为了确定苦荞主要过敏原蛋白TB22的抗原决定簇,揭示其致敏机制,为以后的分子改造及育种改良打下基础,需要在体外微生物体系中获得大量的纯化蛋白。以pQE31为表达载体,M15为表达菌株,使用IPTG诱导,在37℃获得了以包涵体形式存在的表达产物。经WesternBlotting检测,证明表达条带N端带有Histidinetag。使用8molL尿素初步纯化后,目的蛋白含量达到40%以上。进一步HitrapChelatingHP亲和纯化,表达蛋白的纯度达到90%以上。建立了适合重组TB22纯化的基本方法,得到了纯化的包涵体,为抗TB22抗体的制备及其抗原决定簇的研究奠定了基础。
山西省科技厅攻关项目 ( 0 110 0 1)
畅文军, 景巍, 侯晓军, 张政, 王转花. 苦荞过敏蛋白TB22的原核表达及纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2003, 23(11): 76-79.
https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2003/V23/I11/76
Cited