人PPARαLBD在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

中国生物工程杂志

研究报告

人PPARαLBD在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

李苌清袁野杨贵忠章涛周歧新

重庆医科大学重庆医科大学信阳师范学院生命科学学院重庆医科大学

Expression,purification and identification of the LBD domain of human PPARα in E. coli

全文: PDF HTML

摘要： 过氧化物酶体增殖物活化受体α(peroxisome prolifterator-activated receptor α，PPARα)属于Ⅱ型核受体，通过其配体结合区（1igand binding domain,LBD）结合特定的激动剂对参与机体代谢的关键酶、受体等的表达起调节作用。本研究从人肝组织提取总RNA，RT-PCR扩增出PPARαLBD的cDNA，将其克隆入表达载体pMAL-p2X麦芽糖结合蛋白（Maltose Binding Protein,MBP）编码基因malE序列的下游，重组质粒转化E coli TB1，进行了高效的可溶性融合蛋白表达。产物经多糖亲和树脂（Amylose-resin）纯化后，获得了电泳纯的MBP-PPARαLBD。MBP-PPARαLBD用Xa因子酶切，经Amylose-resin亲和层析、DE-52阴离子交换层析纯化回收，获得了电泳纯的PPARαLBD。本研究为进一步比较MBP-PPARαLBD和PPARαLBD的功能，筛选PPARα配体奠定了基础。

关键词： 融合蛋白表达; 纯化; PPARαLBD; MBP

Abstract: Peroxisome proliferator-activated receptorα(PPARα) is a ligand-activated transcription factor which plays a pivotal role in regulations of metabolism.A cDNA encoding ligand binding domain(LBD）of PPARα was amplified by RT-PCR from human hepatic tissue and the product was inserted into the downstream of the malE gene in the vector pMAL-p2X,which encodes maltose-binding protein (MBP).The recombinant plasmid containing MBP-PPAR gene was transformed into E.coli.TB1.Transformed TB1 was cultured at 37℃ and 200 r/min，and then induced with 0.4 mmol／L IPTG for 6 hours at 30℃ and same r/min. The cells were harvested by centrifugation and broken by sonication.SDS-PAGE analysis showed that the expressed MBP-PPAR fusion protein was soluble and accounted for 31.34％ of the total protein in the supernatant.The MBP-PPARαLBD fusion protein were purified through amylose-resin affinity chromatography and digested by the protease Factor Xa,then separated by Amylose-resin affinity chromatography and DE-52 anion exchange chromatography.The products,MBP-PPARαLBD and PPARαLBD,with high purity were obtained,which provided the necessary material for screening and researching its ligands.

Key words: MBP fusion protein expression Purification PPARαLBD

收稿日期: 2006-10-16 出版日期: 2006-12-25

通讯作者: 周歧新

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李苌清,袁野,杨贵忠,章涛,周歧新. 人PPARαLBD在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定[J]. 中国生物工程杂志, .

. Expression,purification and identification of the LBD domain of human PPARα in E. coli. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I12/18

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