新的肝细胞生长因子HPPCn的表达、纯化及体外活性检测

中国生物工程杂志

2007, Vol. 27

Issue (10): 6-11

研究报告

新的肝细胞生长因子HPPCn的表达、纯化及体外活性检测

魏苹杜劭君崔春萍张达矜张霄翔吴祖泽

合肥工业大学化学工程学院军事医学科学院辐射与放射医学研究所军事医学科学院辐射与放射医学研究所军事医学科学院合肥工业大学化工学院军事医学科学院辐射与放射医学研究所

Construction, expression and Purification of a Novel Human Hepatic Growth Factor: Hepatopoietin Cn and Research on its Biological Activity in vitro

Chunping Cui Dajin ZHANG

全文: PDF(626 KB) HTML

摘要：

目的：建立rhHPPCn在大肠杆菌中的表达体系，纯化表达产物并检测其体外生物活性。方法：以pUC18-HPPCn为模板，构建原核表达载体pET-24a(+)-HPPCn，转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达目标蛋白，离子交换色谱法纯化目标蛋白，Western blot分析其免疫原性，MTT法和3H-TdR掺入法检测其体外活性。结果：成功构建出原核表达载体pET-24a(+)-HPPCn，并诱导使目标蛋白的表达量较高，表达产物中HPPCn 23％以可溶形式存在，两步离子交换后可得纯度为94.2％，Western blot鉴定为目的蛋白，MTT法和3H-TdR掺入法检测其具有明显的促肝癌细胞系增殖活性。结论：成功构建出原核表达载体并实现了目标蛋白高表达，两步离子交换法纯化出所需纯度的蛋白，并验证了其较强的体外促肝癌细胞系增殖活性。

关键词： HPPCn; 原核表达; 阴离子交换层析; 肝癌细胞系增殖

Abstract:

To construct，express and purify recombinant human HPPCn protein and detect its biological acitivity in vitro. Methods：The prokaryotic expression vector pET-24a(+)-HPPCn was constucted by template pUC18-HPPCn, and then was transformed into E.coli BL21, inducing it with 0.4mmol/L IPTG for 4 hours. The expression and solubility of recombinant protein was detected by SDS-PAGE. The interest protein was purified by anion exchange chromatography and its immunogenicity was identitied by Western blot analysis. Its biological activity in vitro was detected by MTT and 3H-TdR assays. Results：The rhHPPCn was highly expressed after IPTG inducing, and 23% of HPPCn was resoluble in thalline . The purity of HPPCn protein reached over 94％ after twice anion exchange chromatography, and the Western blot analysis showed it could bind specifically to rabbit-HPPCn-polyclonal antibody. The MTT and 3H-TdR assays showed that the recombinant protein could remarkably　promote proliferation of SMMC7721. Conclusion：rhHPPCn is successfully constructed and expressed in E.coli . The interest protein is successfully purified by twice anion exchange chromatography and is detected to promote the proliferation of SMMC7721.

Key words: HPPCn prokaryotic expression anion-exchange chromatography the proliferation of SMMC7721

收稿日期: 2007-07-19 出版日期: 2007-10-25

ZTFLH:

Q789

通讯作者: 崔春萍

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引用本文:

魏苹,杜劭君,崔春萍,张达矜,张霄翔,吴祖泽. 新的肝细胞生长因子HPPCn的表达、纯化及体外活性检测[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(10): 6-11.

Chunping Cui Dajin ZHANG . Construction, expression and Purification of a Novel Human Hepatic Growth Factor: Hepatopoietin Cn and Research on its Biological Activity in vitro. China Biotechnology, 2007, 27(10): 6-11.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I10/6

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