拟南芥色氨酸生物合成途径的研究已逐渐成为植物分子生物学家了解植物基因结构和表达调控最主要的模式系统之一。到目前为止,编码拟南芥色氨酸合成途径的七种酶蛋白的基因已经全部被克隆,并进行了不同程度的分子生物学研究。长期以来,色氨酸一直被认为是植物生长素吲哚乙酸(IAA)生物合成(从头合成)的前体物,但近年来人们发现生长素合成的非色氨酸途径可能是其在植物中生物合成的主要途径。植物在不同的发育阶段可能采用不同的方式合成IAA。
过去20年,人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因。这主要借助于蛋白质产物的分离纯化,然后根据其氨基酸结构推算其相应的核苷酸序列,并据此合成寡核苷酸探针,最终从cDNA文库或基因组文库中筛选出目的基因。而未知其编码产物的发育基因的分离克隆则是非常困难的工作,以前广泛应用的主要方法有DNA标签法(DNAtagging)[1,2,3],作图克隆法(map-basedcloning)[4],差别筛选法(diferentialscreening)[5]和扣除杂交法(subtractivehybridization)[6,7,8]。这些方法虽然都取得了一定的成功,但由于各自的缺陷性,而限制了它们更加广泛的应用。近年来在PCR技术的基础上,人们已经建立了若干种分离克隆植物发育基因的新方法。1992年,LiangP和PardeeA[9]首次提出并运用了mRNA差别显示技术(mRNAdif-ferentialdisplayreversetranscription-PCR,DDRT-PCR)来进行基因的分离。实践表明,mRNA差别显示技术在分离、鉴定差别表达的新基因方面与以前的各种技术相比有其独特的优越性,但同时它也存在着重复性较差等缺点。因此,最近研究工作者又在其基础上,发展了诸如代表性差式分析(representationaldiferenceanalysis,RDA)[10,11]和抑制性扣除(或减去)杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)[12]等一些更新的方法。下面就此作一简要概述。
本文介绍了生化反应系统中的非线性行为及非线性理论在生化反应过程研究中的应用,在理论和方法上为生化反应的研究提供了范例。
光合细菌在鱼池、虾池和工业污水中净化水质能力试验,结果表明在鱼、虾池中可保持水质,增氧量,pH值的稳定,并能大幅度降低COD,BOD,硫化氢和氢态氮含量。
植物几丁质酶按其蛋白氨基酸序列结构特征及同源性可分为六类,即:ClassI-Ⅵ。ClasI在蛋白氨基酸结构上包括三个功能区域,N-端是富含半胱氨酸的几丁质结合区,约40个氨基酸;C-端是酶的催化区,也是酶的主要功能区域,约300个氨基酸;二者通过一个多变的交联区连接在一起。ClassⅡ仅具有类似于ClassⅠ的酶催化区域,而没有几丁质结合区和交联区。ClassⅢ几丁质酶在氨基酸序列上与ClassⅠ和Ⅱ没有任何同源性,其中有些具有几丁质酶和溶菌酶双重活性。ClassⅣ类似于ClassⅠ,只是在几丁质结合区和催化区缺失了少数氨基酸。ClassV类似于ClassⅠ,但具有两个重复的几丁质结合区。ClasVI与前五类几丁质酶无同源性,但与微生物几丁质酶有同源性。所有的植物几丁质酶都是由一个小的多基因族编码的,一般基因中有二个内含子,都位于催化区内。几丁质酶的表达受病原物和植物激素的诱导而表达,也与植物的发育有关。通过转几丁质酶基因的工程植株分析几丁质酶基因的启动子,已鉴定出负责几丁质酶表达的调控序列。
DNA芯片技术及其应用安海谦卢圣栋(中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室)DNA芯片(DNAChip)又被称为生物集成模片,DNA阵列或寡核苷酸微芯片(Bio-Chip,DNAarrays,aligonucleotidemicrochip)等。这项技术是由位于美国旧金山以南的SantaClara的一个新兴生物技术公司Afymetrix首先发展起来的。它是受到在固相支持物上...
野生稻是提供优异基因、拓宽栽培稻遗传基础的重要种质资源库。非AA染色体组型野生稻优异基因转移和利用的主要难点在于,与栽培稻的亲缘关系远及由此而产生杂交不实、杂种不育和后代难以利用等问题。细胞工程和分子生物学手段相结合,是实现非AA型野生稻利用的有效途径。原生质体融合可以克服有效杂交的不亲和性,花药培养能加速后代的纯合和稳定,分子生物学技术可以跟踪目的基因的导入,打破连锁障碍,促进有利基因的重组,提高材料的可利用性,并为目的基因的克隆提供基础。
动物细胞高密度培养用多孔微球王佃亮肖成祖(中国人民解放军航空医学研究所100036)多孔微球(porousmicrospheres)又称多孔微载体(porousmicrocariers)或大孔微载体(macroporousmicrocariers),是近几年在国外发展起来的一项新的动物细胞高密度培养生物技术。它克服了固体微载体(solidmicrocar-iers)培养时细胞仅在表面生长、微...
杂合性丢失分析资料显示,在肝癌的发生和演进过程中涉及多种抑癌基因失活。国内外研究表明,肝癌中存在抑癌基因TP53突变失活,TP53基因突变表现特异性和病因相关性。作者通过检查15个高度多态的微卫星标记,进行染色体缺失精细定位,将肝癌中染色体13q缺失的最小重叠区域限定于13q14,强烈提示RB1基因为染色体缺失的靶基因;进一步应用PCR-SSCP分析和DNA测序发现2例发生染色体13q臂内缺失的肝癌中有RB1基因微小缺失,其结果是无法编码有功能的蛋白产物,从而找到肝癌中RB1基因失活的可靠证据;免疫组织化学染色表明,52%的肝癌组织中p110RB1蛋白丢失且与染色体13q杂合性丢失高度相关。因此,确定RB1基因为肝癌的又一重要抑癌基因。
下游层析工艺开拓中,选择层析介质最重要的因素包括纯度、动力载量和凝胶的使用寿命。本文作者示范了介质的动力载量及其回收率的重要区别。
生物药品制造工艺中清洗操作的验证汪恩浩(深圳康泰生物制品有限公司518057)关键词药品生产清洗操作验证为了保证药品质量,必须实施工艺验证,对于清洗操作也是一样,以科学为依据的验证是质量保证的基础之一。清洗操作是在设备安装后、换批或更换产品前必须进行的操作。清洗操作是否彻底或适当?如何决定清洗的终点?如何检定清洗的效果等等问题,过去少有人重视,往往凭经验或感觉,清洗到大概差不多,看看洗出液是...