摘要 目的：对胰岛新生相关蛋白（Islet neogenesis associated protein ,INGAP）进行表达、纯化，并检测其免疫活性。方法： INGAP基因片段插入表达载体pET22b(+)，在E.coli BL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8M尿素溶解，Heparin Agrose亲合柱层析为第一步纯化，Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化，HPLC测定INGAP蛋白的浓度，将纯化的INGAP蛋白经注射途径免疫家兔，制备兔抗INGAP血清，采用免疫双扩、ELISA及Western Blot分析INGAP的免疫活性。结果INGAP以包涵体形式表达，表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析二步组合纯化目的蛋白，经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98.81%，表达及纯化的INGAP具有良好的免疫活性。
α-酰胺化是神经和内分泌系统中许多生物活性肽重要的翻译后加工过程，C末端α酰胺基团的存在对于许多生物活性肽的生物活性极为重要。本研究通过PCR扩增获得了编码大鼠α-酰胺化酶的基因，以pET-30a为载体，重组质粒pET-A转化至 E.coli BL21成功表达了α-酰胺化酶。采用Ni2+-NTA亲和层析纯化重组蛋白。该蛋白具有催化三肽底物((Dns-Tyr-Val-Gly)成为酰胺化二肽 (Dns-Tyr-Val-NH2)的酶活性，这表明重组蛋白是α-酰胺化酶，有可能用于生物活性肽的酰胺化研究。
为了构建人CD46（hCD46）启动子指导目的基因表达的真核表达载体，提取HeLa细胞基因组DNA，用PCR扩增出hCD46基因的启动子区域，序列分析结果表明其与GenBank中hCD46基因5’端某片段的同源性为99.9％。用此启动子替换pcDNA3EGFP中的CMV启动子，并在hCD46启动子和EGFP基因之间插入兔β-球蛋白基因第二内含子（RGI），得到的重组表达载体转染CHO和SP2/0两种鼠源细胞，流式细胞术检测表明CHO细胞EGFP的表达量高于SP2/0细胞，表达特性与人体CD46相似；RGI可以增强EGFP的表达量，但不改变其表达的组织特异性，提示克隆的hCD46启动子可以用于研制模拟人体CD46基因表达特性的转基因小鼠。
摘要：目的 研究人结缔组织生长因子（hCTGF）对细胞的增殖作用及其骨损伤促愈合的生物学作用。方法 利用真核基因导入系统，转染具有分化潜能的成纤维细胞，并导入骨折实验动物模型，利用分子生物学和临床骨科技术检测分析，获得数据。结果 明确了hCTGF对细胞的增殖作用，表明了hCTGF以基因治疗为手段具有修复骨损伤的生物学活性，为该因子在临床上治疗骨损伤提供新的活性因子和新的治疗方法。
摘要：目的：气道给予12－烷基化壳聚糖纳米粒（12－ACSs）包裹的反义内皮素转换酶（ECE）核酸表达质粒，观察对OVA致敏的小鼠变应性气道炎症的影响。方法：通过透射电镜观察12－ACSs/ 反义 ECE质粒复合体纳米粒的形成、形态及大小；应用凝胶阻滞、结合平衡、DNA沉淀和DNA酶消化实验等检测12－ACSs对反义ECE核酸表达质粒的结合保护作用；通过MTT实验检测12－ACSs对细胞的毒性;通过离体培养细胞及活体动物转染实验观察12－ACSs能否携带反义ECE核酸表达质粒成功转染。结果：电镜观察示纳米粒粒径在100－150 nm之间。12－ACSs与反义ECE核酸表达质粒在质量比为1：1时，全部反义ECE质粒被结合。应用DNase I消化后可见，12－ACSs可保护核酸免受破坏。MTT检测结果显示12－ACSs 对16HBE细胞在低浓度下几乎没有毒性。12－ACSs包裹的反义ECE核酸表达质粒的纳米粒能成功转染离体培养的气道上皮细胞及活体动物。结论：12－ACSs能够成功包裹反义ECE质粒并且成功转染16HBE及小鼠，其有可能作为一种基因治疗的载体选择之一。 关键词：哮喘 壳聚糖 纳米粒 内皮素转换酶 基因治疗
分别提取烟草普通花叶病(TMV)和烟草黄瓜花叶病（CMV）的病毒RNA。经反转录和外壳蛋白阅读框PCR扩增，获得TMV和CMV外壳蛋白基因cDNA, 分别进行两种病毒已知株系cDNA序列比对获得各自的保守序列，设计干涉序列，将干涉片段扩增产物连接到pMD18-T的相邻酶切位点，制备融合序列，并将其正向和反向序列插入pUCCRNAi载体,再转化到pCAMBIA2300-35S-OCS表达载体中。利用农杆菌LBA4404侵染烟草K326,获得3份含有TMV和CMV外壳蛋白基因干涉序列的转化材料，经分子鉴定证实干涉序列已导入烟草，并采用荧光定量PCR技术对其mRNA表达差异进行分析。抗病性调查表明转化烟株对TMV和CMV抗性都显著增强。
将海藻酸盐凝胶包埋法与交联法和聚电解质静电自组装覆膜法相耦合，对含有海藻糖合酶活性的亚栖热菌的透性化细胞进行了固定化研究。结果表明，利用重氮树脂和聚苯乙烯磺酸钠对海藻酸凝胶微球交替覆膜，可以显著提高凝胶微球在磷酸盐缓冲液中的稳定性，以碳二亚胺对固定化细胞进行交联处理则可以提高固定化细胞中海藻糖合酶的热稳定性。透性化细胞经包埋－交联－覆膜耦合固定化后，酶活回收率为32％，最适酶反应pH值由6.5左右升至7.0左右，最适反应温度未变，仍为60℃。所得固定化细胞间歇反应时，催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率可达60％，重复使用4次（每次50℃、反应24h），酶活损失小于20％，转化率可保持在50％以上。
在费氏丙酸杆菌（Propionibacterium freudenreichii）发酵生产维生素B12的研究中，分离到脱氧腺苷钴胺素合成途径中一种关键而稳定的中间产物。该物质在维生素B12发酵过程中大量积累，当添加前体物质5，6-二甲基苯并咪唑(DMB)后可完全转化为脱氧腺苷钴胺素，光谱和质谱分析其应是脱氧腺苷钴胺素合成途径的中间产物－腺苷钴啉醇酰胺。对此中间产物的研究可深入了解厌氧合成脱氧腺苷钴胺素的代谢途径，并运用代谢调控手段优化工艺，指导厌氧发酵生产维生素B12的生产实践。
以甘蔗渣半纤维素为碳源，从垃圾场土壤中分离到6株分解半纤维素的菌株。通过固态发酵的木聚糖酶活力比较筛选到1株木聚糖酶活力较高的菌株。该菌株18S rDNA序列与曲霉（Aspergillus sp.）的同源性达97%，根据对菌株形态学分析和18S rDNA序列分析的结果，将该菌株鉴定为曲霉HQ3。HQ3的最佳产酶条件为：甘蔗渣:麸皮为7:3（W/W），固液比为1:4（W/W），尿素0.4 %，pH7.0，温度30℃，发酵产酶时间4 d。在最佳产酶条件下，其木聚糖酶活最高可达3421U/g干曲。
应用元素衡算和代谢衡算方法，建立用重组大肠杆菌发酵生产类人胶原蛋白表达期的数学模型，并利用非线性优化法对模型中的未知参数进行估算。结果表明该模型与重组大肠杆菌的生长、代谢动力学模型一致，且模型的关键计算参数αh、αp和mx分别为1.173 molo C-mol-1、293.814 molo C-mol-1和17.878 molo C-mol-1oh-1。该模型能较好地预测重组类人胶原蛋白表达期中的宏观反应速率，且在类人胶原蛋白发酵表达期，必须通过控制葡萄糖的补料速率来控制菌体的生长，当?=0.04 h-1时，类人胶原蛋白的比生成速率达最大值。
实验研究了初始底物浓度对序批式培养光合细菌生长、降解及产氢过程的影响，根据最大比生长速率实验数据拟合得到其关于初始底物浓度影响的关联式，并在建立的修正Monod模型基础上建立了光合细菌比生长速率、基质比消耗速率和比产氢速率关于底物初始浓度影响的数学模型，模型预测值与实验结果在光合细菌生长期和稳定期内得到较好吻合，反映了光合细菌生长、降解和产氢过程中受底物初始浓度限制性和抑制性影响的基本规律。分析发现光合细菌生长、降解基质和产氢过程中最适底物浓度为50 mmol/L，初始底物浓度低于或高于该浓度时，光合细菌生长、降解及产氢过程都受到限制性或抑制性影响，且抑制性影响较限制性影响效果更明显；底物比消耗速率受初始底物浓度影响较小。
目的：原核表达靶向性阳离子多肽(KH)20-EGF，并对其DNA包装能力进行检验。方法：构建pET28a-(KH)20-EGF 原核表达载体。进行酶切和测序鉴定。转化BL21（DE3）后，经过IPTG诱导表达和NTA树脂纯化得到粗提蛋白产物，SDS-PAGE和Western blot鉴定后，将蛋白与质粒DNA混合，用于凝胶阻滞实验分析。结果：重组(KH)20-EGF的产量约为300μg/L。SDS-PAGE和Western blot表明该蛋白的凝胶迁移有些滞后；凝胶阻滞试验发现(KH)20-EGF对质粒DNA的迁移有阻滞作用。结论：成功表达非病毒载体(KH)20-EGF并确认其DNA包装能力。
本研究采用毛细管电泳技术，构建并优化了荧光标记复合PCR同时扩增多个微卫星位点。主要过程为：首先根据设计所扩增微卫星位点的期望长度，将9个微卫星位点分成两组，5个位点用FAM（蓝色）标记，4个位点用HEX（绿色）标记；两种荧光类型分组优化，用琼脂糖胶电泳检测。其次，荧光标记的复合PCR扩增8个中华绒螯蟹样品的9个微卫星位点，采用ABI3730xl毛细管电泳检测，以ROX500（红色）为长度标准物，结果经Genemapper3.5软件 分析，检测结果表明毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物不仅精确读取微卫星位点的长度（分辨率高达1bp），还能区分微卫星位点复制时滑链所引起的“回声斑”；调整各微卫星位点引物比列使所有位点扩增强弱均匀。最后，逐一检测复合PCR基本参数（dNTP浓度、 PCR程序和模版DNA用量）对复合PCR产物的影响，优化PCR。结果表明通过毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物来读取微卫星位点的基因型具有精确性、高效性和稳定性。
采用响应面法对美丽镰刀菌（Fusarium mairei K178）发酵合成紫杉醇途径中一些可能的前体进行优化研究。首先采用Plackett-Burman法对8个因素进行了筛选，结果表明，苯丙氨酸，苯甲酸钠和乙酸钠三个因素对紫杉醇产量影响较大。在此基础上，再通过Box-Behnken设计，利用Design-Expert软件进行二次回归分析，得到各因素的最佳浓度为：苯丙氨酸2.8mg/L,苯甲酸钠31.8mg/L,乙酸钠3.3g/L。在优化条件下紫杉醇的产量达到242.6μg/L，较前体单因素实验最高值提高15.6%。
本文采用高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）定量测定发酵液中S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）的含量。结果表明，S-腺苷-L-甲硫氨酸浓度在0.1~1.0g/L时，其峰面积（Y）与相应的浓度（X）呈线性关系，线性方程为Y=13.937X－0.1949，相关系数为0.9969。S-腺苷-L-甲硫氨酸的平均回收率为99.89~101.7%，相对标准偏差为0.48~1.36%。该方法精密度、准确度好，稳定性高，能简便、快速、准确地测定发酵液中S-腺苷-L-甲硫氨酸的含量。
以马传染性贫血病毒（equine infectious anemia virus, EIAV）基因转移载体pcPPTWPRE为基础，用含不同长度片段的鸡β-肌动蛋白启动子替换原有的人巨细胞病毒立即早期启动子（CMVIEp）启动外源基因的表达，分别构建了2个基因转移载体，含部分第一内含子的pWCAGP0.8和含全长内含子的pWCAGP1.6。连同在其它研究中构建的不含内含子的质粒pcPPTWCAG（另文发表），采用磷酸钙法分别转染HEK293细胞和DF-1细胞， 利用荧光显微镜观察报告基因eGFP蛋白的表达。并利用流式细胞仪定量。统计学分析结果表明，在HEK293细胞中，pcPPTWCAG、pWCAGP0.8和 pWCAGP1.6表达阳性率分别为47.9%、46.1%和23.8%，转染后48h，收获细胞，利用流式细胞仪比较转染细胞中EGFP表达阳性细胞的百分率。结果表明，在HEK293细胞中，pcPPTWCAG、pWCAGP0.8 和pWCAGP1.6的阳性细胞分别占计数细胞的47.9%、46.1%和23.8%；在DF-1细胞中，依次分别为12.4%、9.5%和4.2%，pcPPTWCAG与pWCAGP1.6差异显著。本研究表明不含内含子的EIAV载体质粒表达EGFP的能力高于含部分和全长内含子的载体。
以烟碱为唯一碳源，从湖南张家界烟草种植地的土壤中分离得到一株降解烟碱能力较好的菌株。经常规形态观察和生理生化实验结果表明，该菌为放射形土壤杆菌或根癌土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter／tumefaciens)。研究表明，该菌的降解烟碱最适pH和温度分别为7.0和30℃。该菌能够利用烟碱为唯一碳源，在含烟碱的培养基中发酵液呈淡黄色-绿色-墨绿色-深综色变化，培养48h后，烟碱的降解率可达71%，具有较好的烟草工业应用前景。
表位疫苗是用抗原表位制备的疫苗，是近年来新兴的一种疫苗研制技术，也是今后最具开发前景的疫苗技术之一，在肿瘤、病毒等疾病的防治中有着自身独特的优势。本文详细阐述了T表位和B表位的筛选和鉴定方法、表位疫苗的载体研究及表位疫苗在肿瘤、病毒和微生物感染中的应用等，对表位疫苗的最新研究进展进行了综述。
脱落酸是一种具有全面生理功能的植物激素，在植物体细胞胚胎发生发育过程中具有重要的作用。根据国内外最新的研究文献，从脱落酸对植物体细胞胚胎发生的影响、植物体细胞胚胎发生过程中内源脱落酸含量的变化、脱落酸对体细胞胚胎发生过程中基因表达、信号转导的调控和转基因的表达调控入手，概述了脱落酸在植物体细胞胚胎发生中的调控作用。
酵母菌作为一种极为宝贵的微生物资源，由于它具有良好的耐酸、耐渗透压等特点，因此它广泛被应用于高浓度有机废水的处理，包括有毒、含难降解污染物废水的处理，其处理能力优于驯化后的活性污泥系统，同时具有吸附重金属的作用；酵母菌能将大部分有机物转化成无毒且营养丰富的细胞蛋白供人类利用。随着酵母菌研究的深入和其他相关水处理技术的开发，酵母菌在废水处理中将得到更多、更好、更深的应用，实现环境、社会和经济等可持续发展。
