基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷,并随着第一例基因打靶家畜的诞生而成为这一研究领域的热点。本文从制备乳腺生物反应器过程中基因打靶策略、打靶细胞到打靶位点的选择等各个方面,详细分析了其中的技术难点、解决问题的对策、国内外研究进展以及应用前景。
在HIV感染过程中,病毒被膜蛋白糖基化起着重要作用。它使病毒粒子具有高度糖基化的表面,帮助HIV逃避人体免疫细胞识别和攻击。在病毒入侵时,被膜糖蛋白与宿主细胞表面的受体结合,并进行一系列构象变化,使病毒粒子顺利地与宿主细胞膜融合。介绍近年来对被膜蛋白糖基化过程与HIV成熟、感染和逃避免疫应答等方面分子水平作用机理的深入了解,这些作用机理将会有助于艾滋病疫苗的研制和以“糖链为靶”药物的开发。
植物中的乙酰辅酶A羧化酶(acetylCoAcarboxylase,ACCase)分两种类型:原核类型的ACCase位于质体中,是脂肪酸合成途径中的关键酶;真核类型的ACCase位于胞质溶胶中,催化形成的产物主要用于长链脂肪酸的合成以及类黄酮等次生代谢产物的合成。但禾本科植物的质体和胞质溶胶中的ACCase都属于真核类型,其中质体中的是环己烯酮类和芳氧苯氧丙酸类等除草剂作用的靶蛋白。文中主要综述了植物中ACCase的生理功能、分子生物学特征及其对两类除草剂的敏感性,并对其基因工程作了展望。
蛋白质翻译产物在成熟过程中剪切释放出来的一段氨基酸序列称为“intein”———即内含肽。它与前体蛋白以框内融合的形式共同翻译,并内嵌于前体蛋白序列中。内含肽的解离以及内含肽两侧氨基酸序列的连接是在内含肽自身催化作用下完成的。本文将从内含肽的发现、结构特征和作用机理等方面对这种具有特殊意义的蛋白质成熟机制进行较为全面的论述,同时介绍了近年来发展起来的以内含肽介导的蛋白质剪接为基础的蛋白质纯化和改造技术。
甘油是包括酿酒酵母在内的许多种酵母细胞中的主要相容性溶质。为适应在高渗环境下的生存,酵母细胞将在胞内累积甘油。胞内甘油累积的增加可由甘油合成的增强,甘油利用的减弱,细胞膜通透性下降导致的胞内甘油流失的减少以及从环境中吸取更多的甘油而产生。本文综述了酵母细胞对环境渗透压变化的信号传导,高渗诱导的基因表达,环境渗透压升高时酵母细胞内甘油的累积以及甘油合成的限速步骤。
转基因在植物基因组中的整合分两步:在整合前阶段,转化的完整质粒及转基因片段经重组连接形成转基因串联子(transgenearray),其中不含任何植物基因组序列,连接反应由植物细胞本身的酶催化,仅依赖于游离的DNA末端,CaMV35S启动子和TDNA边界序列中的特定序列可能充当重组热点;在整合阶段,转基因DNA通过微同源介导的异常重组整合到植物基因组中,最初的整合位点作为整合热点,引导随后的转基因分子在该位点附近整合,不同转基因位点可被1～10kb植物DNA隔开,形成转基因簇(transgenecluster)。
从差异显示的基本原理出发,概述了差显的优缺点及其近年来在实验方法上的改进,并简要介绍了差显在植物尤其是木本植物研究中的应用。
酵母双杂交系统是在酵母体内分析蛋白质蛋白质相互作用的基因系统,由Fields等人于1989年首次建立并得到广泛地应用。十余年来,随着酵母双杂交迅速推广,不断涌现出一些衍生系统,其中包括酵母双杂交的二元诱饵系统,逆向双杂交系统,非转录读出特点的双杂交系统(如Sos蛋白招募系统、PI3K介导的靶蛋白识别系统和断裂泛素为基础的双杂交系统)以及转录激活因子与其相关蛋白之间的相互作用的双杂交系统(如以polⅢ为基础的杂交系统和RTA系统)等。它们的建立在很大程度上克服了传统酵母双杂交系统的局限性,扩大了被研究的蛋白质的范围,提高了系统的灵敏度。
微生物降酸是现代葡萄酒酿造重要工艺。将裂殖酵母苹果酸通透酶基因(mae1)和苹果酸酶基因(mae2)克隆到酿酒酵母中,构建了苹果酸酒精酵母;将mae1基因和乳酸乳球菌的苹果酸乳酸酶基因(mleS)克隆到酿酒酵母中,构建了苹果酸乳酸酵母。构建的酵母重组子能够有效地分解发酵基质中的苹果酸。
病毒编码的富含半胱氨酸的小分子量蛋白(CRPs)在植物和动物病毒中均有发现。动物病毒中研究较多的是反转录病毒的核蛋白(NC)。在植物病毒中由hordei,tobra,furoandcarlaviruses编码的CRPs的分子生物学研究近年来才开展起来。动物和植物病毒的CRPs共有的典型特征是均有锌指结构和碱性氨基酸丰富区,这使它们在核酸结合特性上有共同特征。动物病毒CRPs的结构和功能方面的研究已有很好的进展。相反,植物病毒的CRPs的研究进展较为缓慢。本文对病毒的CRPs的最新进展进行了综述。对动物和植物病毒的CRPs的比较分析有助于将来这类蛋白功能的阐明。
综述了运动蛋白的分类、病毒运动的两种形态、运动蛋白介导植物病毒细胞间运动的机制及其磷酸化调节,同时简要介绍了互补试验与删除试验在研究运动蛋白功能上的应用。
基因疫苗积极的临床结果证明了,基因免疫是一种有效的临床免疫模式。虽然,喷射注射法的精确作用机制还不太清楚,但临床前研究表明,在皮肤内直接打靶抗原呈递细胞可有效地增强免疫反应。另外,局部给药法和树突细胞体外加载抗原的实验结果显示,直接打靶抗原呈递细胞可放大、控制和调节预防及治疗性基因疫苗的免疫结果。尽管基因枪有许多令人鼓舞的优点,但由于价格和便利性的障碍,它是否能商业化还不能确定。利用基因法治疗和预防疾病所涉及的安全性对基因疫苗要求更严格。这要有可控的质粒导入系统和组织特异性表达系统。
用生物转化法将可再生资源(如淀粉、纤维素等)转化为重要的化工原料是目前生物技术领域的一个重要课题。本文以甘油生物转化为1,3丙二醇过程为考察对象,系统综述了该过程代谢和基因调控的研究现状,并对今后的研究提出了一些建议。
聚乙烯醇是一种广泛应用的水溶性聚合物,尤其作为纺织浆料。由于其生物难降解性,对水体会造成较大的污染,因此得到较多的关注。对聚乙烯醇生物处理的研究主要集中在生物降解酶和生物降解机理上,特别是随着对环境友好的酶加工纤维技术的不断发展,利用聚乙烯醇降解酶进行纺织脱浆已引起较大的兴趣。已发现的聚乙烯醇降解酶主要包括:聚乙烯醇氧化酶(仲醇氧化酶)、聚乙烯醇脱氢酶、β双酮水解酶(氧化型聚乙烯醇水解酶)。聚乙烯醇降解酶催化聚乙烯醇的生物降解主要分为两步进行。聚乙烯醇酶脱浆技术不仅节省了脱浆能耗,而且提高了脱浆废水的生物可降解性。
就发根农杆菌Ri质粒的研究进展进行了综述和展望。包括Ri质粒的特性,转化机制及转化方法,影响农杆菌转化成功的因素以及发根农杆菌的应用。
地球上许多生境为永久低温或季节性低温环境,适冷微生物在自然界中广泛存在。适冷微生物在环境净化、饲料、食品、奶制品、化妆品、皮革加工、洗涤等行业中具有广泛的应用前景。对适冷微生物的多样性、适冷的分子基础和适冷代谢机制进行了综述。
对毕赤酵母表达重组人白细胞介素11(rhIL11)工程菌的连续培养进行了工艺研究。连续培养在10L工作体积的发酵罐中进行,整个发酵过程历时约20天,发酵上清中rhIL11表达浓度约400mgml。在稀释率D=005h下,菌浓OD600达到100以上。
用Trizol法提取胎盘组织总RNA,通过RTPCR方法获得人层粘连蛋白α4链LG3组件的特异扩增产物。将PCR产物克隆入PMD18T载体中,PCR与酶切鉴定正确后进行序列测定。用测序正确的克隆片段与原核表达载体PET28a进行体外重组,构建了LG3的原核表达载体,并在BL21(DE3)菌株中得到了表达。
由于错位dsRNA的毒副作用得到降低,因此是一类很有潜力的抗病毒、抗肿瘤物质。研究中利用家兔实验评价了PolyI:C和PolyI:C12U引起的热原反应。在10mgml、1mgml、005mgml剂量水平PolyI:C12U均未产生发热和其他毒副作用,而PolyI:C实验组均有发热现象,甚至有家兔死亡。
当前世界经济发展的重要特征是全球化趋势,及以信息和生物技术为代表的高新技术发展所带来的经济格局与增长方式的变化。中国入世是中国参加世界经济全球化进程的一个重要里程碑,标志着中国对外开放和合作将进入一个新的阶段。这为我国开展广泛的国际合作创造了良好的氛围与基础,也提出了新的要求。当今科技发展的特点决定了我们所面临的许多重大科技问题,如人类基因组计划、空间计划等都需要国际大合作。我国与发达国家政策...
