动脉粥样硬化性心血管疾病是危害人类健康的常见疾病之一。A类清道夫受体是动脉粥样硬化发生和发展过程中的主要参与者之一,介导巨噬细胞内吞修饰的低密度脂蛋白,形成泡沫细胞,有明显的致动脉粥样硬化作用,是治疗动脉粥样硬化的潜在靶点。另外A类清道夫受体还参与机体的防御过程。重点综述了A类清道夫受体各成员结构及其在动脉粥样硬化中的生理作用和在新药研发方面的应用与展望。
分离染色体DNA上的目的片段,对其进行结构及功能的分析,对于发现新基因,研究基因功能都具有很大的意义。利用TAR克隆技术可以直接从基因组中分离所需的目的片段,这比传统的通过筛库获得目的片段的方法简便、快速、准确并且特异性强 。
韧皮部特异性启动子可驱动其下游基因在植物的韧皮部特异性表达,通过将几种韧皮部特异性启动子的序列进行比较,发现这类启动子在结构上存在可能与组织特异性有关的保守基序。对这类启动子的结构与功能的研究将有助于提高人们对植物维管组织分化及有机物质运输机制的了解,而且也会为植物抗病虫基因工程的研究提供有应用价值的启动子元件。就韧皮部特异性启动子的结构特点、分类及应用进行了概述。
昆虫病毒gp37fusolin基因属病毒复制非必需基因,其编码的蛋白能形成一种纺锤形包涵体(spindlebodies,SBs),该包涵体内不含有病毒粒子。Fusolin蛋白形成的SBs与纯化的Fusolin蛋白均能提高靶昆虫对杆状病毒的敏感性,推测GP37蛋白也具有类似的功能。对gp37fusolin基因的深入研究,有可能开发出新型病毒增效剂 。
代谢转基因是通过基因工程技术对细胞内的代谢途径进行遗传修饰,进而完成细胞特性改造。代谢修饰转基因植物是一个极具商业前景的领域,在医药、环境、农业等方面已有许多成功应用的实例。综合调控代谢的基因工程策略,讨论了代谢转基因植物的研究现状,我国农业生产中存在的主要问题和代谢转基因技术对我国农业发展的意义和前景。
动物细胞大量培养是生产生物制品的重要途径,它用到的关键设备是生物反应器。根据培养细胞、培养载体、培养液混合方式的不同,生物反应器主要有搅拌式、气升式、中空纤维式、回转式等,其中搅拌式规模最大。回转式是NASA于20世纪90年代中期开发的一种新型生物反应器,被誉为空间生物反应器,可用于组织工程研究。与生物反应器配套的技术主要有灌注、微载体、多孔微球、转入抗凋亡基因等,可以有效地提高细胞密度,增加生物制品产量,提高质量。今后生物反应器研制主要朝两个方向发展:一是,以高密度培养动物细胞生产蛋白质药物为目的,二是以三维培养动物细胞(主要是人类细胞)再生组织或器官为目的。
随着分子生物学和各项技术的发展,稻米品质的研究取得了一些进展。从与稻米品质中的直链淀粉含量、胶稠度、垩白、糊化温度及碾磨品质有关的基因或QTL,ADP葡聚糖焦磷酸化酶、淀粉合成酶、分支酶及脱支酶在淀粉合成中的作用以及胚乳淀粉粒的形成、形态与结构等方面作了综述 。
在哺乳动物中,存在各种转谷氨酰胺酶,它们通过催化的酰基转移反应,使蛋白质发生修饰。它们参与了多种生理过程,同时和多种疾病相关,其中主要为炎症性疾病,神经退行性病变和肿瘤性疾病等三大类疾病。随着对其参与疾病的机理逐渐明了,转谷氨酰胺酶开始用于疾病的诊断和治疗 。
环境问题日益成为人们关注的焦点,现代工业的发展使人类对化石燃料的依赖性越来越大。化石燃料的大量使用也造成了环境的严重污染,常规的加氢法处理燃油能耗高,处理效果不理想等方面的缺陷促进了生物脱硫的研究。简述了国外过去三年来在生物脱硫工作中取得的进展,包括菌株的改造;单加氧酶活力必需的黄素还原酶DszD;途径的最后一个酶HPBS脱硫酶以及国外公司的一些工作。
重组蛋白瑞替普酶是重组人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的缺失变异体(reteplase),为第三代治疗血栓性疾病的溶栓药物,具有半衰期长、出血副作用小的特点,是有前途的新型溶栓药物。在研究开发和产业化过程中的难点是含有9对二硫键,难以提高复性率,综述了瑞替普酶的分子生物学及变性和复性研究进展。
转座子标签(transposontagging)技术是研究功能基因的有效的工具之一。介绍了几种在酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)基因功能研究中应用的转座子标签:mTn3标签、miniMu噬菌体标签和Ty转座子标签,阐述了转座子标签的构建原理、应用策略和转座子标签插入位点的鉴定方法。
以小麦品种H6756和藁城8901作为基因枪转化的靶材料,取其护颖至雌雄蕊原基形成期的幼穗,用含逆境诱导转录因子DREB1A和bar基因的质粒pAHC25轰击胚性愈伤组织,在分别含有5mgL和10mgLBasta溶液的培养基上进行筛选。得到的抗性愈伤组织在不含Basta溶液的培养基上再生培养,获得218棵再生植株。田间涂抹浓度为100mgL的Basta溶液检测后,对抗性植株作PCR检测,获得54棵再生植株。通过对其中20株T1代的PCR和Southern杂交分析,已获得14株含DREB1A和bar基因的转基因小麦植株,其中H675613株,藁城89011株。
应用方伟武教授提出的一种新的信息离散性度量方法———FDOD(functionofdegreeofdisagreement)方法对致病性大肠杆菌O157∶H7和非致病性大肠杆菌K12的全基因组序列进行了比较,分析了二者的相似序列部分,及差异较大的序列部分,证实了大肠杆菌O157∶H7核酸序列注释中可能致病的特有序列与正常序列的不同。
遗传工程小鼠模型是基因功能、人类疾病发病机制及新药研究开发的最重要的模式生物之一。在建立遗传工程小鼠模型的众多方法中,显微注射法是目前国际上公认的制备转基因及基因剔除动物模型的首选。在进行了大量显微注射工作后,简要介绍建立遗传工程小鼠模型的基本技术与方法,并对在显微操作过程中较为关键的因素进行一些分析和讨论。
在摇瓶中对工程菌DH5αpBV220生产rhGCSF的发酵培养基进行了研究,从几种常用的细菌培养基中筛选适合工程菌表达rhGCSF的M9培养基。利用正交试验优化出生产重组人rhGCSF的优化培养基配方,其中优化碳源含量为2%的葡萄糖,氮源为25%的酵母粉、3%的蛋白胨和01%的(NH4)2SO4以及少量的无机盐。使用优化培养基可使rhGCSF的表达量达到338%,比优化前提高了489%。
3羟基丁酸与3羟基己酸共聚酯(PHBHHx)是由微生物合成的完全可降解高分子材料,其材料性能与3羟基己酸(3HHx)在共聚物中的含量有关。嗜水性气单孢菌A.hydrophila4AK4合成的PHBHHx中,3HHx含量通常都在12～15mol%之间。通过在培养基中添加正丁醇,降低了PHBHHx中3HHx的含量。在摇瓶培养中获得了含3HHx为58mol%的PHBHHx;在6L发酵罐中54h的发酵培养,获得40gL的细胞干重(CDW),并将3HHx的含量在发酵过程中有效地降低到5～10mol%。
为了确定苦荞主要过敏原蛋白TB22的抗原决定簇,揭示其致敏机制,为以后的分子改造及育种改良打下基础,需要在体外微生物体系中获得大量的纯化蛋白。以pQE31为表达载体,M15为表达菌株,使用IPTG诱导,在37℃获得了以包涵体形式存在的表达产物。经WesternBlotting检测,证明表达条带N端带有Histidinetag。使用8molL尿素初步纯化后,目的蛋白含量达到40%以上。进一步HitrapChelatingHP亲和纯化,表达蛋白的纯度达到90%以上。建立了适合重组TB22纯化的基本方法,得到了纯化的包涵体,为抗TB22抗体的制备及其抗原决定簇的研究奠定了基础。
降落(touchdown,TD)PCR通常涉及15个退火温度,程序设计复杂。报道了一种简便高效的改良降落PCR,只需5个降落退火温度,以杜氏盐藻(Dunaliellabardawil)基因组为模板,设计一对引物扩增胡萝卜素生物合成相关(carotenebiosynthesisrelated,cbr)基因的第3外显子。实验证实该方法程序简单,比标准降落PCR步骤简化70%,且产物的特异性及效率都有较大提高。
为了提取芒果子叶总RNA,去除次生物质和多糖等杂质的严重干扰,采用了正交试验快速优化提取方法。实验证明70%的丙酮能有效地去除大部分杂质,提取过程一天内可完成,RNA含量可达677μgg·FW,A260A280比值为195,RNA的纯度及质量适合后续反应。
2003年4月14日生命科学诞生了一个新的重要里程碑,人类基因组计划完成,后基因组时代正式来临。着重介绍了人类基因组计划的提出、目标与任务、实施与进展等方面的基本情况,讨论了后基因组时代的时间界定,分析展望了后基因组时代与人类基因组计划密切相关的生物信息学、功能基因组学、蛋白质组学、药物基因组学等几个重要研究领域 。
全球生物技术产业尚处于发展时期,政府的政策对技术的进步和产业的发展有明显的导向和促进作用。对美国、欧洲等国家和地区的产业政策进行综合研究,发现这些生物技术产业相对发达的国家和地区,尤其是美国,其产业政策已成体系,而且可操作性强,对产业的推动作用明显,具有相当的可借鉴意义。从组织管理结构、科研投入机制、鼓励研发创新、财税支持方式、资本市场培育、产业基地建设、中介服务网络构建、人才培养与引进、以及国际合作等方面对国际上行之有效的生物技术产业政策进行了归纳分析 。
全球生物药品销售额以年均约30%的速度增长,大大高于全医药行业年均不到10%的增长速度,生物技术产业已不是几个国家的产业,而是一个全球化发展的产业,由于全球生态环境日益恶化,严重影响了各国发展的后劲,于是它们纷纷将发展生物技术产业作为可持续发展战略的一个重要内容。生物医药产业可持续发展是环境与发展战略的需要,其核心是技术创新,提出了生物医药产业可持续发展链和区域经济竞争力是促进生物医药产业可持续发展的基石,阐述了生物医药产业发展只有立足现实、谋划长远,紧抓发展优势,才能实现可持续发展战略目标。
