野生罂粟COR、BBE基因片段融合及其RNAi载体构建

中国生物工程杂志

2009, Vol. 29

Issue (11): 41-47

研究报告

野生罂粟COR、BBE基因片段融合及其RNAi载体构建

梁倩倩^1,3,张金文^1**,魏玉杰²,王旺田¹,何庆祥²,雷耀湖²

1.甘肃农业大学兰州 730070
2.甘肃农垦农业研究所武威 733006
3. 河西学院张掖 734000

Construction of RNAi Expression Vector by Fusion Gene Fragments of BBE and COR from Opium Poppy

LIANG Qian-qian^1,3,ZHANG Jin-wen¹,WEI Yu-jie²,WANG Wang-tian¹,HE Qing-xiang²,LEI Yao-hu²

1.College of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070,China
2.Agricultural Research Academy of Gansu Reclamation, Wuwei 733006,China
3.Hexi University, Zhangye 734000,China

全文: PDF(1082 KB) HTML

摘要：

可待因酮还原酶(COR)与小檗碱桥酶(BBE)是吗啡合成代谢途径的关键酶，其活性大小直接影响着吗啡合成途径中生物碱的代谢合成。采用RT-PCR从罂粟幼叶克隆出COR和BBE基因全序列，同源性比较结果显示，它们与GenBank上已报道的COR和BBE基因高度同源。利用blast及分子生物学软件DNAStar对COR和BBE基因的cDNA序列同源性进行分析比较，分别从各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约400～500 bp的片段；并应用重叠PCR法将其拼接成744 bp的融合基因BC，以中间载体pHANNIBAL和植物表达载体pART27为基础，构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有“正向BC融合片段- pdk内含子-反向BC融合片段”的ihRNAi植物表达载体，通过转化野生罂粟，初步研究了以COR和BBE基因为靶标的RNAi对内源吗啡合成的抑制效果，为进一步培育低吗啡高蒂巴因的罂粟种质提供了依据。

关键词： 野生罂粟; RNAi调控; COR和BBE融合基因

Abstract:

Abstract: The codeinone reductase gene and the berberine bridge enzyme gene were cloned from young leaf of opium poppy(Papaver somniferum L) by RT- PCR and the coding sequences of these gene were analyzed. The result demonstrated that the cloned COR gene sequences were analyzed to be highly homologous with the COR gene family members and exhibited homologous of 98.96% with COR1.1.The cloned BBE gene sequences were 94.84% identified with the reported BBE genes in GenBank previously. Based on the cDNA sequences of COR and BBE ,two fragments about 400～500 bp from each gene with lower identity among them were cloned. The fusion gene BC (744 bp) is fused by the PCR technique. Then the promoter CaMV 35S driven, containing‘forward BC fusion fragments-reverse pdk intron-reverse BC fusion fragments’, plant siRNA expression vector were constructed based on the vectors pHANNIBAL and pART27.The work will lay the foundation for breeding a low morphine and high thebaine poppy.

Key words: Papaver nudicarule RNA interference control Fused gene of cor and bbe

收稿日期: 2009-03-02 出版日期: 2009-12-07

ZTFLH:

Q78

基金资助:

教育部博士学科点研究基金（2007733008）、甘肃省卫生厅重点中医药科技项目（2008HDTC02）、甘肃省农垦总公司科技项目（GZK-2009-10）资助项目

通讯作者: 张金文 E-mail: jwzhang305@163.com

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引用本文:

梁倩倩张金文魏玉杰王旺田何庆祥雷耀湖. 野生罂粟COR、BBE基因片段融合及其RNAi载体构建[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(11): 41-47.

LIANG Qian-Qian, ZHANG Jin-Wen, WEI Yu-Jie, WANG Wang-Tian, HE Qiang-Xiang, LEI Yao-Hu. Construction of RNAi Expression Vector by Fusion Gene Fragments of BBE and COR from Opium Poppy. China Biotechnology, 2009, 29(11): 41-47.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2009/V29/I11/41

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