mRNA靶点筛选问题是反义核酸领域的一个难题。近年来出现了多种筛选mRNA上可接近位点以确定靶位点的方法,包括mRNA实测分析法和计算机模拟分析两大类。其中mRNA实测分析法又包括多种针对自然折叠mRNA的实验分析技术;即基因walk技术,RNaseH作图技术、寡核苷酸微阵列技术,酶作图法确定二级结构技术,核酶导向型随机RNA库位点筛选技术和随机寡核苷酸库结合逆转录位点筛选技术。这些方法在鉴定RNA可接近位点及反义核酸的设计方面均有重要作用。
防御素是一类在生物界广泛存在的、富含半胱氨酸、具有微生物和一些恶性细胞抗性的小分子短肽。它具有抗性谱广,作用机理特殊等优点;因此可以用来研制新型的抗生素类药,并在动植物抗病基域工程上发挥重要作用。概述了防御素在基因工程方面的研究进展,并对其应用前景作了展望。
EGFRⅢ型变异体(或EGFRvⅢ)是一种新型的肿瘤特异性靶点。EGFRvⅢ是正常分子经过遗传学重排成为肿瘤特异性靶点的最好例证。由于仅在肿瘤细胞中发现EGFRvⅢ,可以应用它设计靶向性药物选择性治疗肿瘤,而不影响正常细胞,避免传统治疗中所见的副作用。以表达EGFRvⅢ的细胞为靶点的治疗方式有三种:1)作为毒性抗体或修饰病毒的直接靶点,2)利用EGFRvⅢmRNA的特异性核酶或EGFRvⅢ及其下游信号传导分子的特异性抑制剂进行治疗,3)利用EGFRvⅢ触发免疫反应。概括介绍了肿瘤特异性标记物EGFRvⅢ在肿瘤治疗中的研究进展。
早期胚胎发育过程中,组织者能够诱导胚胎组织形成完整的体轴。研究表明细胞之间的信息交流是脊椎动物胚胎诱导作用的基础。Nodal作为早期胚胎诱导信号的关键成分,参与了中胚层和内胚层的形成、前-后体轴的位置确定和左-右体轴特化等一系列关键事件,表明Nodal信号在脊椎动物早期发育过程中具有重要作用。
细胞膜与细胞的各种生命活动如细胞识别粘着、运动迁移、免疫应答、物质运输、信息传导、细胞分裂、细胞分化、衰老及病变、癌变都有密切的关系。细胞表面糖蛋白是细胞膜的主要成分,而糖蛋白的性质及功能又和糖链的结构有关,因此细胞膜糖蛋白中寡糖链的结构及作用机制研究成为生物学基础理论的课题之一。主要综述了近年来细胞膜糖蛋白研究中细胞膜的类别、细胞膜的制备方法、细胞膜糖蛋白的提取与分离纯化、寡糖链的结构分析方法。
从诱导脊椎动物早期胚胎的中胚层到器官和组织的形成,成纤维细胞生长因子家族(FGFs)在其各个阶段起着重要的作用。FGFs在各种器官形成中担负上皮间质相互作用的重要调控因子,特别是FGF10,无论在外胚层上皮还是在内皮层上皮都是重要的间质调控因子。如果离开该因子,胚胎组织器官发生将无法完成。就FGF10调控四肢、支气管-肺脏、胰腺、脑垂体、皮肤、牙齿、下颌下腺和白色脂肪等组织器官形态发生的最新研究进展进行综述。
综述了木素降解的关键酶之一锰过氧化物酶的三维分子结构和催化反应性能,综合概述了通过定点诱变等方法对锰过氧化物酶的结构和功能的研究进展。
利用转基因禽蛋作为生物反应器生产重组蛋白可能是未来基因工程最佳的表达系统之一,具有重要的经济价值,已引起越来越多的公司和研究人员的重视。由于禽类转基因的困难,尽管多年来人们在这个领域作过不懈的努力,但至今在其商业化进程方面仍未见有重要的突破。对该领域的研究进展和动向作出简要的评述。
RNA复制子是自主复制的RNA,保留了病毒复制酶基因,而结构蛋白基因缺失,由外源抗原基因取代,复制酶可控制载体RNA在胞浆中高水平复制和外源基因的高水平表达。用于开发复制子的主要是单股正链RNA病毒,如甲病毒(辛德比斯病毒、塞姆利基森林病毒、委内瑞拉马脑炎病毒)、黄病毒(登革热病毒、昆津病毒)、小RNA病毒(脊髓灰质炎病毒、人鼻病毒)、副粘病毒(犬瘟热病毒)、杯状病毒(猫杯状病毒)。基于复制子的疫苗不会产生能复制的感染性病毒粒子,不可能与细胞基因组发生整合,但可诱导全身免疫和粘膜免疫以及MHCI限制性CTL反应,而不受体内已有载体抗体的干扰。目前已开发了大量基于复制子的疫苗和肿瘤的治疗性和预防性疫苗,并在很多疾病模型上取得成功,包括病毒(流感病毒、人免疫缺陷病毒、拉沙病毒、马尔堡病毒、呼吸道合胞体病毒、诺沃克样病毒、马动脉炎病毒等)肿瘤(人乳头瘤、癌胚抗原、B16肿瘤、小鼠黑素瘤等)、以及细菌毒素(肉毒杆菌毒素、葡萄球菌肠毒素、破伤风毒素等)。
苏云金芽胞杆菌质粒编码的杀虫晶体蛋白基因的转录与芽胞形成σ因子密切相关,启动子的重叠是原毒素合成的一种机制,并且启动子上游区以及宿主细胞中σ因子的竞争对原毒素合成均具有转录调控作用。
表达uPA的CHOdhfr工程细胞CL11G在30升生物反应器中高密度大规模培养65天后,获得1200余升细胞培养上清;经阳离子交换层析、凝胶过滤、苯甲眯亲和层析和阴离子交换层析四步纯化工艺,获得uPA冻干纯品40克。对产品进行性质研究和质量检定,各项指标符合理论数据和《中国生物制品规程》。
将GPI锚定修饰的免疫分子直接转移到肿瘤细胞膜上,是研究治疗性肿瘤疫苗的一种有潜力的新策略。通过将从衰变加速因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列与SEA嵌合,获得了GPI修饰的SEA分子,构建的真核表达载体pCIGPI-SEA,用脂质体方法转染到CHOdhfr-细胞中,并用氨甲喋呤(MTX)进行筛选,细胞免疫荧光分析证实,SEA能够在细胞膜上表达。上述GPI锚定修饰的SEA,可用于进一步研究治疗性肿瘤疫苗。
血管内皮细胞生长抑制因子VEGI是肿瘤坏死因子超家族新成员,通过诱导内皮细胞凋亡而抑制肿瘤生长。通过PCR方法将CTTHWGFTLC与VEGI23-174氨基酸相连,构成嵌合分子VEGI+。原核表达的VEGI+经过纯化后,以非重折叠的沉淀形式进行活性实验,VEGI+能够抑制鸡胚尿囊膜血管新生,对于Lewis肺癌小鼠移植瘤,5mgL组抑瘤率99.7%,10mgL组抑瘤率96%,25mgL组抑瘤率83%。实验说明VEGI+通过抑制血管新生对移植瘤的早期发展起抑制作用。
Ea是一种植物来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂,分子量为18kD。利用其与丝氨酸蛋白酶家族成员的结合特性,可用于丝氨酸蛋白酶的结构与功能研究,也可作为亲和层析的配体而用于丝氨酸蛋白酶的纯化。将Ea基因插入大肠杆菌表达载体pET11a,在BL21(DE3)菌中以包涵体形式表达出重组蛋白质,表达量可占菌体蛋白质总量的30%。将包涵体变性、复性,得到具有天然抑制活性的rEa。经两步纯化所得rEa的纯度达到967%以上。活性分析表明,rEa对胰蛋白酶和人组织型纤溶酶原激活剂均有抑制作用。制备成rEaSepharose亲和柱可有效结合胰蛋白酶。
建立一种新的PCRELISA技术模式,简便、特异、敏感地检测肺炎衣原体,为肺炎衣原体的检测提供一种有效的新方法。采用链霉亲和素包被于聚乙烯微孔板,生物素标记的引物扩增目的DNA片段与荧光素标记的探针在微孔板内进行分子杂交,抗荧光素标记的辣根过氧化物酶可以与之结合,再加入底物即可产生颜色反应,通过测定其吸光度来进行结果判断。新建立的PCRELISA方法与其它相关的六种病原体无交叉反应,临床标本检测检出率高,呼吸道感染者标本42份检出率达2195%,肺炎患者标本465份检出率为4215%,比套式PCR方法及其它检测方法的检出率都高。应用新建立的PCRELISA方法检测肺炎衣原体特异、敏感,结果客观、稳定、可靠,对肺炎衣原体引起的疾病的诊断有十分重要的意义。
采用VectorNTI、DNATools等计算机分析软件及信息库,研究人重组磷脂酶D2(rhPLD2)变构体的生物学特征。rhPLD2具有多种基因结构和功能调控元件,其编码的蛋白质具有发挥功能所必需的活性保守基序和一定的空间结构,表明rhPLD2应是一种具有一定生物学功能的异质性蛋白质。
随着生物制药行业环境的变化和大剂量产品的出现,生产成本的压力日益凸现。从经济的角度探讨了重组药物上游及下游工艺设计和优化对投资和运转成本的影响,对于生物制药企业降低成本,提高竞争力有积极意义。
以专利为主的知识产权是生物技术和现代生物医药公司竞争优势的基础。必需结合公司的长远战略目标和目前实际,遵循成本效益原则,通盘考虑知识产权保护方式。以技术平台、药物、生物信息学软件发明等为例,介绍了商业秘密、专利和防御性出版等三种保护方式及其决策程序以及实施方案。
