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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志  2013, Vol. 33 Issue (6): 125-130    
农业生物技术专栏     
转基因玉米中植酸酶蛋白免疫亲和纯化体系的建立
赵倩倩1, 周晓今1, 柳小庆1, 杨文竹1, 李素贞2, 刘奇3, 陈茹梅1
1. 中国农业科学院生物技术研究所 作物功能基因组与遗传改良中心 北京 100081;
2. 河北农业大学 保定 071001;
3. 北京奥创金标生物技术有限公司 北京 102600
Purification of Phytase from Transgenic Maize by Immunoaffinity Chromatography
ZHAO Qian-qian1, ZHOU Xiao-jin1, LIU Xiao-qing1, YANG Wen-zhu1, LI Su-zhen2, LIU Qi3, CHEN Ru-mei1
1. Crop functional genome and genetic improvement department, Biotechnology institute, CAAS, Beijing 100081, China;
2. Agricultural University of Hebei, Baoding 071001, China;
3. Beijing Artron Biotech Co., Ltd., Beijing 102600, China
 全文: PDF(847 KB)   HTML
摘要:

为深入研究转基因玉米所表达的植酸酶蛋白的酶学性质,评价重组蛋白的致敏性和饲用安全性,必须获得高纯度植酸酶蛋白。利用识别4个不同表位的单克隆抗体制备了植酸酶蛋白亲和层析体系。结果显示,通过80%硫酸铵沉淀植酸酶蛋白粗提液初步浓缩目的蛋白后,再经过透析去除高浓度盐离子,进而通过免疫亲和层析可获得在SDS-PAGE胶上条带单一的植酸酶蛋白,比活可达470.99 U/mg。同时,将上述免疫亲和层析法对植酸酶的纯化效果与离子交换层析方法进行了对比,结果表明免疫亲和层析法具有稳定、快速和纯化产物比活高等优势,所获得的目的蛋白满足各种检测要求,优于离子交换层析方法。

关键词: 植酸酶蛋白纯化免疫亲和层析硫酸铵沉淀离子交换层析    
Abstract:

For further investigating the enzymatic characterizations, evaluating the allergenicity and feed safety of the phytase generated from transgenic phytase corn, A more effective purification system using immuno-affinity chromatography was established. In order to increase the loading capacity and maintain the specificity, four monoclonal antibodies recognizing different epitopes of phytase were combined together. The crude extraction could be concentrated by 80% ammonium sulfate, and then subjected to dialysis and immune-affinity chromatography. The purification results showed that the obtained protein has an exclusive specific band in SDS-PAGE and 470.99 U/mg in specific activity. Furthermore, comparing to ion exchange chromatography, the immune-affinity based method was more stable and effective, the resultant product can meet the demands for various analysis.

Key words: Phytase    Protein purification    Immune-affinity chromatography    Sulfate precipitation    Ion exchange chromatography
收稿日期: 2013-02-22 出版日期: 2013-06-25
ZTFLH:  Q819  
通讯作者: 陈茹梅     E-mail: chenrumei@caas.cn
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赵倩倩
周晓今
柳小庆
杨文竹
李素贞
刘奇
陈茹梅

引用本文:

赵倩倩, 周晓今, 柳小庆, 杨文竹, 李素贞, 刘奇, 陈茹梅. 转基因玉米中植酸酶蛋白免疫亲和纯化体系的建立[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(6): 125-130.

ZHAO Qian-qian, ZHOU Xiao-jin, LIU Xiao-qing, YANG Wen-zhu, LI Su-zhen, LIU Qi, CHEN Ru-mei. Purification of Phytase from Transgenic Maize by Immunoaffinity Chromatography. China Biotechnology, 2013, 33(6): 125-130.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/        https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2013/V33/I6/125

[1] Brinch-Pedersen H, Sorensen L D, Holm P B. Engineering crop plants: getting a handle on phosphate. Trends Plant Sci, 2002,7: 118-125.
[2] Vohra A, Satyanarayana T. Phytases microbial sources, production, purification, and potential biotechnological applications. Crit Rev Biotechnol, 2003, 23: 29-60.
[3] Bitar K, Reinhold J G. Phytase and alkaline phosphatase activities in intestinal mucosae of rat, chicken, calf, and man. Biochim Biophys Acta, 1972, 268: 420-452.
[4] Asada K, Tanaka K, Kasai Z. Formation of phytic acid in cereal grains. Ann Ny Acad Sci, 1969, 165: 801-814.
[5] Urbano G, López-Jurado M, Aranda P, et al. The role of phytic acid in legumes: antinutrient or beneficial function? J Physiol Biochem, 2000, 56(3): 283-294.
[6] Chen R M, Xue G X, Chen P, et al. Transgenic maize plants expressing a fungal phytase gene. Transgenic Res, 2008, 17: 633-643.
[7] 罗会颖, 姚斌, 袁铁铮,等. 来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达. 生物工程学报, 2004, 20(1): 73-84. Luo H Y, Yao B, Yuan T Z, et al. Overexpression of Escherchia coli phytase with high specific activity. Chin J Biotechnol, 2004, 20: 73-84.
[8] Kerovuo J, Lauraeus M, Nurminen P, et al. Isolation, characterization, molecular gene cloning, and sequencing of a novel phytase from Bacillus subtilis. Appl Environ Microbiol, 1998, 64: 2079-2085.
[9] 闫广为, 陈茹梅, 石鹏君,等. 转基因玉米中植酸酶蛋白沉淀条件探索. 中国农业科技导报, 2009, 11(4): 118-122. Yan G W, Chen R M, Shi P J, et al. Studies on precipitation conditions of phytase protein from transgenic corn. Journal of Agricultural Science and Technology, 2009,11(4): 118-122.
[10] 姚斌,袁铁铮,范云六,等. 来源于Bacillus subtilis的中性植酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达. 生物工程学报, 2001,170(1): 11-15. Yao B, Yuan T Z, Fang Y L,et.al. Cloning of neutral phytase gene nphy from Bacillus subtilis and its expression in Escherichia coli. Chin J Biotechnol, 2001,17(1):11-15.
[11] Spier M R, Fendrich R C, Almeida P C, et al. Phytase produced on citric byproducts: purification and characterization. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2010, 27: 267-274.
[12] Dionisio G, Madsen C K, Holm P B, et al. Cloning and characterization of purple acid phosphatase phytases from wheat, barley, maize, and rice. Physiol, 2011, 156: 1087-1100.

[1] 陈中伟,郑璞,陈鹏程,吴丹. 耐热植酸酶突变体的筛选及性质研究 *[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 30-37.
[2] 赵伟,李敬达,刘庆平. 重组蛋白下游连续纯化技术的研究进展 *[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(10): 74-81.
[3] 王凯, 张威, 李师翁. 植酸酶及其应用[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(9): 85-93.
[4] 王世奇, 刘婧莹, 刘晨浪, 李纯, 胡晓凤, 夏立秋, 张友明. sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(12): 1-7.
[5] 裴正培, 李博, 张伟, 高红亮, 常忠义, 金明飞, 鲁伟, 步国建. 药用级微生物谷氨酰胺转胺酶的纯化工艺研究[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(4): 53-58.
[6] 孙少飞, 汪蓓蕾, 袁婷, 张斌, 张欣, 郭刚, 张瑞. 重组蛋白TAT-NLS-Nkx6.2在大肠杆菌的表达纯化及活性测定[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(9): 24-30.
[7] 赵志敬, 王学忠, 沈文婷, 胡广. 非对称二甲基精氨酸水解酶的表达纯化及其酶学性质的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(4): 46-53.
[8] 高涵, 薛利军, 刘小北, 冒晓蓓, 任丽丽, 耿建, 戴婷婷, 于锋, 褚晓源. 幽门螺杆菌BabA蛋白N段的基因克隆、表达纯化及体外粘附活性评价[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(3): 34-40.
[9] 黄振蓉, 吴海丽, 张三军, 杜冰, 钱旻, 任华. E.coli RecQ解旋酶克隆表达纯化及生物学活性检测[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(3): 21-27.
[10] 王晶, 吴陆生, 陈小佳, 董濠鋆, 沈巍, 张敏仪, 洪岸. 重组蛋白NtA-PACAP在大肠杆菌中的表达纯化及活性测定[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(3): 28-33.
[11] 吴海丽, 张三军, 杜冰, 钱旻, 任华. Bacillus subtilis RecQ酶精氨酸突变体表达纯化及活性检测[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(12): 29-34.
[12] 韩翠晓, 李锋, 严孝金, 冯舵, 李倩倩, 高宏波, 高伟. 叶绿体分裂蛋白PDV1胞质侧结构域可溶性表达条件的研究及纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(6): 35-42.
[13] 冯舵, 张阔, 李倩倩, 韩翠晓, 高伟. 福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶的表达、纯化、活性检测及晶体生长的初步研究[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(08): 24-29.
[14] 李倩倩, 李中媛, 冯舵, 黄火清, 韩翠晓, 杨培龙, 姚斌, 高伟. 芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核可溶性表达优化及包涵体复性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(08): 49-55.
[15] 李骁, 刘留, 张磊, 周亚竟. 人源DNA聚合酶Pol δ小亚基p12的抗体制备及应用[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(05): 12-18.