目的：通过将人脂肪来源间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells，hAD-MSCs）移植到受损小鼠，探讨hAD-MSCs替代缺失/受损毛细胞的可行性。方法：将hAD-MSCs经尾静脉移植入药物致聋后的小鼠体内，用免疫染色及RT-PCR等方法检测移植后hAD-MSCs在耳蜗内的归巢和分化。结果：移植的hAD-MSCs能够定向归巢到受损耳蜗内，并至少存活2周，未观察到对移植细胞的免疫排斥反应。有少量细胞定位于耳蜗感觉上皮并表达毛细胞特异性抗体myosin 7a。结论：hAD-MSCs移植入药物性致聋小鼠后，能够定向归巢到耳蜗内，并分化为内耳毛细胞样细胞，是一种针对内耳损伤及退变性疾病治疗的潜在细胞来源。
采用原子力显微镜与倒置显微镜在细胞层次上观察了人外周单个核细胞 (PBMCs)与同种异源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)共培养的过程，并在单细胞水平上分析了共培养前后人外周单个核细胞的形貌和生物物理性质。结果发现：共培养后贴壁人外周单个核细胞的形态发生了很大的改变，并且表面分布着大小不一的颗粒状聚合物。利用 AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统，发现共培养72 h后培养上清中人外周单个核细胞、贴壁的人外周单个核细胞的粘滞力分别是单纯培养72 h的人外周单个核细胞的2倍、5倍，而细胞的硬度分别是单纯培养人外周单个核细胞的1.5倍、2倍。CCK-8检测提示，共培养过程中，干细胞的生长与外周血单个核细胞的生长出现了竞争作用。通过AFM探测人外周单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的可视化数据，有助于更好地了解间充质干细胞与外周血单个核细胞的相互作用。
为了解决在研制新型HIV检测试剂盒时遇到的p24蛋白阳性对照物保存不便、阳性对照物稳定性不高以及蛋白结构和聚集形式与天然HIV病毒的p24存在差异等问题，通过将改造的HIV-1骨架质粒pNL43 EGFP R-E-和包膜蛋白质粒pGX-C共转染293T细胞后分离细胞培养液，获得具有单轮感染活性的HIV-1假病毒。通过对此假病毒颗粒的天然衣壳蛋白p24和市售HIV检测试剂盒中的p24蛋白阳性对照物的阳性反应有效性和保存稳定性的检测，证明了HIV-1假病毒p24蛋白具有更易保存、更稳定、更接近天然病毒p24蛋白的优点，适宜作为HIV检测试剂盒阳性对照物。
在研究HIV-1整合酶（IN）抗药性突变T66I时，发现这一突变同时可以提高整合酶的溶解性。原核表达了IN1–288/T66I和野生型（WT），取菌体破碎后的上清， SDS-PAGE和his标签蛋白质染色进行分析，结果表明IN1–288/T66I可溶性约是WT的2.4倍。600 ml培养基中诱导表达IN1–288/T66I/BL21，亲和层析纯化共收获蛋白质4.72 mg。用改进的ELISA方法测定IN1–288/T66I和IN1288/F185K /C280S链转移催化活性，结果显示两种蛋白质活性基本相当。提供了有别于F185K /C280S突变的另外一种整合酶可溶性表达的途径，IN1–288/T66I重组蛋白还可以应用到整合酶抑制剂筛选中，以获取避开T66I抗药性突变的抑制剂。
从香蕉cDNA文库中克隆到了一个香蕉（Musa acuminata AAA subgroup）乙二醛酶（glyoxalase, GLO）基因(MaGLO14)。构建了带有MaGLO14的酵母表达载体PYES2-MaGLO14，转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)尿嘧啶营养缺陷型菌株INVSC1，挑取转化子进行PCR和酶切鉴定，证实获得了转基因菌株。通过比较转基因菌株和非转基因菌株在NaCl、高温、低温、干旱、UV胁迫下的生长状况，证明转基因菌株在以上非生物胁迫条件下的存活菌落数均高于非转基因菌株。利用酿酒酵母初步证明MaGLO14具有增强酵母菌对非生物胁迫抵抗力的功能。
摘要: 目的 克隆烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白基因（Glycine-rich RNA-binding protein, GR-RBPs）并进行原核表达,为制备抗体和研究烟草抗逆性分子机理打下基础。方法 从总RNA中反转录扩增并克隆烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白NtRGP-1a和NtRGP-3全长cDNA，将cDNA序列克隆到表达载体pGEX4T-1上，构建了重组表达质粒pGEX4T-1/NtRGP-1a、pGEX4T-1/ NtRGP-3，转化大肠杆菌rosetta，IPTG诱导表达，GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果 重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致，蛋白纯度占总蛋白的95％以上。结论 本研究成功克隆和表达了烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白NtRGP-1a和NtRGP-3基因序列,为制备抗体和研究烟草抗逆性分子机理等进一步的研究奠定了基础。
红豆杉悬浮培养细胞可以持续提供抗癌药物紫杉醇及一些紫杉烷类。在中国红豆杉悬浮培养细胞中，云南紫杉烷C（Tc）是主要的紫杉烷。为了更理性地调控紫杉醇或有用紫杉烷的生产，有必要深入了解其生物合成过程。采用实时定量PCR（Real-time Quantitative PCR，即RQ-PCR）技术考察经调控后紫杉醇及紫杉烷代谢中关键酶基因—TASY，T5αH，TDAT，T10βH，TαH，T14βH表达水平的变化。在细胞培养的第7天和12天，分别以100μM 2,3-二羟丙基茉莉酸（DHPJA）诱导，同时在细胞培养第7天进行20g/L蔗糖饲喂、100g/L XAD-7HP的原位吸附。该联合调控处理使得细胞培养第30天时，Tc产量高达1517±37mg/L，是对照处理的11.1倍，是DHPJA重复诱导联合蔗糖饲喂处理的1.7倍。RQ-PCR结果显示：DHPJA的加入可使6个基因表达水平显著提高，但在12小时后快速下降，需补充DHPJA以再次提高基因表达水平。吸附剂同时引入会延缓基因表达水平的提高速度，但却能维持基因表达处于一个较高的水平，表现为在细胞培养中后期，基因表达水平将显著高于无吸附剂的调控体系。与13α-羟化相对应的TαH基因有所不同，吸附剂的存在更显著地抑制其表达，但仍有维持表达的功能。
以海洋生物质浒苔为研究对象，并以玉米秸秆（草类生物质）和锯末（木质类生物质）为对照，采用热重分析方法研究了3种生物质的热解特性，并比较了3种生物质之间的热解差异。结果表明，与玉米秸秆和锯末等典型陆生生物质相比，浒苔的热稳定性最低。此外，以不同浓度氧化铝作为催化剂，用热重分析法对其热解过程进行了研究，利用TG-DTG曲线分析了不同催化剂在不同浓度下对其基本热解特性的影响。结果表明，Al2O3 对于3种生物质转化率和最大失重速率有显著的影响，其中Al2O3对锯末和浒苔的转化率降低程度比玉米秸秆较明显。考虑到Al2O3具有可调变的表面酸碱性以及多种不同的晶相结构等优点， Al2O3具有较大的的应用价值。
单环刺螠生活在近海泥沙地区的潮间带和低潮带，自1940年分类后曾归属于螠虫动物门，但是现在越来越认为它是多毛纲环节动物的一个分支。系统研究表明，单环刺螠的体腔液和内脏中含有高活性的溶栓物质，并从这两种组织中通过离心、过滤、硫酸铵盐析、超滤、Q. Sepharose Fast Flow、 Sephadex G-75 、Sephacry S-100等步骤分离到了一种纤溶酶UFE，SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为10.38 kDa. 利用尿激酶和PBS作对照的功能研究表明，UFE主要是直接降解纤维蛋白，但也表现部分激酶活性，这跟来自环节动物蚯蚓的蚓激酶一样，靠将纤维蛋白溶酶原转化为纤维蛋白溶酶降解纤维蛋白。研究表明，UFE是一种免疫原性小、纤溶能力强的具有潜在应用价值的溶栓剂。
目的：在天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中多效性调节因子AtrA（AtrA-c）可通过激活放线紫红素途径特异性的调节因子ActII-ORF4的转录来控制放线紫红素的产生。在灰色链霉菌Streptomyces griseus NBRC13350和阿维链霉菌Streptomyces avermitilis MA-4680中也发现了AtrA-c 编码基因（atrA-c）的同源基因，分别影响链霉素和阿维菌素的生物合成。本文目的在于探索球孢链霉菌C-1027（Streptomyces globisporus C-1027）中是否存在AtrA，克隆球孢链霉菌C-1027中atrA基因并进行生物信息学分析，为进一步确定其对力达霉素产生的调控作用及调控机制奠定基础。[方法] 采用在球孢链霉菌C-1027中异源表达AtrA-c，来确定AtrA-c对力达霉素产量的影响；通过Southern blot 分析来判断在球孢链霉菌C-1027 基因组中是否有atrA-c同源基因；PCR扩增方法获得球孢链霉菌C-1027 atrA基因（atrA-gl）并测序；通过多种生物信息学软件来分析atrA-gl及其与旁侧基因的组织结构、对已发现的AtrA蛋白进行同源性比对及亲缘关系分析。[结果]在球孢链霉菌C-1027中异源表达天蓝色链霉菌AtrA-c蛋白，发现其对力达霉素的产量有影响。以atrA-c为探针，通过Southern blot分析显示球孢链霉菌C-1027基因组中存在atrA-c的同源基因。PCR扩增得到球孢链霉菌C-1027 的atrA基因的全序列以及该基因上下游的旁侧序列（GenBank/EMBL/DDBJ 登录号GU723707）。通过对球孢链霉菌C-1027、天蓝色链霉菌A3(2)、灰色链霉菌NBRC13350以及阿维链霉菌MA-4680 AtrA蛋白序列进行同源性分析发现，四种AtrA蛋白编码氨基酸序列一致性达到65%至 87%，相似性高达70% 至89%。并且，球孢链霉菌C-1027 atrA基因与相邻基因形成的组织结构与天蓝色链霉菌和灰色链霉菌完全一致。根据蛋白质同源性绘制进化树，发现球孢链霉菌AtrA蛋白与灰色链霉菌AtrA蛋白亲缘关系最近。[结论]确定在球孢链霉菌C-1027中存在atrA同源基因并影响力达霉素的产量，克隆了首个力达霉素生物合成基因簇外的调节基因——atrA基因，通过生物信息学分析初步推测了该基因的功能，为进一步研究AtrA-gl对力达霉素途径特异性级联调控网络的调控关系奠定了基础。
根据Genbank中乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的Cu/Zn-SOD基因序列设计引物，通过PCR扩增得到Cu/Zn-SOD基因。在PGK1启动子驱动下，将该基因与荧光报告基因GFP融合，分别构建重组质粒YEplac195-PSGA和YCplac33-PSGA，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W303α菌株。通过菌落PCR和荧光显微观察证实乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的Cu/Zn-SOD基因在W303α中成功表达。将获得的阳性转化子在添加20 mM百草枯的发酵培养基中进行发酵，SOD的比活力和总活力分别是不添加百草枯培养基中发酵菌体的6.7倍和4.7倍。通过热激胁迫处理进一步探讨Cu/Zn-SOD对宿主sod1Δ酿酒酵母菌株EG118耐受力的影响，结果显示抗热击能力的顺序为EG118(YEplac195-PSGA)＞EG118 (YCplac33-PSGA)＞EG118。以上结果为发酵工业中防止菌体老化和增强菌体的发酵能力提供一定的理论指导，也为后续的Cu/Zn-SOD体外分子定向进化改造奠定必要的基础。
截短侧耳素是由担子菌产生的一种三环二萜类化合物，通过抑制肽基转移酶的活性而使细菌蛋白质合成受阻。论文以截短侧耳素产生菌Clitopilus prunulus-04为出发菌株，经亚硝基胍诱变后分别进行制霉菌素、特比萘酚、十二烷基苯磺酸钠和十二烷基三甲基氯化铵抗性突变子筛选，获得了大量的产量提高的突变子。制霉菌素和特比萘酚抗性突变子的正突变率较高，其中，一株制霉菌素抗性突变子pn163的截短侧耳素产量比出发菌株提高了38.50%，且遗传稳定性较好。制霉菌素和特比萘酚抗性突变子在高产截短侧耳素的同时，也降低了麦角甾醇生物合成量，推测产量提高与细胞膜通透性有关。
目的：在耻垢分枝杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白并对表达产物进行鉴定。方法：用PCR的方法扩增结核杆菌dnaA基因并克隆至表达载体pMF406中，构建重组大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMF-dnaA。经双酶切及测序鉴定后，用电转化的方法将重组质粒转至耻垢分枝杆菌mc2155中。用0.02%乙酰胺诱导重组耻垢分枝杆菌，对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测和鉴定。结果：重组耻垢分枝杆菌构建成功，SDS-PAGE及Western blotting结果显示该重组耻垢杆菌可以实现结核杆菌DnaA蛋白的同源高效表达。结论：结核杆菌DnaA蛋白的同源表达为结核杆菌DNA复制机制的研究奠定了基础。
从河南南阳不同农田的植物根部采取土壤样本，共分离获得了198株细菌。通过毒性测试和平板生测从中筛选出松材线虫生防细菌6株，其中 NS-3菌株对松材线虫的杀灭活性最高。结合该菌株的形态学、生理学特征及16S rDNA序列分析等结果将该菌株归为芽孢杆菌属，命名为Bacillus sp. strain NS-3。将该细菌液体培养的上清液和上清蛋白粗提物分别处理松材线虫48 h后线虫的死亡率分别达到50 %和100 %; 线虫死亡后虫体消解。然而，细菌的上清蛋白粗提物经煮沸变性后，基本丧失了对松材线虫的侵染活性，结果显示细菌Bacillus sp. strain NS3的杀线虫活性物质主要要存在于细菌培养上清液中，并且为热不稳定性物质。
从土壤样品中筛选得到一株高产几丁质酶菌株C65-2， 经形态学观察和18S rDNA序列测定，鉴定为Aspergillus fumigatus，对产酶培养基进行初步优化，测得最高酶活可达6.9 U/ml，酶活力较优化之前提高了210%。酶学性质研究表明该几丁质酶分子量约为20kDa，酶在60 ℃下保温50 min酶活降为0，最适酶反应温度是55 ℃，酶反应最适pH为7.0, Mg2+，Cu2+对酶反应有促进作用，Fe3+对酶反应有抑制作用。
目的：建立用层析法去除脑脊髓膜炎球菌A群荚膜多糖样品中的杂蛋白的方法，以替代传统的苯酚抽提。方法：A群流脑多糖粗糖经过新型多模式离子交换填料Capto adhere，使用低盐上样高盐洗脱，洗脱的目的峰再经过Sephardex G-25凝胶过滤脱盐换成水，即为流脑多糖精糖原液。结果：采用上述方法制备的精制多糖样品中杂蛋白占固总的比例低于0.2%，符合WHO现行规程中的杂蛋白比例低于1% 的要求，核酸、内毒素等生化指标均符合现行规程，整个层析过程的回收率大于65％。结论：层析法去除A群流脑多糖粗糖中的杂蛋白是有效的，比传统的苯酚抽提的方法更有利于环保，易于操作，易于放大。
1,5-戊二胺是一种重要的化工原料，发酵法生产1,5-戊二胺是一条新颖且具有潜在竞争力的生产途径。以蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)AS1.1009基因组为模板，通过PCR扩增，得到大小约为2.2 kb的赖氨酸脱羧酶基因ldc。以大肠杆菌(Escherichia coli) /谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)穿梭质粒pXMJl9为载体，将扩增得到的目的基因片段克隆至谷氨酸棒杆菌C. glutamicum TK260512，获得重组菌株C. glutamicum TK260512/pXMJl9-ldc．在摇瓶发酵水平上，通过IPTG诱导ldc基因的表达，并采用反相高效液相色谱方法测定了发酵液中1,5-戊二胺的含量，结果显示，经36 h发酵，工程菌C. glutamicum TK260512/pXMJ19-ldc的1,5-戊二胺产量为0.96 g/L。
对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CICC 20034利用合成培养基液体发酵产脂肪酶的条件进行了优化。首先采用单因子实验筛选出最适诱导剂为三丁酸甘油酯，氮源为尿素，碳源为葡萄糖，无机盐为MgSO4。在此基础上，利用Plackett-Burman设计对影响产酶因素的效应进行评价，筛选出具有显著效应的三丁酸甘油酯、尿素、KH2PO4和培养基起始pH值四个最显著的因素。用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域后，利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化，获得最适合成培养基组分为：葡萄糖8 g/l，尿素8.57 g/l，三丁酸甘油酯 2.62 %，KH2PO4 2.59 g/l，MgSO4·7H2O 0.5 g/l，Tritonx-100 0.5 g/l，pH9.47。优化后的B. subtilis CICC 20034胞外脂肪酶活力达0.483 U /ml，比初始酶活力0.072 U /ml提高了6.7倍。
利用响应面法对小球藻（Chlorella vulgaris）在2 L气升式生物反应器中对自养产生物柴油油脂的培养条件进行了优化。首先用Plackett-Burman方法对10 个相关影响因素的效应进行评价并筛选出对产油有显著影响的3 个因素：KNO3浓度、温度和CO2浓度；再用最陡爬坡实验逼近最大产油区域；最后由中心组合实验及响应面分析确定了影响产油主要因素的最佳条件为：KNO3浓度0.31g/L,温度26.5 ℃，CO2浓度6.80%，最高产油量达到0.42 g/L，比优化前提高了近2 倍。优化后,在10 L气升式生物反应器中进行了扩大培养。
采用响应面分析法对Bacillus sp.HB20菌株合成（R）-扁桃酸的培养基成分进行优化。首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响（R）-扁桃酸产率的三个主要因素：麦芽糖、蛋白胨和牛肉膏。在此基础上用最陡爬坡路径逼近最大响应区域, 再利用Box-Behnken 试验设计及响应面分析法进行回归分析。结果表明,麦芽糖、蛋白胨和牛肉膏浓度与（R）-扁桃酸产率存在显著的相关性, 通过求解回归方程得到最佳质量浓度:蛋白胨11.507 g/L，牛肉膏6.708 g/L，麦芽糖10.907g/L，（R）-扁桃酸产率理论最大值达到66.87%。经模型验证, 预测值与验证试验平均值接近, 在优化条件下（R）-扁桃酸产率提高了25.87%。
RNA干扰技术(RNA interference，RNAi)是实现基因沉默的有效工具。近年来，随着分子生物学与生物技术的快速发展，在RNAi基础上又发展出另一种特异性更高的基因沉默技术—amiRNAi (artificial microRNA interference)。amiRNAs是一类由内源miRNA前体生成的长21个核苷酸的人工小RNA分子，它能在不影响其他基因表达的情况下特异地介导单个或多个靶基因高效稳定沉默。与普通的RNAi相比，amiRNAi具有特异性高、稳定性强和沉默效应可预见等优点。因而amiRNAi可能成为基因功能分析的最有效工具之一，同时amiRNAi对于基因负调控研究和应用而言前景广阔。着重介绍了amiRNAi技术的原理、优势及其潜在的应用价值。
角质层，包括角质和蜡质，是主要由脂肪酸及其衍生物构成的覆盖在植物的外表面的高度疏水层，在植物生长发育过程中起到非常重要的保护屏障作用。除了在极端温度、干旱、高盐等多种非生物逆境胁迫下起到保护作用外，还能够保护植物内部组织免受细菌、真菌病原体的侵染。现就植物角质层的组成、合成途径以及与植物抗逆性，特别是与抗旱能力的关系方面的最新研究进展进行了综述。
日本在生物技术领域居世界前列，生物产业是日本的重点产业，政府通过优化发展战略、完善相关机构、加大资金投入、促进官产学结合等方式加速发展生物技术与产业。综述了日本生物产业发展现状，结合日本的国情和优势，对其未来生物产业的发展方向和重点进行了分析，以期对我国生物技术产业的发展起到借鉴作用。
自上世纪80年代以来，韩国生物产业迅猛发展。从政策、经费投入、机构及产业情况等对韩国生物产业情况进行综述，并展望了发展趋势，以期对我国生物产业发展起到借鉴作用。
