突变株的构建是细菌基因功能研究的前提。本研究构建了一个可用于布鲁氏菌突变株构建的自杀质粒。在pUC19质粒的多克隆位点插入卡那霉素抗性基因，在该基因两侧添加多个酶切位点，构建成为pUC19K。利用该质粒，我们构建了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因的突变株。结果表明，利用该自杀质粒，通过一轮筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株。pUC19K质粒的构建及成功应用，为布鲁氏菌突变株的构建提供了一个快速有效的手段，也为布鲁氏菌的基因功能研究奠定了基础。
建立稳定表达 -synuclein基因的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞，，鱼藤酮作用1、2、4周后分别提取各组细胞线粒体，检测其complexⅠ功能、线粒体膜肿胀度和超氧阴离子的含量。结果显示在1、2周时过表达 -synuclein基因的细胞与对照组细胞相比，前者的complexⅠ的活性高，线粒体膜肿胀度轻，线粒体超氧阴离子的含量少。但4周后，前者的complexⅠ活性明显低于后者，且线粒体膜肿胀度及线粒体内超氧阴离子的含量均显示前者高于后者，也是前者多于后者。由此可见过表达 -synuclein基因的细胞在早期对鱼藤酮的损伤有一定的抵抗作用，但长期作用后可能有加重损伤的作用。提示PD患者多巴胺能神经元内 -synuclein的增高可能对小剂量鱼藤酮导致的线粒体损伤存在双重调节作用，初期可能由于 -synuclein上调引起的预适应改变起到一定的保护作用。而失代偿后，可能由于神经元内积累的 -synuclein聚变，对线粒体膜稳定性的损伤，导致神经元变性死亡。
将编码融合蛋白GST-SUMO-MT的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET-28a中，构建重组表达质粒pET-GS-MT并转化到大肠杆菌Origami（DE3）中。20℃，1mM的IPTG诱导20h后，获得分子量约为43Kd的融合蛋白，表达量占菌体上清总蛋白的38.4％。利用谷胱甘肽交联琼脂糖（Glutathione Sepharose 4B）凝胶柱和Sephardex G-25分子筛联用可以得到纯度为95%以上的融合蛋白，得率约为70mg/L。该融合蛋白可与GST抗体产生阳性反应。融合蛋白GST-SUMO-MT可以显著提高宿主对Cd2+、Zn2+和Cu2+离子聚积的能力，其耐受能力比对照组分别提高4.2倍、4倍及1.6倍。此外，原子吸收光谱法测定，每分子GST-SUMO-MT可以结合2-3个Cd2+离子。
应用搭桥PCR技术，将肿瘤坏死因子-α基因的前4位氨基酸的编码序列删除，对hTNF-α的第8/9/10/29/31/157位氨基酸的密码子进行定点突变，将突变后的cDNA插入到pBV220载体中构建重组质粒pBV220-tnf-αD4。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α，筛选获得了高效表达TNF-αD4突变体的工程菌，表达的重组蛋白约占菌体蛋白总量的45%左右，经硫酸铵沉淀和阳离子交换层析纯化得到纯度达90%以上的重组目的蛋白，比活性达到8×107。用单甲氧基聚乙二醇-丁醛（mPEG-ButyrALD）对TNF-αD4进行修饰，经阳离子交换层析纯化得到纯的mPEG-TNF-αD4，纯度达85%以上，比活性达到8.6 ×107，系统毒性也有了明显的降低。此项工作通过应用PEG修饰肿瘤坏死因子-α，为降低其毒性，增加其活性进行了有益的尝试，为其进一步研究与开发奠定了基础。
利用PCR引物延伸的方法合成了分子伴侣Sumo和抗真菌肽Drosomycin的融合基因，将其插入到表达载体pET-3c中，构建出重组表达质粒pET-3c-SD，并转化至大肠杆茵BL21(DE3)中。筛选重组转化子，进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析。结果表明在30℃条件下，用0.5mM IPTG诱导3h 后，目的蛋白表达量最高，约占菌体总蛋白的22％，其中可溶性蛋白超过了目的蛋白的80%。经过Ni-NTA纯化后，融合蛋白的纯度可达95％以上。抑菌实验表明，该融合蛋白对白僵菌（Beauveria bassiana）具有一定的抑真菌活性。本研究证实了使用分子伴侣Sumo融合表达对具有多个二硫键的小分子多肽的表达是非常有效的。
克隆得到了柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌(Streptomyces coeruleorubidus) SIPI-1482位于dnrX下游的新基因dauW，其位于基因组上dnrX和drrB之间，GenBank中Blast发现它与dnrW有较高的同源性，将其命名为dauW，并提交GenBank获得登录号EF523565，根据保守域推测dauW所编码的蛋白属于FAD依赖的氧化还原酶类。将dauW分别克隆至表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)，在宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导后，实现了在大肠杆菌中的表达。初步实验表明dauW在BL21(DE3)中的表达能增加宿主对柔红霉素的抗性，可能与天蓝淡红链霉菌对柔红霉素的自身抗性有关。
以获得大量胞外青霉素酶为目的，将青霉素酶基因克隆至表达载体pWB980中，并转化到双蛋白酶缺陷的Bacillus subtilis DB104。重组菌在LB培养基中培养24小时后， SDS-PAGE分析发现目的蛋白分子量为28kDa，酶活力为339U/mL；通过筛选7种不同的发酵培养基发现4#培养基更利于青霉素酶的表达，最大酶活力为1580U/mL，较优化前提高了3.66倍，并对该重组菌进行了7L罐放大实验，结果显示在培养24小时产酶达到高峰，酶活力为1255.8 U/mL。
从南极深海底泥中分离筛选得到一株中性嗜盐菌Chromhalobacter sp.NJS-2，以该菌株基因组为模板，利用PCR技术扩增出ectABC基因，基因全序列大小为2378bp。OMIGA软件分析该基因序列上含有三个阅读框，大小分别为576bp、1272bp和393bp，预测其分别编码二氨基丁酸乙酰转移酶（EctA）、二氨基丁乙酸转氨酶（EctB）和四氢嘧啶合酶(EctC)。将二氨基丁酸乙酰转移酶ectA基因的PCR扩增产物克隆至表达载体pET-his, 构建重组表达载体pET-his-ectA,并经酶切、PCR鉴定和测序验证，结果表明其目的基因的插入位置、大小和读码框均正确。SDS-PAGE分析，出现大小约21kDa的目的蛋白条带。
植物真菌病害给农业生产带来了巨大损失，因此对生物农药的开发迫在眉睫。从堆肥中分离得到一株解淀粉芽孢杆菌，它具有强烈的抗真菌活性。其发酵液经硫酸胺沉淀得到粗提液，粗提液经Hiprep 26/10 Desalting，HiLoad 26/10 Q Sepharose和HPLC多步柱层析，分离纯化得到一种抗真菌活性物质。ESI-MS质谱法测得其分子量为1498 Da。经活性检测发现，该纯物质对尖孢镰刀菌、草莓蛇病菌等植物病原真菌具有很强的抑制作用，对毛霉、黑曲霉等食品腐败菌也有抑制作用。经过显微镜观测，该物质可造成草莓蛇病菌菌丝生长异常，表现在菌丝弯曲，顶端膨大，分生孢子数量减少。
以实验室筛选到的一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）B-1为出发菌株，采用紫外诱变技术对出发菌株进行反复诱变，得到一株能够利用玉米原料生产γ-聚谷氨酸的优良高产菌株B-115，摇瓶发酵γ-聚谷氨酸的产量由原菌株的12.5g/L提高到19.5g/L。再以该菌株为研究对象利用响应面法进行碳源、氮源、谷氨酸钠、金属离子等发酵条件的优化实验，经48h摇瓶发酵，γ-聚谷氨酸产量达到40.98g/ L。
利用易错PCR定向进化扩展青霉脂肪酶（PEL），获得了一株热稳定性有所提高的随机突变体（ep8）,ep8包含有一个氨基酸的改变。为进一步提高其热稳定性，作者利用重叠延伸PCR法，以ep8基因为模板，将第202位赖氨酸突变为丙氨酸（K202A），构建表达质粒pAO815-ep8-K202A。并将其引入毕赤酵母GS115构建叠加突变体(PEL-ep8-K202A)。同时以野生型lip07为模板构建单点突变体:PEL-lip07-K202A。15% SDS-PAGE 结果分析表明突变体分子量与野生型一致，约为28KD. 表达产物热稳定性分析结果表明: 野生型（PEL）的Tm值为39.03℃，而以野生型为模板进行定点突变得到的单点突变酶（PEL-lip07-K202A），其Tm却降低了2℃，为37.08℃。叠加突变酶(PEL-ep8-K202A)的Tm为41.66℃, 比野生型酶提高2.63℃，比随机突变体ep8生产的酶（PEL-ep8）的Tm提高了1.21℃。
本文考察不了同温度（10℃～30℃）对硅藻(Nitzschia laevis)合成二十碳五烯酸(EPA)的影响，对不同温度下的发酵过程进行动力学特性分析。在此基础上，提出了EPA合成的变温培养方法：延滞期及对数期初期温度控制在25℃，从对数期中期开始在20℃条件下进行培养。采用此变温培养进行发酵，EPA的含量和产量分别达到了6.00%和291.60 mg·L-1，较采用单一温度(25℃)发酵的最大值分别提高了24.07%和18.81%。
投加硝化菌是有效降解水体中亚硝酸盐的方法之一，而作为商品化的硝化菌产品却非常少见。究其原因，保藏过程中的菌体衰亡速率过快是重要影响因素之一，而有关其保藏衰亡的文献几乎没有。本文通过对影响硝化菌衰亡因素及其动力学的研究，发现温度、pH和离子强度是影响其衰亡的重要因素，通过研究使得硝化菌液的衰减指数（Km）由原有的0.25降至0.013，半衰期延长至55d，为硝化菌的产业化提供了理论依据和实现方法。
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术（Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP）应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因（tlh）设计四条特异性引物（两条内引物和两条外引物）进行LAMP扩增，对扩增反应进行优化，最佳反应时间为60 min，反应温度为60 ℃。对12种细菌共28株菌进行LAMP扩增，仅14株副溶血弧菌得到阳性扩增结果，证明引物具有很高的特异性。副溶血弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为90 fg和24 cfu/mL。对模拟食品样品进行直接检测，检测限为89 cfu/g。结果表明，该方法检测副溶血弧菌特异性强、灵敏度高，并且操作简便、检测成本低，1 h即可完成，有望发展成为快速检测副溶血弧菌的有效手段。
为建立分辨率高、重复性好的血清样品双向电泳技术，本文从血清样品的水化、等电聚焦、胶条的平衡、胶条的染色等几个方面对双向电泳操作条件进行了分析。结果表明采用以下的操作过程可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳结果：样品水化2小时（25℃)；胶条泡涨12-16小时(25℃)；17cm胶条的等点聚焦程序采用 250V线性1小时/1000V线性1小时/4000V线性2小时/8000V线性3小时/8000V线性10小时/500V快速0.5小时/，11cm的胶条的等点聚焦程序采用250V慢速4小时/1000V快速2小时/4000V快速1小时/8000V快速2.5小时/8000V快速7小时/500V快速30分钟；两次平衡各15-20分钟；银染条件为固定两小时或过夜，敏化50-60分钟,定影30-40分钟，显影10分钟左右,终止10分钟）。这一研究对利用双向电泳分析血清蛋白具有很好的参考价值。
利用统计学实验设计（RSM）对能够利用甲烷的假单胞菌菌株ME16主要培养条件进行了优化。以液体无机盐和甲烷气体作为培养基分别进行了温度、接种量、甲烷含量和培养pH对细菌生长影响的研究，并在此基础上，利用响应面法分析优化了ME16菌株的主要培养条件，得到最佳培养条件为：温度29.4℃，接种量1.8%，甲烷含量25%。采用优化培养条件进行培养，细菌生物量增大0.8倍，达到稳定期的培养时间缩短了50h。该菌株初步应用于甲烷气体的脱除，脱除率达65.7 %，表明该菌株能良好的脱除空气中甲烷。
摘 要 探讨人羊膜间充质细胞（human amniotic mesenchymal cells，hAMCs）向心肌细胞分化的能力。采用胶原酶消化法分离hAMCs，用流式细胞仪进行表型鉴定；用5-氮杂胞苷和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）诱导hAMCs向心肌细胞分化，免疫荧光染色法检测诱导后细胞中特异蛋白结蛋白和α-辅肌动蛋白的表达，RT-PCR检测心肌特异性转录因子Nkx2.5 、GATA-4和心肌特异性收缩蛋白α-肌球蛋白重链（α-myosin heavy chain，α-MHC）mRNA的表达。结果显示：①hAMCs原代培养至第6 d，贴壁细胞汇合度可达80%，呈漩涡状生长。传代后hAMCs增殖迅速，3~4 d细胞汇合度可达100%，细胞呈梭形或多角形。②hAMCs表达CD44和波形蛋白，不表达CK19。③hAMCs经诱导分化8~10 d后细胞排列紧密，多为长梭形。③hAMCs诱导2 w和4 w表达α-辅肌动蛋白和心肌特异性转录因子Nkx2.5。④诱导前后的hAMCs均表达结蛋白和GATA-4，但均未见α-MHC表达。说明hAMCs具有向心肌样细胞分化的能力，可望成为细胞心肌成形术（cellular cardiomyoplasty，CCM）的候选细胞。
CAPN1是影响肌肉嫩度的数量性状位点 (QTL)的候选基因。根据GenBank发表的普通牛CAPN1基因序列设计特异性引物，以天祝白牦牛cDNA为模板，分段进行PCR扩增，克隆，测序。应用生物软件BioEdit对各测序结果进行序列拼接共获得牦牛CAPN1 cDNA 片段2267bp，其中包含一个2151bp的完整的开放阅读框(ORF),以及3’和5’末端非编码区的部分序列(77bp和166bp) 。分析表明：牦牛CAPN1基因编码区全长2151bp,共编码716个氨基酸。与已报道的牛，猪，人小鼠的序列进行比较，核苷酸同源性分别为99.3%，93.9%，90.0% ，85.5% 。预测氨基酸的同源性分别为99.4%，96.1%，94.6%，89.0%，并且对牦牛CAPN1四个结构域分别进行NCBI BLAST发现四个结构域在以上四个物种中都显示出很好的保守性，最为保守的在结构域Ⅳ(>96%)。牦牛与牛产生的 14个核苷酸突变中，有3个产生了氨基酸突变，均发生在结构域Ⅲ。构建分子系统进化树表明：聚类结果与传统分类学相符。
庆大霉素是氨基糖苷类广谱抗生素，其不仅用于临床治病，而且广泛应用于畜牧业。由于其发酵周期长，产素率低，生产成本高，因此改进生产方法势在必行。本文报道了在绛红色小单孢菌产生庆大霉素的培养过程中，添加一定量的甘氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、酪氨酸能够有效地提高微生物细胞的代谢能力，缩短发酵培养周期，提高产素率。本方法是在小试（摇瓶）成功基础上，用5L玻璃发酵罐运转一个多月，取一个月的平均罐批数据表明：新方法较原工艺发酵周期缩短30% ~45%，罐批产量增加14% 左右，产素率提高30 % ~95%（因菌种生产能力不同而异），产品质量符合中国药典2000版（CP2000）、英国药典2000版（BP2000）、美国药典26版（USP26），生产成本大幅度降低，具有很强的市场竞争力。
综述了杂质对蛋白质晶体生长影响研究领域的进展情况. 对可能的杂质来源以及杂质对结晶过程的影响进行了介绍.重点介绍了和结晶蛋白质分子结构相似的杂质分子的影响, 包括晶体成核、生长形态、表面形貌、生长动力学、质量等，以及杂质在晶体中的重新分配.
3-脱氢莽草酸，是芳香族氨基酸生物合成代谢途径中一种重要的中间产物，可作为一些化学合成制剂和药物中间原料。这样以无毒可再生物质为起始原料的合成方法与传统的有机合成化学制剂的方法相比，对环境更加有利。此外，它还是一种十分有效的抗氧化剂。工业上一般采用化学合成法和发酵法来生产3-脱氢莽草酸，随着代谢工程的兴起，使得更加理性改造菌株成为可能，这更加促进了发酵法的广泛应用。本文主要介绍了代谢工程在生物合成3-脱氢莽草酸生产菌改造中的应用情况，其中涉及3-脱氢莽草酸生物合成途径中相关基因及其酶的调控、中心代谢途径的改造和3-脱氢莽草酸合成支路的修饰等，并探讨了将来的发展前景。
