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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志  2008, Vol. 28 Issue (3): 84-88    
论文     
重组Osx腺病毒载体的构建及其调控成骨细胞增殖与分化的作用
杨松海 林天歆 刘珊英 范新兰 苏芳 潘秋辉
广东韶关铁路医院 中山大学附属第二医院医学研究中心 中山大学附属第二医院医学研究中心 中山大学附属第二医院医学研究中心 中山大学附属第二医院医学研究中心 中山大学附属第二医院
Construction of Osx-expressing Adenovirus Vector and the Role of Osx in Regulating Osteoblast Differentiation and Proliferation
 全文: PDF(1305 KB)   HTML
摘要:

构建表达成骨相关转录因子Osx的腺病毒,观察Osx对原代培养的小鼠成骨细胞增殖与分化的调控作用。将Osx编码基因克隆入腺病毒载体pAdEasy中,经293A包装后得到重组腺病毒,感染原代培养的小鼠颅骨细胞,茜素红染色观察矿化程度,实时定量RT-PCR检测成骨相关标志基因的转录水平,流式细胞检测细胞周期的改变。结果发现,①得到的病毒滴度为2×109PFU/ml,最佳感染复数为50;②表达Osx并不能够促进成骨细胞的矿化;③定量RT-PCR表明表达Osx 1d、3d、6d后成骨分化标志骨钙素、骨涎蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达量明显上调(p<0.01);④流式细胞仪的结果表明Osx能够促进成骨细胞的增殖(p<0.01)。通过腺病毒在原代培养的成骨细胞中表达Osx能够促进成骨细胞的增殖,并对其分化具有一定的调控作用,为Osx在各种骨损伤的基因治疗应用方面提供了基础。

关键词: Osx成骨细胞分化增殖腺病毒    
Abstract:

In order to investigate the effects of Osx on Osteoblast proliferation and differentiation, recombinant Osx-expressing adenovirus were constructed. Osx-coding sequence was cloned into adenovirus vector, which was transfected to 293A for packaging, primarily cultured mouse osteoblasts were infected with the virus, alizarin red staining was used for mineralization analysis, realtime quantitative RT-PCR was used for differentiation assay, cell cycle was checked using FACS. Results show that ① Virus titer was about 2×109/ml,most optimal multiplicity of infection was 50, ② Overexpression of Osx did not promote osteoblast mineralization, ③ 1d,3d and 6d after overexpression of Osx upregulated the transcription level of Osteocalcin, BSP and collagen Ⅰsignificantly(p<0.01), ④ Osx promoted osteoblast proliferation(p<0.01). Overexpression of Osx in osteoblast promotes proliferation of osteoblast, and regulates osteoblast differentiation to a certain degree.

Key words: Construction of Osx-expressing Adenovirus Vector and Osx    obsteoblast    differentiation    proliferation    adenovirus
收稿日期: 2007-10-24 出版日期: 2008-03-28
通讯作者: 潘秋辉   
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林天歆
范新兰
潘秋辉
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杨松海

引用本文:

杨松海,林天歆,刘珊英,范新兰,苏芳,潘秋辉. 重组Osx腺病毒载体的构建及其调控成骨细胞增殖与分化的作用[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(3): 84-88.

. Construction of Osx-expressing Adenovirus Vector and the Role of Osx in Regulating Osteoblast Differentiation and Proliferation. China Biotechnology, 2008, 28(3): 84-88.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/        https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2008/V28/I3/84

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