富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达

中国生物工程杂志

2010, Vol. 30

Issue (03): 56-60

研究报告

富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达

杨键^1,2,曾丽娟^1,2,廖思明^1,2,王青艳^1,2,杜丽琴¹,韦宇拓¹,黄日波^1,2**

1.广西大学生命与科学技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室南宁 530005
2.广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心南宁 530007

Cloning and Expression of Complete Gene for α-amylase From Enriched Metagenomic DNA

1.College of Life Science and Technology, Guangxi University,Nanning 530005,China
2.National Engineering Research Center for Nongrain Biorefinery, Guangxi Academy of Sciences, Nanning 530007, China

全文: PDF(948 KB) HTML

摘要：

利用反向-巢式PCR（IN-PCR）从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列，其基因登录号为GU045523，测序分析显示与来自Bacillus sp. KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连接，导入Escherichia coli JM109中，IPTG诱导表达。粗酶液经Ni-NTA、Sephacryl S-200纯化后测定酶学性质：重组酶GXAA的最适作用pH为7.0，最适作用温度为75℃，对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L。构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T，其酶学性质与原始酶没有显著差别。

关键词： 宏基因组; 反向-巢式PCR; 侧翼序列; α-淀粉酶

Abstract:

Inverse-nest PCR was applied to clone the full sequence of some α-amylase from enrichment soil metagenomic DNA. The successfully achieved gene（GU045523）showed high homology (Identity:99%)with the partial coding sequence of acid-stable amylase from Bacillus sp. KR-8104. The putative mature peptide gene was inserted into pSE380, a recombinant plasmid pSE380-gxaa was constructed and transformed into Escherichia coli JM109. The purified amylase GXAA showed an optimal activity at pH 7.0 and 75℃,the Km value is 11.6g/L taking soluble starch as substrate. Mutants E27G,A450T and E27G-A450T were constructed, the property showed no remarkable difference from the wild type.

Key words: Metagenome Inverse-nest PCR Flanking unknown sequence α-Amylase

收稿日期: 2009-12-23 出版日期: 2010-03-25

基金资助:

国家科技支撑计划课题（2007BAD75B05）、国际科技合作项目（2008DFA30710）资助项目

通讯作者: 黄日波 E-mail: rbhuang@gxas.cn

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引用本文:

杨键曾丽娟廖思明王青艳杜丽琴韦宇拓黄日波. 富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(03): 56-60.

YANG Jian, CENG Li-Juan, LIAO Sai-Meng, WANG Jing-Yan, DU Li-Qin, HUI Yu-Ta, HUANG Ri-Bei. Cloning and Expression of Complete Gene for α-amylase From Enriched Metagenomic DNA. China Biotechnology, 2010, 30(03): 56-60.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I03/56

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