枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

中国生物工程杂志

2004, Vol. 24

Issue (8): 77-81

论文

枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

周建, 董亚芳, 吴自荣

华东师范大学生命科学学院, 上海 200062

全文: PDF(251 KB) HTML

摘要：

利用PCR技术 ,从枯草杆菌DB40 3染色体上扩增出谷氨酰胺转胺酶基因 ,将其克隆到大肠杆菌载体pET32a( + )中 ,成功构建谷氨酰胺转胺酶表达载体pET32-BTGase ,并转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)。重组克隆在IPTG诱导下 ,表达出硫氧还蛋白谷氨酰胺转胺酶 (Trx-BTGase)融合蛋白 ,表达量占细菌总蛋白量的 2 6%。利用金属螯合层析纯化菌体裂解上清中表达的融合蛋白 ,纯度超过 80 %,再通过分子筛层析进一步纯化得到融合蛋白纯品。酶活性分析表明表达的Trx-BTGase融合蛋白具有交联蛋白的活性 ,并发现Trx-BTGase融合蛋白和经凝血酶酶切后得到的BTGase单体都能催化牛血清白蛋白的聚合反应

关键词： 谷氨酰胺转胺酶; 枯草杆菌; 融合表达

收稿日期: 2004-02-23 出版日期: 2004-08-25

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章

引用本文:

周建, 董亚芳, 吴自荣. 枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达[J]. 中国生物工程杂志, 2004, 24(8): 77-81.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2004/V24/I8/77

[1]	宋佳雯, 田苏, 张玉如, 王志珍, 常忠义, 高红亮, 步国建, 金明飞. 基因组重排筛选高产谷氨酰胺转胺酶菌株[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(9): 105-111.
[2]	徐安健, 李艳萌, 李斯文, 乌姗娜, 张蓓, 黄坚. 人组氨酸磷酸酶蛋白PHPT1的细胞定位及其对细胞层状伪足形成的影响[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(6): 17-21.
[3]	田淑翠, 牛延宁, 常忠义, 高红亮, 步国健, 金明飞. 常压室温等离子体(ARTP)诱变茂源链霉菌菌株[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(9): 47-53.
[4]	刘婧莹, 刘晨浪, 张允雷, 王世奇, 夏立秋, 张友明. 牛乳铁蛋白肽(LfcinB)在苏云金芽胞杆菌中的融合表达[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(8): 23-30.
[5]	朱晓鹏, 张亚宁, 于津鹏, 李晓丹, 罗素兰, 长孙东亭. 芋螺毒素MrIA的串联表达、纯化及生物活性鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 81-88.
[6]	郭玮婷, 张慧, 查东风, 黄汉峰, 黄静, 高红亮, 常忠义, 金明飞, 鲁伟. 产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(8): 83-89.
[7]	刘雅清, 侯孝仑, 郭玮婷, 常忠义, 高红亮, 步国健, 鲁伟, 解秀娟, 金明飞. 甲壳素促进茂源链霉菌发酵产酶[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(6): 40-45.
[8]	施贤卫, 张伟涛, 张小飞, 杨广宇, 冯雁. Actinosynne mamirum DSM43827溶解性多糖单加氧酶的异源表达和酶学性质表征[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(7): 17-23.
[9]	裴正培, 李博, 张伟, 高红亮, 常忠义, 金明飞, 鲁伟, 步国建. 药用级微生物谷氨酰胺转胺酶的纯化工艺研究[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(4): 53-58.
[10]	汪建峰, 张嗣良, 王勇. 大肠杆菌中从头合成白藜芦醇途径的设计及优化[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(2): 71-77.
[11]	赵海洋, 王泽, 黄鹏煌, 田海山, 李校堃, 杨树林. rhKGF2-EGFP的融合表达及醇脂质体的制备[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(10): 22-27.
[12]	陈佳, 金明飞, 谭玉静, 刘颖, 田沛霖, 常忠义, 步建国. NaCl对轮枝链霉菌产谷氨酰胺转胺酶的促进作用研究[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(2): 54-58.
[13]	陈爱春, 彭伟, 汪生鹏. 亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(12): 93-103.
[14]	石继红, 石珊, 白晓智, 官浩, 陶克, 胡晓龙, 刘佳琦, 胡大海. RGD重组人IL-10的克隆、表达及其拮抗纤维化的初步研究[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(02): 17-23.
[15]	张佳瑜, 吴丹, 陈晟, 陈坚, 吴敬. 麦芽糖诱导软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草杆菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(12): 42-48.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed