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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志  2014, Vol. 34 Issue (2): 1-6    DOI: 10.13523/j.cb.20140201
研究报告     
表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价
谢力1,2, 王晓囡1, 李杨1, 严敏1, 曹颖1, 李鸿钧1, 孙茂盛1
1. 中国医学科学院/北京协和医学院 医学生物学研究所 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室 昆明 650118;
2. 昆明学院医学院 昆明 650214
Construction and Immunogenicity of a Recombinant Adenovirus Expressing NSP4 of Group A Rotavirus
XIE Li1,2, WANG Xiao-nan1, LI Yang1, YAN Min1, CAO Yin1, LI Hong-jun1, SUN Mao-sheng1
1. Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences/Peking Union Medical College; Yunnan Key laboratory of Vaccine Research & Development on Severe Infections Diseases, Kunming 650118, China;
2. Medical School of Kunming University, Kunming 650214, China
 全文: PDF(1015 KB)   HTML
摘要:

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1:320 和1:1436.8;中和抗体效价1:45.3和1:71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。

关键词: 轮状病毒NSP4重组腺病毒    
Abstract:

Objective:To construct a recombinant adenovirus expressing the non-structure protein 4(NSP4) of A group rotavirus, and evaluate its immune response effects. Methods: NSP4 gene from wildtype rotavirus was cloned into a shuttle plasmid (pshuttle-CMV). The pshuttle-NSP4 is transformed into E.coli BJ5183 to make a homologous recombination with adenovirus skeleton genome(pAdeasy). And the recombinant plasmid pAd-NSP4 is transfected into Ad-293 cell to produce mature adenovirus particles. ICR mice are vaccinated with this recombinant adenovirus by intramuscular and intranasal administration. Results: The recombinant adenovirus titer rise to 108.25CCID50/ml after 3 time passaged. The transcription and expression of NSP4 can be determined by RT-PCR and immunofluorescene assay in vitro. In intramuscular and intranasal administration group, ELISA determines specific serum antibody mean titer at 1:320 and 1:1436.8 level; neutralizing antibody titer at 1:45.3 and 1:71.8. Conclusion: The recombinant adenovirus containing rotavirus NSP4 gene can induce effective immune response against rotavirus. Intranasal administration produce a better protective efficacy than intramuscular in mice. It may be a good candidate to develop a novel engineering vaccine in the future.

Key words: Rotavirus    NSP4    Recombinant adenovirus
收稿日期: 2013-12-03 出版日期: 2014-02-25
ZTFLH:  Q786  
基金资助:

国家科技重大专项资助项目(20132X10004002-003-05)

通讯作者: 李鸿钧, 孙茂盛     E-mail: lihj6912@hotmail.com;maoshs@imbcams.com.cn
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谢力
王晓囡
李杨
严敏
曹颖
李鸿钧
孙茂盛

引用本文:

谢力, 王晓囡, 李杨, 严敏, 曹颖, 李鸿钧, 孙茂盛. 表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(2): 1-6.

XIE Li, WANG Xiao-nan, LI Yang, YAN Min, CAO Yin, LI Hong-jun, SUN Mao-sheng. Construction and Immunogenicity of a Recombinant Adenovirus Expressing NSP4 of Group A Rotavirus. China Biotechnology, 2014, 34(2): 1-6.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/10.13523/j.cb.20140201        https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2014/V34/I2/1

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