毕赤酵母是目前最优秀的外源蛋白表达系统之一。本文着重对重组毕赤酵母甲醇利用表型（Mut+型、MutS型和Mut-型）、基因剂量对外源蛋白高效表达的影响机理进行综述。MutS型的比生长速率和蛋白产率比Mut+型低、发酵周期长、副产物（如乙醇、乙酸等）形成速率不同。外源基因拷贝数对外源蛋白的影响主要有三种情况：（1）高基因拷贝数对外源蛋白表达水平有明显的正效应作用；（2）基因拷贝数增加反而降低了表达水平，即负效应作用；（3）重组蛋白表达与基因剂正相关，之后则表现负相关关系，这可能与外源蛋白翻译后加工有关（如二硫键形成、折叠等）,而与分子伴侣共表达可促进外源蛋白的高表达。
目的: 利用噬菌体展示技术构建B3HM细胞免疫小鼠的脾细胞表达scFv文库。方法: 用人骨髓细胞系B3HM细胞免疫小鼠，取其脾细胞采用RT-PCR方法扩增VH 和Vk基因并克隆入噬菌体展示表达载体，构建scFv文库，测定文库的库容量，BstNI酶切单克隆分析文库的多样性，对文库进行富集检测，鉴定单克隆噬菌体与B3HM细胞结合反应。结果:文库的库容为5×106cfu，单克隆的BstNI酶切图谱显示多样性，单克隆噬菌体抗体与B3HM细胞呈阳性反应。结论:噬菌体展示文库的成功构建为寻找新的致白血病相关基因，阐明白血病发病机理奠定了基础。
本研究旨在构建肉毒毒素蛋白受体sytII N端片段的原核表达载体，并在大肠杆菌pMAL-c2x系统中表达MBP-Syt融合蛋白。根据GenBank中已报道的人syt II基因序列，截取N端氨基酸序列，依据大肠杆菌的偏爱密码子，设计引物人工合成全基因，将全长基因克隆至原核表达载体pMAL-c2x中，重组质粒转化大肠杆菌E.coli ER2566，IPTG诱导表达。表达产物经Amylose Resin亲和层析进行纯化，SDS-PAGE和免疫印记对其进行鉴定，并对该蛋白进行活性的初步分析，为进一步研究毒素与受体相互作用的机制奠定基础。
目的：建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin，转化酵母细胞生产重组蛋白，探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂（sv-cystatin）对肿瘤侵袭的生物学作用。方法：利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上，构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115，经1%甲醇诱导获得稳定表达的重组蛋白，改良Boyden小室分析重组sv-cystatin蛋白处理对B16F1细胞体外侵袭力的影响。结果：SDS-PAGE检测和Western blot分析显示分泌表达的sv-cystatin重组蛋白相对分子量约为14 kD，摇瓶发酵每升发酵培养上清可获得16 mg的重组蛋白，经亲和层析纯化获得的sv-cystatin重组蛋白具有抑制木瓜蛋白酶的活性。改良Boyden小室实验结果显示：经0.5mg/ml浓度的重组蛋白处理的B16F1细胞穿过Matrigel的细胞数明显低于对照组(52.60±4.58，106±5.9，P<0.01) ，抑制率为50%。结论：成功实现sv-cystatin的酵母表达，初步证明sv-cystatin重组蛋白可抑制小鼠B16F1细胞体外侵袭作用。
Bcl-2家族蛋白质在线粒体途径凋亡的调控机制中起着重要的作用，p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein，PUMA)是该家族的一种只含有BH3同源区域的促凋亡蛋白。为得到PUMA的BH3结构域短肽并检测其生物学活性，将人工合成的编码PUMA-BH3肽的DNA片段克隆到质粒pTYB2上，构建出表达PUMA-BH3-内含肽-几丁质结合域融合蛋白的原核表达载体pTYB2-PUMA-BH3，转化大肠杆菌BL-21(DE3)中IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇（DTT）的柱内还原，直接获得可溶性PUMA-BH3肽。通过研究重组PUMA-BH3肽在体外条件下对线粒体活力、线粒体肿胀度以及细胞色素c释放的影响来鉴定其生物学活性。结果表明，获得的可溶性PUMA-BH3肽能作用于离体线粒体，引起线粒体活力降低，线粒体肿胀并能诱导细胞色素c释放。环孢菌素A对此有一定的抑制作用，提示PUMA-BH3肽对线粒体的上述作用是通过促进通透性转运孔( PTP)开放实现的。经原核表达及纯化，获得了具有促凋亡活性的PUMA-BH3肽，为进一步研制控制凋亡过程的药物奠定了基础。
目的：研究肿瘤抑制基因人ING4 (inhibitor of growth family, member 4)对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法：将携有绿色荧光蛋白（GFP）腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His（由本科室构建）分别感染C6细胞，RT-PCR法检测hING4的转录，Western-blotting法检测目的蛋白的表达。并观测hING4基因表达对C6胶质瘤细胞的作用，用MTT法绘制生长曲线，计算抑瘤率。再取重组腺病毒Ad-hING4-His及空腺病毒Ad作用后的C6细胞分别行激光共聚焦显微镜观察凋亡小体、透射电镜观察亚细胞结构的变化，抽提基因组DNA行琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测。结果： Ad-hING4-His感染C6细胞后，RT-PCR及Western-blotting结果提示有目的基因的转录和表达。hING4基因表达可以显着抑制C6细胞生长。激光共聚焦观察可见明显核断裂、透射电镜可见实验组细胞呈凋亡表现、基因组DNA电泳呈现梯形条带，流式细胞仪检测有明显AP峰，凋亡率达18.1％。结论：hING4可以通过促进细胞凋亡作用而显着抑制C6细胞的增殖和生长。
摘要：为了研究人类胰岛素B链第26位的酪氨酸对胰岛素和受体之间的结合的影响，包括单独的氨基酸替换或化合物替换的不同的胰岛素类似物被合成，其中化合物替代的类似物的B链C末端都减少了4个氨基酸。在对它们与胰岛素受体的亲和力进行研究中，结果发现它们与胰岛素受体的亲和力没有丢失， HisB26类似物和N-MeHisB26类似物的结合能力与胰岛素相比改变不大，分别是胰岛素的72 %和107 %。N-MeGluB26类似物，AadB26类似物和Phe (4-carboxy) B26类似物的结合能力有很大的提高，分别是130 %, 234 %和160 %。
目的：以三维成团培养为培养系统，探讨bFGF与胶原对组织工程软骨体外构建的影响。方法：成团培养兔生长板软骨细胞，设bFGF、胶原及联合作用组。HE染色观察新生组织形态；免疫组化检测Ⅰ、Ⅱ型胶原表达以观察细胞表型；Hoechst 33258法检测细胞DNA含量；羟脯氨酸法与阿新蓝法测定基质中胶原与蛋白多糖的合成。结果：新生软骨的组织学形态近似自然软骨；各实验组软骨细胞DNA含量明显上升；胶原可以显著促进基质的合成；各实验组Ⅰ型胶原的表达少于对照组，Ⅱ型胶原的表达则高于对照组；联合作用组效果更加明显。结论：三维的成团培养可以促进基质合成，有效维持软骨细胞表型；bFGF与胶原有利于工程化软骨构建，其效果具有协同效应，两者联合应用可进一步促进软骨再生。
目的：本文主要应用生化提纯技术从条斑紫菜（ Porphyra yezoensis ）中提取不同纯度的多糖，并观察各多糖组分对人乳腺癌细胞 MCF-7 生长的影响。方法：通过 DEAE-52 柱层析和 Sephadex G-200 柱层析，对条斑紫菜粗多糖热水提取物进行纯化；经HPLC，紫外和红外光谱对多糖各组分的纯度及结构进行初步鉴定；并用 MTT 法和流式细胞仪检测多糖对人乳腺癌细胞 MCF-7 生长的影响。结果：分离纯化出的各组分条斑紫菜粗多糖对人乳腺癌细胞 MCF-7生长均有不同程度的抑制作用，其中PY-D2可诱导MCF-7细胞凋亡。结论：条斑紫菜多糖具有杀伤肿瘤细胞MCF-7的作用。
为寻找胃癌特异的肿瘤标记物，用于胃癌临床诊断及药物治疗靶点的选择，本研究采用荧光差异显示凝胶电泳（DIGE）技术分离并筛选 Cy3、Cy5 及 Cy2 荧光素标记的胃癌及对应癌旁组织差异表达蛋白质，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）或串联质谱技术进行鉴定并分析。结果共筛选出 33 个差异表达蛋白质点，其中 9 个蛋白质点在胃癌组织中上调，24 个蛋白质点下调。对 22 个蛋白质点采用质谱技术成功鉴定，突变结蛋白、锰超氧化物歧化酶、热休克蛋白 60等在胃癌中高表达，热休克蛋白 27、前列腺素 F 合酶、硒结合蛋白 1、锌指蛋白 160、微管蛋白 α6、真核生物翻译延伸因子 1 α1 等在胃癌组织中低表达，并筛选出 5 个未知蛋白。这些差异表达蛋白可望成为胃癌诊断的特异标记物，并与胃癌的发生、发展及预后等有关，为胃癌的诊断、发生机制的研究提供了新的思路。
将木质纤维素类生物质如玉米秸秆等用稀酸水解预处理，在半纤维素水解为单糖的同时，水解液中还会产生一些可能对后续发酵有影响的副产物。本实验分别考查了在玉米秸秆稀酸水解液中检测出的乙酸、甲酸、香草醛、糠醛和羟甲基糠醛对重组木糖发酵菌株S. cerevisiae 6508-127生长和发酵的影响。结果表明，甲酸和乙酸对菌体生长的抑制强于乙醇生成，且甲酸的抑制程度远大于乙酸；2g/L香草醛可使菌体生长延滞期明显延长，而在较低浓度（≤1.2g/L）此现象不明显。糠醛在0.5-1.5g/L范围内对菌体生长有抑制作用，但使乙醇得率提高;羟甲基糠醛在0.2g/L浓度存在就使乙醇得率有明显降低，但使生物量得率提高；研究中还发现，糠醛、羟甲基糠醛和香草醛可被S. cerevisiae 6508-127代谢。
本文根据德国、欧盟和美国制定的生物柴油标准制定了以碘值、十六烷值和脂肪酸组成等参数作为植物油质量的评价体系。通过四条标准，即51<十六烷值<65、碘值<115、亚麻酸<12%和十八碳四烯酸<1%、碳链长度为C12-C22，对国产118种种子含油量超过30%的木本油料植物进行评估，共筛选出53种木本油料植物的种子油可作为发展生物柴油最适合的原料。其中油茶、杏、无患子、臭椿、白檀、海州常山分布广，是值得推广种植的生物柴油植物。富油大科山茶科和无患子科植物的种子油一般都适合发展生物柴油，而富油大科樟科、松科和卫矛科植物的种子油不适合作生物柴油原料。我国各省区可因地制宜选择合适的能源树种，发展生物柴油产业。
研究了在小鼠肠道菌群的高效离子交换色谱（HPLC）分析中，不同色谱分离条件对分离效果的影响，确立了最佳色谱条件：样品上样于Toyopearl TSKgel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱，以0.02mol/L哌嗪-HCl缓冲液（pH8.0）平衡，洗脱盐浓度为1.0mol/L NaCl，洗脱梯度为0.1-0.5mol/L NaCl线性梯度洗脱80min，再经0.5-0.75mol/L NaCl线性梯度洗脱25min，流速1mL/min，进样量为1mL。小鼠肠道菌群HPLC分析方法的建立，为深入研究小鼠肠道菌群的组成和动态变化奠定了基础。
大西洋马铃薯是经济价值很高的炸片型加工品种，逆境胁迫下，易产生褐变、空心等问题，影响加工品质。为获取抗逆境胁迫的优质转基因新品种，采用根癌农杆菌介导法，以大西洋马铃薯的茎段为外植体，建立了快速，简便，高效的遗传转化体系。从共培养到转化植株获得只需7-8周，转化频率达80%。结果表明茎段是较好的转化受体，硫代硫酸银可以有效促进不定芽分化并提高再生频率。PCR、Southern杂交分析证明外源基因已经成功整合到马铃薯再生植株的基因组中。该转化体系为大量开发转基因马铃薯植株，进而筛选优质的马铃薯炸片加工型新品种奠定基础。
采用RT-PCR，从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因，构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆，转化入大肠杆菌，测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致。经异丙基-β-D半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达，淀粉树脂亲和层析法纯化，得到融合蛋白sTNFR1-MBP。结果显示：经Western-blotting检测，sTNFR1-MBP具有免疫活性；MTT检测目的蛋白可有效地封闭TNFα对QSG7701的细胞毒性作用；流式细胞术检测目的蛋白对TNF-α诱导QSG7701凋亡有抑制作用；sTNFR1-MBP具有良好的生物活性，为今后的研究打下了基础。
运用均匀设计法对影响rPA(K)在大肠杆菌中表达的因素进行了优化设计，摸索出了对表达产物进行诱导表达的最佳优化表达条件。结果如下：溶解氧为90%，IPTG诱导时间为5.3 h、IPTG终浓度为0.1 mmol/L、培养基为HD、pH值为6.0、诱导温度为25?C。目的蛋白平均密度从0.16提高到0.48，是优化前的3倍。
目的：从大肠埃希氏杆菌UTI89基因组中筛选出全部潜在的分泌蛋白并进行初步研究。方法：使用SignalP3.0、TatP1.0、 SecretomeP2.0等蛋白分析软件对5211个ORF进行预测；对筛选出的信号肽及分泌蛋白的基本特征进行统计学分析；使用Blast 2 Sequences进行同源性分析。结果：共筛选出432个sec途径分泌蛋白，19个Tat途径分泌蛋白，386个非经典分泌蛋白；信号肽、分泌蛋白平均长度分别为25.5aa、282.8aa；信号肽中出现频率最高的3种氨基酸依次为L、A、S；仅有两个信号肽的氨基酸序列完全相同，相应的分泌蛋白高度同源。结论：大肠埃希氏杆菌UTI89基因组中有837个ORF可能编码分泌蛋白；分泌蛋白集中在500aa以下；组成信号肽的氨基酸相对保守，多数为疏水氨基酸；信号肽变异性较大，含相同信号肽的蛋白可能由同源基因编码。
微系统技术给细胞研究提供了一个全新的平台。细胞图形化（Cell Patterning）技术作为全新的细胞培养方式，在细胞研究中发挥重要作用。本文介绍了目前应用于细胞图形化的主要技术，包括光刻（Photolithography）、软光刻（Soft lithography）、模板辅助（Stencil-assisted patterning）等方法，并阐述了利用细胞图形化技术的在基础生物学、组织工程以及基于细胞的生物传感器等方面的主要应用。
摘要：随着生物制药业的迅速发展，转基因鸡输卵管生物反应器正逐渐成为人们关注的焦点，转基因鸡以其卓越的优势必将成为科学研究的热点和生物制药领域的新兴产业之一。目前，转基因鸡最成功的制备方法即逆转录病毒介导法，并已成功制备出表达标记基因的转基因鸡。本文主要综述了逆转录病毒载体制备转基因鸡的优势，逆转录病毒制备转基因鸡的方法和转基因鸡的研究进展，同时也讨论了转基因鸡的意义和存在问题。
光、温度、水分等环境因素影响植物的生长发育，植物可以通过启动子中顺式作用元件与转录因子的相互协调作用，对这些信号产生响应，调控基因表达。本文综述了光、温度、水分诱导表达启动子中的顺式作用元件及相关转录因子研究的最新进展，从分子水平上探讨了环境因子诱导的基因表达调控，对研究植物适应环境的机制具有一定的意义。
稀有糖是在自然界中存在但含量极少的一类单糖及衍生物，其在膳食、保健、医药等领域中发挥着重要的功能。本文综述了一种稀有糖的生物转化生产策略----Izumoring方法，即利用D-塔格糖3-差向异构酶、醛糖异构酶和多元醇脱氢酶等进行所有单糖及糖醇之间的相互转化；利用该原则，分别构建了己糖类、戊糖类和丁糖类的Izumoring转化策略，并可获得所有稀有糖的酶反应和生物转化生产途径。同时，展望了稀有糖生物转化生产的研究趋势。
随着石油资源的日益枯竭，近年来生物能源技术的开发引起了全球各界的广泛重视，加之专利保护意识的增强，生物能源领域的专利数量迅速增长，对专利信息的分析可以了解生物能源技术的发展现状和趋势，为技术创新和战略发展提供参考。本文选取目前生物能源中的三种重要技术――生物乙醇、生物柴油和生物制氢技术，利用专利计量分析的方法对其发展态势进行了研究。研究内容包括：专利申请的时间分布和空间分布，被引专利情况，主要技术领域，以及重要专利权人及其相关信息，从专利分析的角度揭示近年来这三种生物能源技术的研发状况。
