated by Western blot and immunofluorescence.

Key words: lentivirus OTX transcriptional factor gene expression

收稿日期: 2006-09-11 出版日期: 2010-05-10

基金资助: 新世纪百千万人才工程资助;国家自然科学基金

通讯作者: 张愚 E-mail: yaz@bjsap.org

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任萍王淑艳关云谦徐艳玲张愚. OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(1): 16-21.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I1/16

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