gAd重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

中国生物工程杂志

2005, Vol. 25

Issue (8): 93-97,102

论文

gAd重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

杨泽华, 解军, 杨琦, 张悦红, 牛勃

山西医科大学生物化学与分子生物学系, 太原 030001

全文: PDF(408 KB) HTML

摘要：

为了建立人脂联素球状结构域(gAd)原核高效表达体系,分离纯化gAd并检测其生物活性,从淋巴细胞中提取人基因组DNA,PCR扩增出含有脂联素编码序列的片段,通过T-A克隆的方法克隆入pMD18-T载体中,然后设计适当的引物引入起始密码、终止密码以及相应的酶切位点,把脂联素球状结构域(gAd)基因亚克隆到表达载体pBV220,将序列鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌DH5α中,用42℃温控诱导目的蛋白的表达;超声破菌,分离纯化包涵体,8mol/L尿素溶解,采用梯度稀释法复性重组蛋白,动物实验测定其活性。结果在大肠杆菌中成功实现了gAd稳定的以包涵体形式的高效表达,表达量约占全菌蛋白的20%,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定分离得到的包涵体具有较高纯度,复性后具有降低家兔血糖和游离脂肪酸的作用。为进一步研究gAd的生物学活性、作用机制奠定了基础。

关键词： 脂联素球状结构域; 包涵体; 基因工程

收稿日期: 2005-04-12 出版日期: 2005-08-25

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杨泽华, 解军, 杨琦, 张悦红, 牛勃. gAd重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(8): 93-97,102.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I8/93

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