硫色曲霉木聚糖酶基因xynB的克隆、表达及酶学性质分析

中国生物工程杂志

2006, Vol. 26

Issue (0): 95-100

专稿

硫色曲霉木聚糖酶基因xynB的克隆、表达及酶学性质分析

曹云鹤贺平丽陈小玲邓萍陈香陆文清

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Cloning, Expression and enzyme characterization analysis of Aspergillus sulphureus xylanase gene xynB

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摘要：

根据GenBank中发表的木聚糖酶的氨基酸序列保守性和黑曲霉木聚糖酶基因序列设计引物，用RT-PCR的方法扩增并克隆硫色曲霉(Aspergillus sulphureus)的木聚糖酶基因xynB。序列分析表明，该基因全长678 nt，编码一24 kDa的蛋白，与已知黑曲霉xynB 基因的同源性均高于95%。将xynB基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中，转化大肠杆菌BL21，经过IPTG的诱导，获得了该基因的特异性表达。酶学性质分析表明，该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH值为4.4。在pH2.4的酸性条件下经过6 h酶活性仅下降13%。30~50℃保温30 min对酶的活性影响不大，但随着温度的升高，酶活逐渐降低，到80℃时还剩下47%的酶活，到90℃基本无催化能力。在反应体系中分别添加不同浓度Cu2+、Zn2+和Ca2+离子均可使酶活性下降，但幅度不大。

关键词： 硫色曲霉; 木聚糖酶; 原核表达; 酶学性质分析

Abstract:

Xylanase gene xynB of Aspergillus sulphureus was amplified by RT-PCR. Sequence analysis showed that xynB composed of 678 nucleotides (nt), which encoded a 24 kDa protein, shared more than 95% similarity to the xynB sequences of A.niger opened in GenBank. xynB was overexpressed in Escherichia coli BL21 induced by IPTG after it was ligated into vector pET28a(+). The recombinant enzyme was optimally active at 40℃ and pH4.4. The xylanase activity just decreased 13% after 6 h in pH2.4 buffer. It has no obvious influence on enzyme activity after incubation at 30~50℃ for 30 min. XynB enzyme retained higher residual activity when different concentrations of Cu2+, Zn2+ and Ca2+ was added to the catalytic system respectively.

Key words: characterization analysis prokaryotic expression Aspergillus sulphureus xylanase

收稿日期: 2006-01-09 出版日期: 2006-06-15

通讯作者: 曹云鹤

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引用本文:

曹云鹤,贺平丽,陈小玲,邓萍,陈香,陆文清. 硫色曲霉木聚糖酶基因xynB的克隆、表达及酶学性质分析[J]. 中国生物工程杂志, 2006, 26(0): 95-100.

. Cloning, Expression and enzyme characterization analysis of Aspergillus sulphureus xylanase gene xynB. China Biotechnology, 2006, 26(0): 95-100.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I0/95

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