用抑制性差减杂交构建新疆Kaposi肉瘤差异表达基因文库

中国生物工程杂志

2005, Vol. 25

Issue (8): 65-69

论文

用抑制性差减杂交构建新疆Kaposi肉瘤差异表达基因文库

李冬妹¹, 杨磊¹, 仙玲玲¹, 谭晓华¹, 李锋¹, 应康², 普雄民³, 王小波⁴, 何玲¹

1. 石河子大学新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室, 石河子 832002;
2. 复旦大学遗传工程国家重点实验室, 上海 200031;
3. 新疆维吾尔自治区人民医院, 乌鲁木齐830001;
4. 石河子大学医学院第一附属医院皮肤科, 石河子 832002

全文: PDF(336 KB) HTML

摘要：

目的:分离卡波氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma,KS)差异表达基因,并建立相应的cDNA文库,为从分子水平揭示KS发病机制打下良好的基础。方法:采集KS肉瘤及来源于同一患者的正常皮肤组织,抽提总RNA,经逆转录酶合成dscDNA,并经RsaⅠ酶切,与2种不同的接头衔接,分别以正常组织和肿瘤组织作为tester和driver,进行双向抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH),初步筛选KS肉瘤与正常皮肤差异表达基因,将差异基因PCR扩增,产物与pGEM-Teasy克隆载体连接,转化DH5α大肠杆菌,采用蓝白斑筛选,获得白色阳性克隆菌落,并煮沸破菌,PCR扩增出未知基因片段。结果:差减得到差异基因片段多位于200~500bp,成功构建了2个分别代表在KS肿瘤组织中表达上调和下调的基因文库。结论:经双向抑制性差减杂交获得了KS差异表达基因文库。抑制性差减杂交是一种快速、方便、有效的建立差异基因文库的方法。

关键词： Kaposi肉瘤; 抑制性差减杂交; 差异基因; 基因克隆

收稿日期: 2005-03-24 出版日期: 2005-08-25

基金资助:

国家自然科学基金资助项目(30160082)

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李冬妹, 杨磊, 仙玲玲, 谭晓华, 李锋, 应康, 普雄民, 王小波, 何玲. 用抑制性差减杂交构建新疆Kaposi肉瘤差异表达基因文库[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(8): 65-69.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I8/65

[1]	柳双双,吴锁伟,饶力群,万向元. 玉米核雄性不育的分子机制研究与应用分析[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(1): 100-107.
[2]	张艳芳, 孙瑞芬, 郭树春, 侯建华. 向日葵V-ATPase a3亚基基因的克隆及表达分析[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(5): 19-27.
[3]	项丽, 王申, 田海山, 钟美娟, 周汝滨, 曹定国, 梁朋, 张国平, 何滔, 庞实锋. 小鼠c-Myc基因的克隆表达及其纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(2): 20-25.
[4]	饶菁菁, 景一娴, 邹明月, 胡小蕾, 廖飞, 杨晓兰. 季也蒙毕赤酵母菌尿酸酶基因的克隆、重组表达及表征[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(11): 74-82.
[5]	何石宝, 杨成飞, 尚杉, 王凌燕, 唐文超, 朱勇. *家蚕保幼激素结合蛋白Bmtol基因的克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(10): 16-25.
[6]	张敏, 田银帅, 胡晓乐, 徐莺, 陈放. *麻疯树G蛋白γ亚基JcAGG3基因的克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 46-52.
[7]	万永青, 杨洋, 张春林, 万东莉, 杨爱琴, 杨杞, 王瑞刚, 李国婧. *中间锦鸡儿DHN1基因克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(4): 88-96.
[8]	陈晓峰, 胡盼, 李岩松, 郭兴, 邹德颖, 刘楠楠, 卢士英, 周玉, 柳增善, 李兆辉, 任洪林. 小鼠Peroxiredoxin 6基因克隆、原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(3): 11-16.
[9]	李达, 代鹏, 王伟, 张文涛, 汪钦, 束毅, 祝春来, 纪奇峰, 梁平, 颜真. PLCE1基因及rs2274223和rs3765524单体型的克隆与表达[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(12): 1-7.
[10]	高飞, 周婧, 刘晓彤, 李成磊, 姚慧鹏, 赵海霞, 吴琦. *苦荞锌指蛋白基因FtLOL1的克隆及其对非生物胁迫的应答*[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(8): 44-50.
[11]	樊飞飞, 李杰勤, 詹秋文, 王丽华, 刘言龙. 植物肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(12): 96-102.
[12]	王世奇, 刘婧莹, 刘晨浪, 李纯, 胡晓凤, 夏立秋, 张友明. sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(12): 1-7.
[13]	杨杞, 尹佳佳, 王颖, 王瑞刚, 李国婧. *柠条锦鸡儿CkLEA1基因克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(5): 93-99.
[14]	朱蓓霖, 周杰, 汪正华, 赵云, 黄静, 吴自荣. 地衣芽孢杆菌谷氨酰内切酶的克隆表达与性质研究[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(3): 105-110.
[15]	冯远航, 王罡, 季静, 关春峰, 金超. *枸杞LmP5CS基因的克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(1): 33-40.

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