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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2010, Vol. 30 Issue (06): 34-37    
研究报告     
新型集成干扰素-人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达和纯化
田硕1,姚文兵1,周敏毅2,李洁2,宋文进2,徐晨2**
1.中国药科大学生命科学与技术学院 南京 210009
2.北京三元基因工程有限公司 北京 102600
Secretory Expression and Purification of HSA-NIFN Fusion Protein in Pichia pastoris
TIAN Shuo1,YAO Wen-bin1,ZHOU Min-yi2,LI Jie2,SONG Wen-jin2,XU Chen2
1.School of Life Science & Technology，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China
2.Beijing Tri-prime Genetic Engineering Co．Ltd．，Beijing 102600，China
 全文: PDF(471 KB)   HTML
摘要：

将含编码HSA天然信号肽、HSA和新型集成干扰素（NIFN）的融合基因，插入毕赤酵母表达载体pPIC3.5，转染毕赤酵母GS115，用于分泌表达融合蛋白HSA-NIFN的酵母工程菌。诱导表达后，产物经SDS-PAGE、Western blot 和MALDI-TOF-MS 分析表明该蛋白分子量为86369Da，且能被抗HSA单抗特异性结合；表达的HSA-NIFN经超滤、Blue亲和层析和CM阳离子交换层析纯化后，HSA-NIFN的纯度大于95%。用细胞病变抑制法测定其比活性为7.75±0.39×106 IU/mg。
关键词： 新型干扰素;  人血清白蛋白;  长效    
Abstract:

Abstract HSA-NIFN gene was got by total gene synthesis technology in vitro. The NIFN-HSA gene was inserted into Pichia pastoris express vector pPIC3.5. The recombinant plasmid pPIC3.5/HSA-NIFN was linearized by restriction enzyme Sal I and then transformed into Pichia pastoris GS115 by electroporation. The recombinant strains confirmed by PCR analysis and were induced by methanol to express fusion protein HSA-NIFN. SDS-PAGE , Western blot and MALDI-TOF-MS analysis of the fusion protein showed that the expressed fusion protein HSA-NIFN with 86369Da molecular weight had the antigenicity of HSA.The putity of HSA-NIFN was higher than 90% after Blue Sepharose FF and CM Sepharose FF, and the biological activity determined by WISH-VSV system was more than 7.75±0.39×106 IU/mg.
Key words: Interferon    Human serum albumin    Long-acting
收稿日期: 2010-05-12 出版日期: 2010-06-12
基金资助:

北京市科技计划重大专项资助项目(D0205001040321)
通讯作者: 徐晨     E-mail: xuchen@triprime.com
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田硕
姚文兵
周敏毅
李洁
宋文进
徐晨

引用本文:

田硕 姚文兵 周敏毅 李洁 宋文进 徐晨. 新型集成干扰素-人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达和纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(06): 34-37.

TIAN Shuo, TAO Wen-Bing, ZHOU Min-Yi, LI Ji, SONG Wen-Jin, XU Chen. Secretory Expression and Purification of HSA-NIFN Fusion Protein in Pichia pastoris. China Biotechnology, 2010, 30(06): 34-37.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I06/34

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