目的：克隆分泌型IgA（SIgA）相关基因--J链基因(IgJ)、多聚免疫球蛋白受体基因（pIgR）和IgA重链恒定区基因（IGHA），为进一步构建SIgA真核表达质粒奠定基础。方法：采用本室建立的"基因组DNA剪接"技术，根据已发表的IgJ、pIgR和IGHA的核苷酸序列，通过计算机软件分别设计各个基因片段外显子的优化引物，从人外周血基因组DNA中直接扩增各基因的外显子序列；然后人工设计融合相邻外显子的融合引物，采用重叠PCR技术，把各基因片段的外显子串联起来形成全长编码序列，完成基因组DNA的体外剪接。扩增的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T Easy Vector中，通过DNA测序对阳性克隆进行分析鉴定。结果：PCR扩增的IgJ、pIgR和IGHA基因与预期大小一致；测序结果表明本实验获得的上述基因与GenBank中的目标基因序列完全一致。结论：本文通过基因组DNA剪接技术成功克隆人类SIgA三个相关基因，提示此技术是合成多外显子cDNA的有效手段。
目的 本试验旨在研究hTERT基因所表达的蛋白对NSCs生物学特性的影响。方法 本试验通过脂质体转染法将构建的重组质粒pEGFP-N1-hTERT转染到大鼠胎儿NSCs中，对转染的NSCs进行体外诱导分化试验、裸鼠致瘤性试验、RT-PCR、Western-blot和流式细胞仪分析。结果 转染的NSCs在体外培养中仍具有干细胞的生长特性和多潜能性、无致瘤性，转染重组质粒的NSCs中，存在hTERT基因mRNA的转录产物和融合蛋白hTERT-GFP的表达。结论 hTERT基因对神经干细胞端粒酶活性有上调作用，可促进NSCs的体外增殖和永生化趋势。
目的：克隆内皮素1（endothelin 1,ET1）基因、表达ET1融合蛋白，以期诱导机体产生ET1抗体，中和患者体内过量的ET1。方法：根据人ET1的多肽序列合成ET1基因，将其插入到pThioHisA的EcoRI和 SalI位点，重组质粒pThioHisA-ET1进行酶切鉴定及序列测定验证后转化TOP10，IPTG诱导的重组菌经SDS-PAGE检测融合蛋白Thioredoxin-ET1的表达量；表达的融合蛋白用ProBond亲合层析纯化并经HPLC鉴测其纯度；每只小鼠按25、50、100ug/次剂量的Thioredoxin-ET1每两周免疫一次，共4次，最后一次免疫10d后制备抗血清，经Western blot和ELISA检测证明Thioredoxin-ET1融合蛋白具有ET1免疫反应原性。结果：经过质粒酶切鉴定及序列分析表明，构建了正确的融合表达载体pThioHisA-ET1，用1mmol IPTG诱导工程菌，融合蛋白Thioredoxin-ET1的表达量占菌体总蛋白的50%，多以包涵体的形式存在，包涵体经洗涤，变性和复性后，用ProBond亲合层析纯化得到了Thioredoxin-ET1融合蛋白，经HPLC鉴测其纯度为90%。制备的抗血清中ET1抗体的效价可达104。结论：应用Thioredoxin-ET1融合蛋白可以诱发机体产生ET1抗体，为研究ET1在患者体内的过量表达及对患者的免疫治疗开辟了新的途径。
单纯疱疹病毒（HSVⅠ）对宿主细胞转录及mRNA修饰翻译通路的调控是一个系统的、复杂的体系，探索其具体机制将有助于了解病毒复制过程及与宿主细胞之间的相互作用。基于2-DE分析，人胎肝细胞 L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2，hnRNP H2）在感染HSVⅠ前后存在表达差异，通过Western blot ，Northern blot等技术方法验证其在病毒复制过程中不同时段对其表达影响。
目的：利用酵母双杂交技术，筛选人类白细胞cDNA文库中能与人类CD34＋干/祖细胞异常表达蛋白hCLP46（Human CAP10-Like Protein46）相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究，深入探讨hCLP46的功能，为骨髓增生异常综合症MDS-AML的病理提供线索。方法：以pGBKT7-hCLP46为诱饵质粒筛选人类白细胞cDNA 文库,得到阳性克隆,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果：从人类白细胞cDNA文库中得到86个阳性克隆，经过验证，最终得到5个阳性克隆。对验证后的阳性克隆的外源片断进行测序及同源性分析，最终得到4个不同的候选基因序列。结论：应用酵母双杂交系统,共筛选得到4个不同的基因,其编码蛋白与hCLP46 有相互作用,可能与MDS-AML发病机制相关。
橡胶树死皮病(Tapping Panel Dryness,TPD)在世界各橡胶种植园普遍发生，给橡胶种植业带来严重的危害。为了更好地了解和阐明死皮病发生、发展的分子机制,本研究应用双向凝胶电泳技术（2-DE）比较橡胶树死皮株与健康株胶乳C-乳清蛋白质组表达的差异。采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离橡胶树死皮株与健康株C-乳清的总蛋白质，凝胶经考染显色后，用PDQuest7.40图像分析软件进行比较分析，识别差异表达的蛋白质。这些点经过胶内酶切后进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质指纹图谱(PMF)，Mascot软件搜索SWISS-PROT和NCBInr数据库鉴定蛋白质。结果：①橡胶树死皮株与健康株C-乳清凝胶的平均蛋白质点数分别为1075±35和1134±27，其平均匹配的点数分别为982±38和1008±22，组内图像匹配率达91.89﹪和88.72﹪。②橡胶树死皮株与健康株C-乳清组间的平均匹配蛋白点数为970±25。利用MALDI-TOF-MS质谱技术对40个差异明显的蛋白点进行分析鉴定，通过查询数据库鉴定了27个蛋白质。本研究建立了分辨率高且重复性较好的橡胶树死皮株与 健康株胶乳C-乳清的双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了其中表达差异的蛋白质点，这些差异表达的蛋白质可能参与了死皮发生和发展的过程。
目的：从广西眼镜蛇蛇毒中分离纯化血管紧张素转换酶抑制剂(Angiotensin Converting Enzyme Inhibitor，ACEI)，命名为降压因子（Hypotensive Factor，HF），并测定其生物活性。方法：采用Sephacryl S-100凝胶过滤，CM Sepharose F.F.离子交换层析分离纯化HF，高效液相鉴定纯度，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子量，紫外分光光度法测定HF对血管紧张素转换酶（ACE）的抑制活性。用离体兔子十二指肠平滑肌测定HF增强缓激肽(Bradykinin，BK)的效应。结果：纯化的广西眼镜蛇蛇毒HF经SDS-PAGE检测显示单一条带，测得其相对分子量约为8.2kD，由十二种氨基酸组成，蛋白回收率为5.70%。HF对ACE有明显的抑制作用，其抑制作用与剂量呈正相关。IC50为1.02?g/ml。HF能增强BK对离体兔子十二指肠平滑肌的收缩效应。结论：本方法成功地从广西眼镜蛇蛇毒中纯化出降血压成分。该成分与血管紧张素转换酶抑制剂作用相似，对血管紧张素转换酶有明显的抑制作用。
目的：建立精氨酸脱亚氨酶的高效表达菌种和纯化工艺路线。方法：人工合成编码支原体精氨酸脱亚氨酶（arginine deiminase, ADI）的基因，构建pBV220-ADI原核表达载体，转染大肠杆菌DH5α中并诱导表达目的蛋白，离子交换层析和分子筛层析法纯化目标蛋白。采用体外精氨酸降解试验测定纯化产物活性。结果：成功构建了原核表达载体pBV220-ADI，基因侧序正确。转化大肠杆菌DH5α后筛选到高水平表达目的蛋白的菌株，目标蛋白以包含体形式存在于胞浆内，表达水平超过全菌体蛋白的35%。采用盐酸胍溶解包含体、低温条件下稀释和透析的方法进行复性。顺次采用阳离子交换和凝胶过滤层析对复性液进行纯化，最终获得纯度达到95%的活性产物。活性测定表明，纯化的ADI比活性为80IU/mg。结论：成功构建了ADI的高效表达菌种，建立了目标物质的分离纯化方法。
本文利用组织培养技术实现了三种不同叶型三叶半夏的快速繁殖，并通过光合生理特征的比较对其优良单株进行了选育。结果表明：半夏能在分化培养基MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L+蔗糖3%+琼脂5.0 g/L和离体块茎诱导培养基（1/2 MS+IBA 0.03 mg/L+ NAA 0.01 mg/L+蔗糖5%+琼脂5.0 g/L+AC 0.3 g/L）上快速扩繁，继代繁殖系数为1:6.23，培养3个月后块茎的平均直径达0.88cm。 对其光合生理特征的研究结果表明：三叶半夏是一种典型的阴生植物，其光饱和点为700μmol·photons/s·m2；三种叶型的三叶半夏都存在着明显的光抑制现象，其中柳叶型最明显。本研究所选育的11个单株后代中，以桃叶2号（T2）的净光合速率和产量最高，柳叶2号（L2）对强光的耐受力最强。经过6个月的扩繁，本研究获得优良单株T2和L2离体块茎各1万颗。在温州乐清实验基地中经过1年的大田种植后得优良单株半夏块茎各100kg。
本文采用RT-PCR技术从人的胎盘组织中克隆canstatin基因，定向连接到表达载体pUΩ上，然后与筛选标记bar盒连接得到真核表达载体pUΩ-Can-Bar。采用玻璃珠转化法将该表达载体转化杜氏盐藻（以下简称盐藻），通过草丁膦固体平板筛选得到转化株，进而对转化株进行阳性鉴定。PCR结果显示，在盐藻转化株中均能够扩增出约700 bp特异的条带，而在阴性对照中没有扩增出该条带。Southern blot结果进一步证明人canstatin基因已经整合到盐藻细胞的基因组中。此外，本文对盐藻转化株的遗传稳定行进行了分析，结果表明canstatin基因能够在转化藻株中稳定遗传。人canstatin转基因盐藻株的成功制备为利用盐藻反应器大规模生产人canstatin蛋白提供了实验依据，为及早实现canstatin蛋白在治疗肿瘤上的临床应用提供了前期工作基础。
随着功能基因组学的发展，在基因组水平上获得了大量渗透胁迫相关基因。农杆菌介导的超量表达是筛选和鉴定这些基因功能最为常用的技术。以植物表达载体pBI121为基础，在不改变其氨基酸序列的基础上通过定点突变消除了其上与质粒复制和稳定性有关的trfA基因（X00713）内部的SfiI酶切位点，并在表达单元CaMV35s启动子和NOS终止子之间引入了SfiIA和SfiIB位点，改造成通用植物表达载体卡盒pBHT-5。该载体卡盒可直接用于连接Clontech SMARTTM技术构建的cDNA文库，提高了大规模构建cDNA文库基因植物表达载体的工作效率。为高通量的筛选与鉴定基因功能，从大量的渗透胁迫相关基因中筛选出具有独立知识产权的、对植物抗渗透胁迫起重要作用的新基因奠定了坚实的基础。
利用PCR方法，从东北野猪和长白猪的肌肉基因组DNA中分别扩增出一条501bp的基因片断 ，与GenBank上登载的猪α-干扰素基因序列相比,核苷酸同源性达到98.4%以上。以其中野猪α-干扰素基因片断为参考模板，经过密码子优化、5?和3?区域的mRNA二级结构优化，全基因合成得到编码野猪α-干扰素基因成熟肽的基因。克隆该基因到原核表达载体pWL之中.随后转化至宿主菌DH-5α。经过SDS-PAGE电泳检测，发酵后的重组野猪IFN-α-干扰素基因的蛋白表达量大于25%。复性纯化后的重组蛋白，经过VSV-WISH系统检测，其生物活性为4.45×106IU/mg。
纳米材料因其大比表面积、强吸附能力、高机械强度及易分散等特性而备受催化剂载体领域研究者的关注。本文采用纳米SiO2为载体，通过化学修饰将其用于共价键合法制备固定化酶。发现纳米载体可负载1/8(w/w)的葡萄糖苷酶，且回收率达70%。所得的固定化生物催化剂可用于乙酸乙酯-水双相体系中水解大豆异黄酮，其稳定性比游离酶有明显改善。但纳米颗粒易吸附于界面上，不利于反应结束后两相液滴的聚并及产物的分离。
为在乳酸菌中表达幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）中性粒细胞激活蛋白(NAP)，口服免疫小鼠后检测其免疫原性。在实验中利用了分子克隆技术构建携带nap基因的重组原核表达质粒pNICE:secnap,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株，筛选鉴定阳性菌落，诱导表达的NAP蛋白用SDSPAGE和Western blot进行鉴定。将雌性ICR（CV级）小鼠随机分为4组，分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:secnap的乳酸菌、灭活的H.pylori 灌胃。免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生。成功扩增了nap基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:secnap，转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr约17kDa的重组蛋白，表达量约占菌体总蛋白量的9.5%，表达的蛋白能与兔抗H.pylori 血清特异性反应,具有良好的免疫原性。携带pNICE:secnap质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组，与灭活H.pylori组没有明显的差异，但其刺激产生的IgA水平明显高于其他组。以上结果说明表达NAP蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后，能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA，对幽门螺杆菌疫苗的研究开发具有理论意义。为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和H.pylori口服疫苗的开发提供了一定的实验基础。
用化学修饰法及其修饰动力学对米曲霉GX0011β-果糖基转移酶的活性中心结构进行了研究。结果表明：NBS、PMSF、EDC能显著抑制酶的活性，底物对这些抑制有明显的保护作用，且残留酶活与修饰剂的浓度相关，抑制均符合拟一级动力学规律，进一步动力学分析，初步认定该酶活性中心包括至少一个丝氨酸（或苏氨酸）、一个色氨酸和一个天冬氨酸(或谷氨酸)残基。pCMB、TNBS能显著抑制酶的活性，但底物对抑制无明显保护作用，推断半胱氨酸和赖氨酸残基可能与维系酶活性中心构象有关，但不是酶活性中心基团。DEPC、AA和NAI对酶的活性抑制作用不明显，排除了组氨酸、精氨酸和酪氨酸残基是该酶活性中心必需基团的可能。
以产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca) ME-UD-3为出发菌株，经紫外线及硫酸二乙酯复合诱变后分别在葡萄糖浓度逐渐提高的液体培养基中进行富集培养，筛选获得了一株耐高糖的2,3-丁二醇高产突变菌株K. oxytoca ME-UD-3-4；该菌株的初始葡萄糖耐受浓度从出发菌株的120g/L提高到300g/L以上，在初始葡萄糖浓度为95 g/L的条件下发酵培养，与出发菌株相比发酵时间缩短了8h，2,3-丁二醇的产量由原来的38.5g/L提高到43.0g/L，生产强度从0.80 g/L·h提高到1.08 g/L·h，转化率达到了理论值的91%。
金黄色葡萄球菌的微生物病原特性非常复杂并且不断地产生抗生素抗性，目前迫切需要增加对金黄色葡萄球菌的了解。它所引起的疾病与大量毒力因子相关，这些毒力因子的表达是受多个基因调控，其中agr（accessory gene regulator，附属基因调节）是最主要的一个。由于agr系统与人类的多种疾病有关，研究的较为深入，现已成为一个理解群体感应激活和抑制机制的模型系统。agr系统以及其它菌的群体感应系统已经引起了越来越多研究者的注意，本文对agr系统的研究现状、研究过程中发现的问题及其潜在应用价值作了深入地探讨。
阳离子抗菌肽(Cationic antibacterial peptides)是生物体抵御外源性病原微生物的入侵而产生的一类小分子阳离子多肽，与传统的抗生素相比具有分子量小、抗菌谱广、热稳定性好、抗菌机理独特等优点。本文结合当今阳离子抗菌肽的研究现状和发展前景，从阳离子抗菌肽的理化性质、作用机理及其设计合成等方面进行了综述。
乙型肝炎e抗原（HBeAg）是由HBV DNA C基因区编码的一种非颗粒性的分泌型核壳蛋白，临床上将其作为判断HBV活动性复制的指标之一。HBeAg是重要的生物原材料，广泛用于HBV感染者血清学检测的相关诊断用品的制备。重组HBeAg的表达和纯化技术较为成熟，已经在各种表达系统中成功地表达了目的蛋白。而影响其表达的关键因素包括前C区重要位点变异、载体选取以及RNA干扰（RNAi）的影响作用等。因此，提高重组HBeAg的表达量和纯度，避免与HBcAg交叉反应才能满足相关诊断制品的要求。高质量重组乙肝e抗原的获取，能为改善相关诊断制品奠定物质基础，为开发新型HBV治疗和预防性疫苗提供了依据，同时也为HBeAb检测方法学的优化提供可能。
由于在经济生产中的重要意义，猪精液冷冻保存技术成为研究的焦点。早期的研究多集中在对冷冻保护剂和冷冻方法的筛选与优化上，为猪精液冷冻保存进行了深入的探索。但研究表明，无论采用何种冷冻保护剂、何种冷冻方法都损害了精子的受精能力，并伴随有蛋白质的丢失、表达量的改变、功能活性的增减等，这种研究现状迫使该领域的研究向充分揭示冷冻对精子损伤的机理方向转移，希望通过揭示冷冻保存所导致的蛋白质结构和功能改变的实质，充分阐明冷冻损伤的机理，为猪精液冷冻保存提供理论依据，并最终促进猪精液冷冻保存技术的快速发展。
在我国目前的环境条件下，蚜虫作为农业害虫和植物病毒的传播者，已经成为严重威胁农业生产发展重要的害虫之一。抗蚜植物基因工程可以有效抑制蚜虫危害，并且随着对生命科学的深入理解和技术手段的日益成熟，得到广泛的关注和重视。抗蚜植物基因工程的核心是抗蚜基因的筛选、转抗蚜基因植物的培育以及生物安全性。本文讨论了多种抗蚜基因，并重点论述雪花莲凝集素和苋菜凝集素基因在目前科学研究和生产实践的应用。
单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一类人畜共患的食源性致病菌。近年来其检测技术取得了迅猛的发展，本文对目前使用的基于培养、免疫学和分子生物学技术的三大类单核细胞增生李斯特菌检测方法进行了综述，同时对单核细胞增生李斯特菌检测的新策略进行了展望。
SMART (Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript) 技术是一项应用于生物科学研究领域的方法，能保证全长cDNA的获得，目前尚未见有关该技术的综述发表。因此，本文将系统阐述SMART的原理、方法及应用研究进展。作者经过广泛查阅近年来相关国内外文献，分析相关研究结果，综述SMART技术的最新进展。随着分析的深入，作者发现SMART技术应用领域在不断扩大，不仅用于全长cDNA文库构建，而且渗透基因研究的诸多方面。SMART技术确实是非常有效和实用的一项技术，但同时也存在一定问题需要改进。
2,3-丁二醇是一种重要的化工原料，可广泛应用于多个领域。二战期间由于合成橡胶需要大量1,3-丁二烯，2,3-丁二醇生产空前发展。近年来，由于聚对苯二甲酸丁烯树脂、γ-丁内酯，Spandex弹性纤维及其前体的需求增长，2,3-丁二醇的需求和产量也稳步增长。多年来，生物法生产2,3-丁二醇虽然得到了广泛的研究，但一直没有实现工业化。本文从产生2,3-丁二醇的菌种及2,3-丁二醇的生理意义、代谢途径、旋光异构体的形成机理、影响发酵的因素与产物的提纯等方面对生物法生产2,3-丁二醇进行了综述并提出了生物法生产2,3-丁二醇要解决的几个问题。
生物柴油是清洁的可再生能源，具有良好的环保性能。发展生物柴油对于调整农业结构、增加农民收入、改善生态环境等具有重要意义。当前，我国生物柴油产业发展处于起步阶段，需要明确发展思路和政策：开展资源调查，制定产业发展规划；加强技术研发；培育持续稳定的市场需求，疏通销售渠道；制定生物柴油质量标准和生物柴油标准体系；加强部门之间的协调，处理好国内几大石油公司之间及其与民营企业、其他国有企业以及外资企业的关系。
