γ-谷氨酰基转肽酶（GGT）基因工程菌的构建及其发酵条件的初步研究

中国生物工程杂志

研究报告

γ-谷氨酰基转肽酶（GGT）基因工程菌的构建及其发酵条件的初步研究

王娜张洁沈微唐雪明诸葛健

无锡江南大学生物工程学院工业微生物研究中心无锡江南大学生物工程学院工业微生物研究中心信阳师范学院生命科学学院

Construction Fermentation of Engineered Strain and Properties of Recombinantγ-glutamyltranspeptidase

全文: PDF HTML

摘要： 利用PCR技术以Bacillus subtilis SYU 20016基因组DNA为模板，扩增出1.8kb编码γ-谷氨酰基转肽酶的基因ggt，将其连接到温控表达载体pBV220，得到重组载体pBV220-ggt，重组载体在大肠杆菌JM109中得到表达。SDS-PAGE分析显示融合表达产物的分子量大小为65kD，同核酸序列测定所推导的值相符。对含有ggt的基因工程菌进行表达研究表明：发酵的培养温度为30℃，pH为7.2，装液量为20mL(在250mL的锥形瓶中)的条件下42℃诱导4h后，重组菌的γ-谷氨酰基转肽酶酶活力达到6U/mL，目前报道的非基因工程菌（枯草芽孢杆菌NX-2）酶活力最高仅为3.2U/mL。

关键词： 生物转化; 发酵条件; 质粒稳定性; γ-谷氨酰基转肽酶; 茶氨酸

Abstract: The γ-glutamyltranspeptidase encoding gene(ggt) from Bacillus subtilis SYU 20016 was amplified by PCR.The ggt gene was inserted in pBV220 to yield the recombinant expression vector pBV220-ggt.Over-expression of ggt in E.coli JM109 was achieved with pBV220-ggt. SDS-PAGE analysis showed an over-expressed recombinant product at about 65kD,consistent with the molecular weight predicted from gene sequence.The characteristics of γ-glutamyltranspeptidase were also discussed. The optimum temperature and pH for the enzyme were determined as 30℃ and 7.2 respectively.The cultures were incubated at 42℃ for 4h with broth volume 20mL/250mL flask and the yield of 6U/mL was obtained, enzyme activity of B. subtilis NX-2 was only 3.2 U/mL.

Key words: biotransformation fermentation condition plasmid stability γ-glutamyltranspeptidase theanine

收稿日期: 2006-06-21 出版日期: 2006-11-25

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王娜,张洁,沈微,唐雪明,诸葛健. γ-谷氨酰基转肽酶（GGT）基因工程菌的构建及其发酵条件的初步研究[J]. 中国生物工程杂志, .

. Construction Fermentation of Engineered Strain and Properties of Recombinantγ-glutamyltranspeptidase. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I11/48

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