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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2010, Vol. 30 Issue (08): 27-30    DOI: Q786
研究报告     
烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白在大肠杆菌中的表达
卢秀萍1,陈学军1,刘勇1,唐启慧2,陈禹保3,李文正1**
1.云南省烟草科学研究所 玉溪 653100
2.北京标凯科技有限公司 北京 100094所
3.北京中亚国瑞生物经济研究所 北京 102206
Expression of the Glycine-ich RNA-binding Protein of Tobacco in E.coli
LU Xiu-ping1,CHEN Xue-jun1,LIU Yong1,TANG Qi-hui2,CHEN Yu-bao3,LI Wen-zheng1
1.The Research Institute of Tobacco Science of Yunnan Province,Yuxi 653100,China
2.Beijing Biokit Science and Technology Limited Company，Beijing 100094,China
3.SinoGreen Institute for BioEconomy，Beijing 102206,China
 全文: PDF(426 KB)   HTML
摘要：

摘要: 目的 克隆烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白基因（Glycine-rich RNA-binding protein, GR-RBPs）并进行原核表达,为制备抗体和研究烟草抗逆性分子机理打下基础。方法 从总RNA中反转录扩增并克隆烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白NtRGP-1a和NtRGP-3全长cDNA，将cDNA序列克隆到表达载体pGEX4T-1上，构建了重组表达质粒pGEX4T-1/NtRGP-1a、pGEX4T-1/ NtRGP-3，转化大肠杆菌rosetta，IPTG诱导表达，GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果 重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致，蛋白纯度占总蛋白的95％以上。结论 本研究成功克隆和表达了烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白NtRGP-1a和NtRGP-3基因序列,为制备抗体和研究烟草抗逆性分子机理等进一步的研究奠定了基础。
关键词： 烟草;  富含甘氨酸RNA结合蛋白;  克隆表达    
Abstract:

Objective To clone, express the Glycine-rich RNA-binding protein of tobacco. Methods Amplified the full length NtRGP-1a and NtRGP-3 gene of tobacco, then ligated the gene into pGEX4T-1.Expression vectors pGEX4T-1/NtRGP-1a, pGEX4T-1/ NtRGP-3 were constructed and transformed into E．coli rosetta for expression induced by IPTG. Recombinant proteins were purified through GSTrap 4B affinity chromatography. Results The recombinant gene can be overexpressed in E.coli. SDS-PAGE showed that the molecular weight of the expressed product were the same as expected. The purity of the protein is greater than 95%. Conclusion the NtRGP-1a and NtRGP-3 protein of tobacco has been successful cloned and expressed, which could be useful for developing monoclonal antibody and the research of stress resistance.
Key words: Tobacco    Glycine-rich RNA-binding protein    Clone and express
收稿日期: 2010-04-13 出版日期: 2010-08-25
基金资助:

国家自然科学基金（30560062）、云南省烟草专卖局科技开发计划（06A02）资助项目
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卢秀萍
陈学军
刘勇
唐启慧
陈禹保
李文正

引用本文:

卢秀萍 陈学军 刘勇 唐启慧 陈禹保 李文正. 烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白在大肠杆菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(08): 27-30.

LEI Xiu-Ping, CHEN Hua-Jun, LIU Yong, TANG Qi-Hui, CHEN Yu-Bao, LI Wen-Zheng. Expression of the Glycine-ich RNA-binding Protein of Tobacco in E.coli. China Biotechnology, 2010, 30(08): 27-30.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Q786    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I08/27

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