将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子（hKGF）基因片断插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF，经Pme I线性化后，通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组，得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF。采用Lipofectamine 2000将pAdEasy-hKGF转染到HEK-293细胞，在HEK-293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒，经PCR鉴定含有hKGF基因。获得的重组hKGF腺病毒感染颗粒可高效感染HaCat细胞。Western-blot结果显示，重组腺病毒感染的HaCat细胞可分泌表达hKGF蛋白。
干扰素-tau (IFN-tau)是一种新发现的I型干扰素，为了更清楚的研究它的生物学功能，在已克隆IFN-tau cDNA的基础上，PCR扩增出IFN-tau ORF，与原核表达载体pBV220重组后，成功的构建了IFN-tau的原核表达质粒pBV220/IFN-tau。重组质粒转化大肠杆菌BL21，该菌经过诱导，用凝胶过滤色谱层析的方法获得了纯化的目的蛋白，该蛋白经过氨基酸序列分析证实是IFN-tau ；用细胞病变抑制法测定IFN-tau经过透析复性后的活性为2.09×106IU/ml，比活性为2.35×106IU/mg。
yggG是从大肠杆菌全基因组文库中钓取并克隆的Era结合蛋白基因，研究表明该基因表达的YggG294(amino acids 1-294)蛋白对宿主菌的生长具有强烈的抑制作用。为了阐明YggG与Era间的相互关系，构建可同时可控性表达Era和YggG294蛋白的双启动子表达载体。利用所构建的双启动子表达载体在同一细胞中同时可控性地表达YggG294与Era蛋白。结果显示，在不表达和少量表达YggG294的细菌细胞内，Era 的表达量与总蛋白量的比值随着诱导时间增加而增高，而YggG294大量表达的细菌内Era 的表达量与总蛋白量的比值基本保持不变；Era 蛋白的预表达对YggG294表达所引起的细菌生长率下降无影响。由此可以推论，YggG294的过表达引起宿主菌生长抑制进而影响了Era蛋白的进一步表达，而YggG294的过表达引起宿主菌生长抑制与YggG和Era蛋白间的相互作用无关
目的：构建Hv古细菌SRP19蛋白的表达载体pET23d-HvSRP19并在大肠杆菌中表达后进行纯化和研究其生物学活性，为研究SRP循环的分子机制奠定基础。方法：用体外合成的重组DNA技术，先合成具有重叠碱基的10个寡核苷酸短序列,通过拼接，获得Hv SRP19基因全长DNA后，克隆到pET23d载体上。重组质粒在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中的大量表达产物经Q-Sepharose离子交换层析柱纯化后再用蔗糖密度梯度超速离心法分析其生物学活性。结果：正确构建了pET23d-Hv SRP19表达载体，并在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中获得良好的表达；成功地纯化了表达产物，纯度达95%；证明了具有SRP19蛋白的生物学活性，能够与Hv SRP RNA相互作用形成SRP19-SRP RNA的复合物。结论：纯化的Hv SRP19蛋白与Hv SRP RNA相互作用所形成的复合物，被认为是启动SRP颗粒形成和功能发挥的开始。
利用PCR技术人工合成编码酿酒酵母泛素样特异性蛋白酶1 (Ubiquitin-like specific protease 1，Ulp1)第403到621个氨基酸残基之间的DNA片段Ulp1p，并连接到大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出重组表达质粒pET-Ulp1p。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选转化子。经IPTG诱导4h后, SDS-PAGE结果显示，Ulp1p为可溶性表达，表达量占菌体总蛋白的50.8%。通过Ni-NTA凝胶亲和层析和G-25凝胶层析联用可以获得纯度大于95%的Ulp1p。Western-blotting分析表明,Ulp1p能与6xHis抗体产生免疫反应。以重组蛋白SUMO-hEGF(人表皮生长因子)和GST-SUMO-MT(金属硫蛋白)为底物进行酶切分析，结果显示，Ulp1p能特异性水解这两种SUMO融合蛋白，其比活为1.386 x104U/mg。
经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片断，限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体，经酶切鉴定及测序，筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体（bacmid）的DH10Bac感受态细胞，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-H5。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞，SDS－PAGE蛋白电泳、Western blot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明：分子量约63Kd重组血凝素蛋白（rH5）在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rH5具有血凝活性，而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制；rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体，说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。
摘要：为了探讨外源性与内源性启动子对转基因盐藻外源基因表达的影响，将含外源性启动子CMV35S的表达载体CMV35S-bar（G12）和含内源双拷贝碳酸酐酶启动子DCA1的表达载体DCA1-bar（D-B）分别转化盐藻，筛选稳定转化株后，观察在不同启动子驱动下外源基因的表达情况及对转基因盐藻生长的影响。 通过电击法分别将表达载体G12 和D-B转化盐藻，经PPT筛选后，各得到了3株PPT抗性藻株，经PCR及测序分析证实外源基因bar已经整合到盐藻的基因组中，半定量RT-PCR结果显示，在内源性启动子DCA1驱动下，bar基因的表达强度明显高于在外源性启动子驱动下bar的表达，并且D-B转化株的bar基因表达在盐诱导下其表达明显提高，而G12转化株中bar基因的表达对盐诱导无反应。Southern blot 分析显示，外源基因的拷贝数与不同启动子间无相关性。转化株的生长特性分析显示，D-B转化株的生长速度明显高于G12转化株。本研究的结果指出，内源诱导型启动子在驱动转基因盐藻外源基因的高效稳定表达中比外源组成型启动子更具有优势。
线粒体是存在于绝大多数真核细胞内的一种基本的、重要的细胞器，是细胞进行氧化磷酸化的场所。不同脊椎动物同源基因序列的比较显示,细胞色素b(Cytb)、细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）、细胞色素C氧化酶Ⅱ（COⅡ）、细胞色素C氧化酶Ⅲ（COⅢ） 基因最保守,同源性最高,ATPase6、ATPase8基因、ND基因变异比较大。本试验以家鸭（家鸭起源于绿头鸭：Anas platyrhynchos）肝脏的线粒体DNA为模板，按照GenBank已经公布的潜鸭族（AF090337）的全序列及其绿头鸭的mtDNA部分序列（L22476、L16770、L22477）设计合成特异引物进行PCR扩增，克隆并测定了线粒体细胞色素C氧化酶Ⅲ亚基（COⅢ）的全序列784bp以及ATPase6基因的3'端和tRNA-Gly基因的5'端序列共934bp。 用DNAStar分析软件对家鸭与GenBank中7种禽类的COⅢ序列进行比较分析，显示家鸭与这些动物的COⅢ基因具有较高的同源性，与同科潜鸭属中的Aythya Americana的相似性 最高为90.6 %，与同目不同科的加拿大雁、小天鹅、白额雁的相似性分别为89%、88.6%、88.6%。根据家鸭与其他7种禽类的COⅢ基因序列相似性所建立的进化树，与传统的分类地位基本吻合。
类固醇合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein，StAR )在调节类固醇合成中发挥了重要作用，为了认识StAR蛋白在仔猪性腺发育早期中的表达，本研究以7、14、23、37日龄的仔猪睾丸为研究对象，采用组织原位杂交方法研究了StAR mRNA在仔猪睾丸中的表达水平。结果表明：在7、14、23、37日龄的仔猪睾丸中，StARmRNA在睾丸的间质细胞中表达，其中在7日龄StARmRNA表达很弱，14、23、37日龄StARmRNA表达较强，StAR蛋白在这一时期的睾丸间质表达与其合成睾酮的能力一致。
牛抗菌肽Bac7和Bac5是一种线性阳离子小分子多肽，在机体天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。本研究根据Gen bank中公布的牛抗菌肽bac7和bac5成熟肽基因序列，人工合成了融合基因Bac7-Bac5片段，克隆于原核表达载体pET32(a+)中构建了重组表达载体（pET-B7-B5），将其转化于E coli BL21(DE3) 中实现了重组蛋白B7-B5（rB7-B5）的过表达，表达的rB7-B5以包涵体形式存在，rB7-B5表达量约占细菌总蛋白的36.6％，分子量大小为33kD，与预测大小相符。以经Ni亲和层析柱纯化和多步透析法复性的rB7-B5，对猪胸膜肺炎放线杆菌和耐药性大肠杆菌具有很好的抑菌活性，本研究为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。
