中国生物工程杂志

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颜冰,范明,黄培堂

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 1-5.

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脑源性神经营养因子（BDNF）对中枢神经系统的多种神经元具有营养，修复和保护功能，但因无法通过血脑屏障限制了其应用。本文利用抗转铁蛋白受体（TfR）的单链抗体（ox26-scFv）作为脑转运载体，分别扩增单链抗体和BDNF基因，插入pTIG-Trx载体，构建融合基因表达载体pTIG-Trx/scFv-BDNF，在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了高效表达。经Ni-NTA金属鏊合层析柱纯化后，在41Kd处可见目的纯化条带。大鼠GH3细胞免疫酶染色显示，ScFv-BDNF融合蛋白能与转铁蛋白受体特异性结合。同时能够促进鸡胚背根节神经突起的生长，具备了BDNF的生物学活性。为使BDNF能够跨越血脑屏障成为中枢神经系统的治疗药物打下了实验基础。

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新型蛋白质修饰剂的合成及修饰牛血红蛋白的初步研究

邢文超,曹旭,贠强,苏志国

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 6-10.

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以L-谷氨酸和己二酸为原料合成了一种新型的四官能团蛋白质修饰剂，并用核磁共振和红外光谱对其结构进行了表征。然后以其为修饰剂，对牛血红蛋白的化学修饰进行了初步的研究，并通过高效液相色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和血氧分析仪对交联牛血红蛋白的分子量和携氧性能进行了表征。结果表明，该修饰剂可以使牛血红蛋白同时在分子内和分子间发生化学交联，并较好地保持携氧能力（P50:21.7mmHg，Hill系数:2.01），因此在众多用于开发人工血液代用品的化学修饰剂中该修饰剂具有良好的应用前景。

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利用烟草表达人凝血IX因子 (hFIX)的研究

赵凌侠,张凌,魏捷,开国银,李柱刚,钱虹妹,申国安,唐克轩

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 11-16.

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血友病B是凝血IX因子（hFIX）缺乏所导致的一种出血性疾病，通过输血和hFIX浓缩剂进行治疗疗效显著，但存在治疗费用高和安全隐患，因而获得安全、廉价的人凝血IX因子对血友病B治疗具有重要意义。植物系统表达外源蛋白在生产成本和安全性方面具有优势。为此，本研究构建含人凝血IX因子基因（hFIX，2.8kb）植物双元表达载体p35s-2300：：gus：：noster，用农杆菌介导法转化烟草 "百日红"，通过PCR和Southern blot分析证实获得4株独立转基因植株， hFIX在转基因烟草基因组中的拷贝数为1-4个；RT-PCR和ELISA检测结果表明，hFIX在转录和翻译水平已成功表达，hFIX在转基因烟草叶片中的表达量为2.5~8.8ng/g·FW，并具有免疫活性。本研究为利用植物系统表达hFIX的后续研究作了必要准备，也为利用植物系统表达其他药用蛋白研究提供了一些理论和实验参考。

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体外肿瘤微血管生成模型的建立

赵静,苗俊英,张尚立,石梅

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 17-21.

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本研究以体外微血管培养模型为基础，用鼠尾胶原包埋大鼠动脉环，并将包埋的动脉环转移到种有人肺癌A549细胞单层的培养皿中，用MCDB 131无血清培养液对动脉环和肿瘤细胞进行共培养，从而建立肿瘤微血管体外生成模型。大鼠动脉环于培养后第3天从血管壁长出微血管芽，第6至10天长成微血管丛，两周后新生微血管开始萎缩；没有肿瘤细胞刺激的条件下，大鼠动脉环新生微血管数量明显减少。结果表明人肺癌A549细胞能够促进血管生成。体外大鼠动脉环肿瘤微血管培养模型操作简单、灵敏度高，适合研究肿瘤血管新生及其机制。

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新型佐剂DC-Chol对不同来源HBsAg促细胞免疫比较研究

易学瑞,袁有成,祖萍,施理,孔祥平

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 22-25.

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目的：筛选治疗性乙肝疫苗的候选抗原。方法：分别用国产CHO乙肝表面抗原和酵母乙肝表面抗原结合DC-Chol脂质体佐剂免疫BALB/c小鼠，1周后检测其脾细胞产生的IL-2和IFN-γ的水平。ELISPOT法评价铝佐剂和DC-Chol脂质体佐剂结合HBsAg促小鼠细胞免疫反应水平。结果：酵母乙肝表面抗原结合DC-Chol脂质体所诱导的IL-2和IFN-γ的水平分别为CHO乙肝表面抗原结合DC-Chol脂质体的20倍和119倍。酵母乙肝表面抗原结合DC-Chol脂质体所诱导的IL-4和IFN-γ的斑点数分别为酵母乙肝表面抗原结合铝佐剂的2.8倍和46.3倍。结论：就DC-Chol脂质体佐剂而言，酵母表达的乙肝表面抗原细胞免疫原性强，是适合用于治疗性乙肝疫苗的候选疫苗。

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重组人甲状旁腺激素肽（1-34）在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化

李健峰,肖红剑,姬秋彦,李智华,龙海亭,阎玲梅,罗娜,徐维明

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 26-30.

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人工合成人甲状旁腺激素1-34肽段 (PTH1-34)的cDNA序列，克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pThioHis中，获得了高表达菌株。经发酵、破菌、金属鳌合层析、反相层析和凝胶层析后获得了纯度大于95%的hPTH1-34。hPTH1-34肽N端测序和质谱分子量测定结果与天然PTH1-34一致。生物学活性研究表明，hPTH1-34在体外具有刺激腺苷酸环化酶的作用。

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蛇毒纤溶酶Alfimeprase在大肠杆菌中的可溶表达和纯化

张守涛,周雁胜,包星峰,郭蔼光

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 31-36.

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Alfimeprase是Fibrolase的突变体，是一种蛇毒纤溶酶，有纤溶活性而无出血性。根据Alfimeprase的氨基酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性，利用PCR的方法合成Alfimeprase DNA序列，分别融合在NusA和MBP的C端，与分子伴侣FkpA在大肠杆菌Origami B(DE3)中共表达，融合蛋白NusA/Alfimeprase以部分可溶的形式存在，可溶部分占上清总蛋白的25%左右，通过镍柱亲合层析纯化和肠激酶切割得到具有纤溶活性的重组蛋白Alfimeprase。本研究是首次报道在大肠杆菌中可溶表达Alfimeprase，为以后深入研究其功能及应用奠定了基础。

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A组人轮状病毒VP6基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

曹志亮,文喻呤,陈元鼎

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 37-41.

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轮状病毒(rotavirus RV) 结构蛋白VP6位于病毒三层衣壳结构的中间层，在病毒粒子的形成过程中起重要的作用。从临床样品中分离的人轮状病毒TB-Chen株VP6基因通过RT-PCR得到扩增产物。以pET作为表达载体，将VP6蛋白编码基因序列插入到质粒pET中成功构建原核表达质粒pET-VP6。实验表明，带有pET-VP6质粒的大肠杆菌BL21(DE3)可以高效表达目的蛋白VP6，重组表达产物VP6占菌体总蛋白的27.4%, 其分子量约为45 kDa，并且能被豚鼠抗SA11血清抗体识别（Western blot）。这一结果为进一步研究VP6的结构和功能奠定了重要的物质基础。

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内毒素结合肽的改良、原核表达及纯化

孙亚丽,刘友生,杨海捷

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 42-46.

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目的：对人内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)进行改良，获得突变体mEBP(mutate of endotoxin binding peptide,mEBP)基因并进行原核表达，纯化获得高纯度的mEBP。方法：应用PCR定点诱变方法获得mEBP基因，构建PinpointXa-3/mEBP融合表达载体,在BL21(DE3) pLysS宿主菌进行表达，溶菌酶裂解法提取包涵体，融合蛋白经PinpointTM Xa 纯化后，由factorXa酶切,获得目的肽，RP-HPLC纯化获得高纯度的mEBP。结果应用PCR定点诱变技术完成了EBP第5.18位谷氨酰胺赖氨酸的定点突变，且通过原核表达，色谱纯化获得了高纯度的mEBP。结论成功获得高纯度的mEBP,为下一步的抗内毒素功能检测奠定基础。

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DN2菌降解烟碱的动力学及其应用研究

袁勇军,陆兆新,别小妹,吕凤霞

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 47-50.

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研究了菌株DN2降解烟碱的特性和对烟草废弃物中烟碱的降解情况。结果表明，该菌降解烟碱的最适条件为接种量为5 %，温度30 ℃，初始pH值为6.5。在该条件下，对初始烟碱浓度为500 mg/L的降解过程进行考察。结果表明，未经烟碱诱导的降解曲线呈倒S曲线，半衰期为17.43 h；经烟碱诱导的降解曲线符合Eckenfelder动力学模型，半衰期为4.10 h。添加0.1 %(质量分数)葡萄糖，可提高菌株DN2的烟碱耐受浓度，达5000 mg/L。菌株DN2能够降解烟草废弃物水提液中的烟碱（烟碱含量约为2220 mg/L），60 h时烟碱的降解率为95.22 %，表明该菌在治理烟碱污染环境方面具有应用价值。

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大肠杆菌中高效表达rhBMP-4的探讨及初步活性测定

高思红,汪炬,董群伟,刘侃,刘雪婷,洪岸,谢秋玲,孙奋勇

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 51-56.

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目的在大肠杆菌中表达具有生物活性的rhBMP-4。方法在不改变氨基酸序列的前提下，以全基因合成的方式对人BMP-4成熟肽基因全长进行定点突变，将之重组入pET-3c表达载体并转化至大肠杆菌BL21(DE)plysS。IPTG诱导和包涵体复性后，利用C2C12细胞横向成骨细胞分化实验以及小鼠肌袋异位骨形成实验检测其活性。结果获得0.348 kb的BMP-4 DNA序列，表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在。经纯化及复性后，体内与体外的活性检测表明rhBMP-4有良好的诱骨生成活性。结论该方案能够实现rhBMP-4在大肠杆菌中的高效表达。

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HBcAg和HBsAg前S1表位肽融合蛋白的表达研究

孙红光,闫东梅,杜柏榕,朱迅

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 57-62.

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构建、表达并纯化了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白BTcs1，为开发新型HBV治疗和预防性疫苗提供实验依据。利用DNA重组技术，构建了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白原核表达质粒pBTcs1，在大肠杆菌（HB101）中进行表达，用蔗糖密度梯度超速离心对表达产物BTcs1进行纯化，用SDS-PAGE、SEC、WESTERN-BLOT和电镜进行鉴定。结果表明成功构建了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白原核表达质粒pBTcs1，BTcs1的表达量为20-25 mg/L，DOT-BLOT结果显示BTcs1主要分布在30%-50%蔗糖介质中，SDS-PAGE和SEC结果显示蛋白纯度>95%，WESTERN-BLOT结果显示BTcs1可以与抗HBcAg抗体和抗HBsAg前S1抗体特异杂交，显色条带在约28 kD处，电镜分析表明BTcs1可以自主组装成病毒样颗粒（VLP），直径约为30-34 nm。本研究为进一步探讨BTcs1的功能及应用奠定了基础。

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抗菌肽基因工程研究及其表达策略

冯兴军,王建华,单安山

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 63-67.

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抗菌肽广泛存在于多种生物体内，具有广谱抗菌、调节免疫、抑制肿瘤等多种生物学功能，作用机制独特，是目前基因工程研究的热点之一。本文综述了抗菌肽的一般性质及其国内外基因工程研究进展，探讨了在抗菌肽转基因研究中采用的表达策略及理论依据。

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乳酸菌食品级nisin控制的基因表达系统NICE

张晶晶,谭树华

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 68-72.

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乳酸菌安全应用于人们的生产和生活已有上千年的历史，是一种食品级的微生物。在过去二十年里，其生理及遗传学特性已被彻底研究。由于其遗传可行且操作简单，乳酸菌除了其传统应用外已被广泛用于表达异源基因，在食品、农业及医药工程领域具有重要的应用前景。人们已开发了一系列乳酸菌食品级基因表达系统。本文主要介绍了乳酸菌，重点是其模式菌Lactococcus lactis最常见的食品级诱导表达系统--nisin控制的基因表达系统NIC E及其食品级诱导物nisin、食品级的宿主及表达载体系统，以及NICE系统在表达异源基因方面的应用。

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植物G蛋白与植物防卫反应

宋水山,杨文香,李亚宁,刘大群

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 73-77.

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近年来, 植物G蛋白(包括异三聚体G蛋白和小G蛋白)的存在及其信号调控途径已经成为人们研究细胞信号转导过程的热点问题。从多种植物细胞中相继分离克隆出多个与动物G蛋白同源的编码植物G蛋白的基因, 并且植物G蛋白的种类和数量有其独特性。植物G蛋白在植物细胞跨膜信号转导中发挥重要的作用, 参与多种生命活动的调控。本文主要综述了植物G蛋白参与植物防卫反应调节作用的研究进展。

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脂肪酶生物印迹研究进展

董斌,王杰,宋锡瑾

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 78-82.

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脂肪酶是一种广泛应用的水解酶。生物印迹技术是一项新兴技术，它使脂肪酶在有机溶剂中发挥更好的催化能力，如更高的活性和稳定性，从而扩大了脂肪酶作为生物催化剂在工业上的应用。本文介绍了脂肪酶蛋白质的结构特点，脂肪酶生物印迹的过程和原理，对生物印迹过程中印迹模板的种类和选择原则、保护剂的作用等主要影响因素进行了讨论，并对不同种类脂肪酶的生物印迹条件和适用的反应及生物印迹效果作了归纳总结，指出了目前脂肪酶生物印迹技术存在的问题和发展前景。

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粘膜免疫佐剂研究进展

周红莉,郭丽,王健伟,洪涛

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 83-88.

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粘膜免疫佐剂在新型疫苗的设计中具有重要作用。常用的粘膜免疫佐剂主要包括细菌性物质、细胞因子以及抗原递送系统。本文综述了这些佐剂的研究进展，以期为新型疫苗研究提供参考。

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关键蛋白酶激活因子Apaf-2/CytC在细胞凋亡中的作用

陈荣林,李宏

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 89-92.

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描述了Apaf-2/CytC在细胞凋亡中的作用，主要阐述了细胞凋亡相关因子Apaf-2/CytC的发现，Apaf-2与Apaf-1及Apaf-3在细胞凋亡中的作用及相互关系，CytC介导细胞凋亡的方式。探讨了线粒体CytC的泄漏机制，对MPTP假说、专一性通道假说和线粒体膨胀假说进行了阐述，并对细胞凋亡信号转导途径，如CytC途径、Fas/FasL途径、蛋白激酶途径、AIF凋亡途径及这些信号转导途径间的对话进行了分析，最后分析了研究CytC与细胞凋亡分子机制的意义并提出细胞凋亡分子机制中一些未完全研究清楚的问题。

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美国的生物技术产业政策

张喜凯,李晓龙

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 93-97.

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美国作为现代生物技术的发祥地，其生物技术产业领先于世界其他国家。本文研究、总结了美国在科技管理、资金支持、产业化、税收优惠、人力资源和产业集群六个方面促进生物技术产业发展的政策和措施，希望为我国制定促进生物技术产业发展的产业政策以借鉴和指导。

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中国生物医药R&D的发展研究

黄志锋,宿凌,李校堃

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 98-101.

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2005年SFDA的新规定和批准的新生物技术药物

丁锡申

中国生物工程杂志. 2006, 26(03): 102-103.

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2006年, 第26卷, 第03期　
刊出日期：2006-03-25

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