H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达

中国生物工程杂志

研究报告

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达

刘春国刘明张云杨涛

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

The NS1 gene of H5N1 Avian Influenza Virus(AIV) Expressed in Insect Cells

全文: PDF HTML

摘要： 将H5N1亚型禽流感病毒（AIV）NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中，获得重组转移载体pFastBac1- NS1。将pFastBac1- NS1转化到DH10Bac感受态细胞中，筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1。rBV-NS1感染Sf9细胞后，通过SDS-PAGE、Western blot和ELISA分析表明：获得了分子量为26ku的特异性NS1蛋白；并且该蛋白可与H5N1 AIV攻毒鸭的血清发生特异性免疫反应，而不能与H5N1AIV灭活疫苗免疫鸭的血清发生反应。试验结果表明：NS1在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达，具有与天然蛋白相似的免疫活性，并可以作为区分免疫及自然感染个体的鉴别诊断抗原。本实验为建立禽流感病毒自然感染家禽与禽流感灭活苗免疫家禽的鉴别诊断方法奠定基础。

关键词： NS1; 杆状病毒表达; 鉴别抗原; AIV; H5N1

Abstract: The NS1 gene of H5N1 subtype of highly pathogenic influenza virus was subcloned into transfer plasmid pFastBac1, then the recombinant transfer plasmid pFastBac1- NS1 was transformed into DH10Bac competent cells. The recombinant transposition rBacmid- NS1 was obstained by screenining of white plaque and was identified by PCR. After the rBacmid- NS1 transfected into Sf9 cells, the recombinant baculovirus rBV- NS1 was harvested. The expressed NS1 protein was analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The specific protein band of 26ku was obtained, and it can react with the sera of infected duck but can not react with that of immunized duck. So it was suggested that the NS1 protein can take as diagnosis antigen to differentiate the infected birds from immunized ones.

Key words: NS1 gene baculovirus expression differentiating antigen avian influenza virus H5N1

收稿日期: 2006-04-03 出版日期: 2006-06-25

通讯作者: 刘明

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章
	刘明
	张云
	杨涛
	刘春国

引用本文:

刘春国,刘明,张云,杨涛. H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达[J]. 中国生物工程杂志, .

. The NS1 gene of H5N1 Avian Influenza Virus(AIV) Expressed in Insect Cells. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I06/40

[1]	郭广超,周于用,曹三杰,武耀民,伍锐,赵勤,文心田,黄小波,文翼平. 乙型脑炎病毒NS2A-C60A位点突变对其生物学特性影响研究^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(9): 1-10.
[2]	王晓艳, 陈娜子, 艾君, 赵央, 吴美玉, 黄金枝, 姜潮, 李校堃. HBVpre-c-Fc融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其生物学活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(4): 42-47.
[3]	李多, 杨丽娟, 赵玉娇, 潘玥, 陈俊英, 付娟娟, 黄新伟, 邱丽娟, 孙强明. 研究报告重组Ⅱ型登革病毒NS1的表达及其免疫原性的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(9): 4-8.
[4]	朱小静, 姜潮, 薛萍, 王晓艳, 徐丹, 南佳, 艾君, 李校堃. 重组角质细胞生长因子-1在杆状病毒表达系统中的表达及其生物活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(3): 47-53.
[5]	郭莉莉, 欧霞, 米锴, 孙茂盛, 李鸿钧. EV71类病毒颗粒的表达和免疫原性的初步评价[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(1): 8-13.
[6]	冯佩平, 张蕾, 柴秀丽, 张海玲, 赵建军, 胡博, 白雪, 高晗, 邵西群, 闫喜军, 赵权, 徐磊. 犬瘟热病毒N基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及应用[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(04): 60-66.
[7]	张梅, 付远辉, 何金生, 陆燕燕, 郑娴娴. 增强型绿色荧光蛋白的真核表达和纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(5): 99-103.
[8]	郭海红, 杨辛, 郭芳, 胡红刚. DEK蛋白的真核表达纯化及其活性检测[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(12): 1-9.
[9]	张梅付远辉何金生陆燕燕郑娴娴. 增强型绿色荧光蛋白的真核表达和纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(05): 0-0.
[10]	王青胡建和徐彦召. 表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(09): 19-23.
[11]	邹淑梅于在江张烨辛丽陈永坤唐启慧陈禹保陈清轩舒跃龙. 禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(01): 12-18.
[12]	徐剑文,林建银,林旭,齐元麟,张晓艳,朱进伟,胡建石. 蛇毒金属蛋白酶抑制剂抗小鼠黑色素瘤肺转移[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(05): 28-32.
[13]	包红梅,王秀荣,刘丽玲,王昱,李一经,陈化兰. H5亚型禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(5): 65-69.
[14]	刘高强, 章克昌, 王晓玲, 魏美才. 昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展[J]. 中国生物工程杂志, 2004, 24(7): 40-44.
[15]	陈璟, 方宏清, 周长林, 陈惠鹏. 昆虫杆状病毒系统表达外源蛋白的糖基化[J]. 中国生物工程杂志, 2004, 24(3): 1-6.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed