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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2010, Vol. 30 Issue (06): 103-108    DOI: Q93-33
技术与方法     
产琥珀酸放线杆菌的原生质体制备与再生
毛雨2,王丹1,3,李强1,3,邢建民1**,黄占斌2
1.中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 北京 100190
2.中国矿业大学化学与环境工程学院 北京 100083
3.中国科学院研究生院 北京 100049
Protoplast Preparation and Regeneration of Actinobacillus succinogenes
MAO Yu2,WANG Dan1,3,LI Qiang1,3,XING Jian-min1,HUANG Zhan-bin2
1.National Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100190, China
2.School of Chemical and Evironmental Engineering, China University of Mining & Technology, Beijing 100083, China
3.Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China
 全文: PDF(903 KB)   HTML
摘要：

基因组重组技术是一项重要的菌种改造技术，原生质体制备和再生是进行基因组重组的前提和基础。目前少有关于产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)CGMCC 2650原生质体研究的报道。为了优化该菌的原生质体制备和再生条件，及利用基因组重组技术构建优良菌种提供参考，研究了甘氨酸预处理，菌龄，酶浓度，作用时间，温度对产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的影响，并考察了不同渗透压稳定剂对其再生的影响。结果表明，菌体在添加了0.6mg/ml甘氨酸的TSB培养基中培养5 h后收集，用SMM稀释到OD660=1.0，用0.025 mg/ml溶菌酶在37℃下酶解45 min制备原生质体，将原生质体涂布于含0.3 mol/L蔗糖的再生培养基中，再生率最大，达到40.9%。确定了产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的最佳条件，所用的原生质体制备的方法对琥珀酸的产生没有影响，这为进一步开展该菌的原生质体诱变及基因组重组等研究奠定了基础。
关键词： 产琥珀酸放线杆菌;  琥珀酸;  原生质体;  基因组重组    
Abstract:

Genome shuffling was an important technology of strain improvement. The effects of glycin concentration, cell age, lysozyme concentration, the operational time and temperature were conducted to optimize the conditions of protoplast formation and regeneration of Actinobacillus succinogenes CGMCC 2650. The effects of the different osmotic stabilizing agents on regeneration were also examed. The protoplast yield was the highest under these conditions: The bacteria was cultivated in Tryptic Soy Broth (TSB) medium containing 0.6 mg/ml glycin for 5 h, then collected and diluted with SMM until the optical density (660nm) reached 1.0. The diluent was treated by 0.025 mg/mL lysozyme at 37℃ for 45 min and plated on the TSB medium with 0.3 mol/L sucrose as osmotic stabilizer. The regeneration rate was up to 40.9%. This study provides the optimized conditions of protoplast preparation and regeneration for genome shuffling of A.succinogenes.
Key words: Actinobacillus succinogenes    Succinic acid    Protoplast    Genome shuffling
收稿日期: 2010-01-28 出版日期: 2010-06-12
基金资助:

中国科学院知识创新工程项目（KSCX2-YW-G-021）
通讯作者: 邢建民     E-mail: jmxing@home.ipe.ac.cn
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毛雨
王丹
李强
邢建民
黄占斌

引用本文:

毛雨 王丹 李强 邢建民 黄占斌. 产琥珀酸放线杆菌的原生质体制备与再生[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(06): 103-108.

MAO Yu, WANG Dan, LI Jiang, GENG Jian-Min, HUANG Tie-Bin. Protoplast Preparation and Regeneration of Actinobacillus succinogenes. China Biotechnology, 2010, 30(06): 103-108.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Q93-33    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I06/103

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