阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的基因克隆及重组酶性质分析

中国生物工程杂志

2010, Vol. 30

Issue (05): 6-10

研究报告

阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的基因克隆及重组酶性质分析

夏立亮¹,侯巍²,王保学¹,刘华³,高伟¹,蒋琴¹,李鑫¹,于源华^1*

1.长春理工大学生命科学技术学院长春 130022
2.中国人民解放军第208医院长春 130021
3.长春卫尔赛生物药业有限公司长春 130616

Gene Cloning and Characters of Recombinant Methionine γ-Lyase from Trichomonas Vaginalis

XIA Li-liang¹,HOU Wei²,WANG Bao-xue¹,LIU Hua³,GAO Wei¹,JIANG Qin¹,LI Xin¹,YU Yuan-hua¹

1.College of Life Science, Changchun University of Science and Technology, Changchun 130022,China
2.NO.208 Hospital of Chinese People′s Liberation Army, Changchun 130021,China
3.Changchun Wei ErSai Bio-Pharmaceutical Co. Ltd., Changchun 130616,China

全文: PDF(528 KB) HTML

摘要：

为研究重组阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的活性，从阴道毛滴虫提取RNA，经过RT-PCR克隆蛋氨酸γ-裂解酶基因，与pET-15b质粒连接构建原核表达载体pET-15b-mgl1，并测序。转化宿主菌BL21后进行诱导表达，分离纯化目的蛋白并研究其酶学性质。以L-蛋氨酸、DL-同型半胱氨酸、L-半胱氨酸为底物测定重组酶Km值为0.318、2.14、1.62mmol/L，比活性分别为20.17、318.69、56.96μmol/min/mg protein。MGL最适pH在5.0到6.0之间，在50℃可稳定30min无活性损失。实验结果显示重组酶具有较高的活性和较好的热稳定性，为临床应用研究奠定基础。

关键词： L-蛋氨酸γ-裂解酶; 抗癌剂; 同型半胱氨酸血症; 基因克隆; 阴道毛滴虫

Abstract:

To explore the activity of recombinant Methionine γ-Lyase (MGL) , the gene of MGL was prepared by reverse PCR with RNA extracted from Trichomonas vaginalis. Expression vector pET-15b-mgl1 was constructed and sequenced. Characters of the recombinant MGL purified from transformed E. coli BL21 induced by IPTG were explored. The Km of the recombinant MGL for L-Methionine, D L-Homocysteine, L-Cystein as substrate were 0.318, 2.14, 1.62 mmol/L respectively and the specific activity were 20.17, 318.69, 56.96μmol/min/mg protein-respectively. The optimal pH for recombinant MGL was pH5.0~6.0 and the recombinant MGL was stable up to 50℃. The results indicate that recombinant MGL has bioactivity and good thermal stability suggesting potential efficacy in future clinical trials.

Key words: L-Methionine γ-lyase anticancer agent Hypohomocysteinemia gene cloning Trichomonas vaginalis

收稿日期: 2010-01-11 出版日期: 2010-05-25

通讯作者: 于源华 E-mail: yuyuanhua8888@126.com

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章
	夏立亮
	侯巍
	王保学
	刘华
	高伟
	蒋琴
	李鑫
	于源华

引用本文:

夏立亮侯巍王保学刘华高伟蒋琴李鑫于源华. 阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的基因克隆及重组酶性质分析[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(05): 6-10.

JIA Li-Liang, HOU Wei, WANG Bao-Hua, LIU Hua, GAO Wei, JIANG Qin, LI Xin, XU Yuan-Hua. Gene Cloning and Characters of Recombinant Methionine γ-Lyase from Trichomonas Vaginalis. China Biotechnology, 2010, 30(05): 6-10.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I05/6

［1］ Tanaka H, Esaki N, Soda K. Properties of Lmethionine γlyase from Pseudomonas ovalis. Biochemistry,1977,16(1):100106.
［2］ Nakayama T, Esaki N, Lee W J, et al. Purification and properties of Lmethionine γlyase from Aeromonas sp. Agric Biol Chem, 1984, 48(9):23672369.
［3］ Miki K, Xu M, An Z, et al. Survival efficacy of the combination of the methioninase gene and methioninase in a lung cancer orthotopic model. Cancer Gene Ther, 2000,7(2):332338.
［4］ Tan Y, Sr Zavala J, Han Q, et a1. Recombinant methioninase infusion reduces the biochemical endpoint of serummethionine with minimal toxicity in highstage cancer patients. Anticancer Res, 1997, 17(5B):38573860.
［5］ Miki K, AlRefaie W, Xu M, et al. Methioninase gene therapy of human cancer cells is synergistic with recombinant methioninase treatment. Cancer Res, 2000, 60(10):26962702.
［6］ Chan E C,Chang P Y, Wu J T, et al. Enzymatic Assay of Homocysteine on Microtiter Plates or a TECAN Analyzer Using Crude Lysate Containing Rocombinant Methionine γLyase. Annals of Clinical & Laboratory Science, 2005, 35(2): 155161.
［7］ McKie A E, Edlind T, Walker J, et al. The primitive protozoon Trichomonas vaginalis contains two methioninelyase genes that encode members of thefamily of pyridoxal 5 phosphatedependent enzymes. Biol Chem, 1998, 273(10):55495556.
［8］马百坤, 唐晓莹, 黄惠臣,等. 蛋氨酸裂解酶的基因克隆及序列分析. 医学研究生学报，2006,19(12):10631066. Ma B K, Tang X Y, Huang H C, et al. Journal of Medical Postgraduates, 2006,19(12):10631066.
［9］马百坤, 王红兵. 蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中的高效表达. 医学研究生学报，2008,21(4):353359. Ma B K, Wang H B. Journal of Medical Postgraduates, 2008,21(4):353359.
［10］林琳, 赵瑜, 付巍,等. 两种真核蛋氨酸裂解酶基因克隆、鉴定及分析比较. 中国民族民间医药，2009, 18(7):16. Lin L, Zhao Y, Fu Wei, et al. Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy, 2009, 18(7):16.
［11］ Carlton J C, Hirt R P, Silva J C, et al. Draft Genome Sequence of the Sexually Transmitted Pathogen Trichomonas vaginalis. Science,2007, 315(5809):207212.
［12］ Lockwood B C,Coombs G H.Purification and characterization of methionine γlyase from Trichomonas vaginalis. Biochem, 1991, 279(Pt3):675682.
［13］ Inoue H, Inagaki K, Sugimoto M, et al. Structural analysis of the Lmethionineglyase gene from Pseudomonas putida. Biochem, 1995, 117(5):11201125.
［14］ Han Q, Lenz M, Tan y, et al. High Expression, Purification and Properties of Recombinant Homocysteine α, γ lyase . Protein Expr Purif, 1998, 14(2):267274.

[1]	柳双双,吴锁伟,饶力群,万向元. 玉米核雄性不育的分子机制研究与应用分析[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(1): 100-107.
[2]	张艳芳, 孙瑞芬, 郭树春, 侯建华. 向日葵V-ATPase a3亚基基因的克隆及表达分析[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(5): 19-27.
[3]	项丽, 王申, 田海山, 钟美娟, 周汝滨, 曹定国, 梁朋, 张国平, 何滔, 庞实锋. 小鼠c-Myc基因的克隆表达及其纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(2): 20-25.
[4]	饶菁菁, 景一娴, 邹明月, 胡小蕾, 廖飞, 杨晓兰. 季也蒙毕赤酵母菌尿酸酶基因的克隆、重组表达及表征[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(11): 74-82.
[5]	何石宝, 杨成飞, 尚杉, 王凌燕, 唐文超, 朱勇. *家蚕保幼激素结合蛋白Bmtol基因的克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(10): 16-25.
[6]	张敏, 田银帅, 胡晓乐, 徐莺, 陈放. *麻疯树G蛋白γ亚基JcAGG3基因的克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 46-52.
[7]	万永青, 杨洋, 张春林, 万东莉, 杨爱琴, 杨杞, 王瑞刚, 李国婧. *中间锦鸡儿DHN1基因克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(4): 88-96.
[8]	陈晓峰, 胡盼, 李岩松, 郭兴, 邹德颖, 刘楠楠, 卢士英, 周玉, 柳增善, 李兆辉, 任洪林. 小鼠Peroxiredoxin 6基因克隆、原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(3): 11-16.
[9]	李达, 代鹏, 王伟, 张文涛, 汪钦, 束毅, 祝春来, 纪奇峰, 梁平, 颜真. PLCE1基因及rs2274223和rs3765524单体型的克隆与表达[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(12): 1-7.
[10]	高飞, 周婧, 刘晓彤, 李成磊, 姚慧鹏, 赵海霞, 吴琦. *苦荞锌指蛋白基因FtLOL1的克隆及其对非生物胁迫的应答*[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(8): 44-50.
[11]	樊飞飞, 李杰勤, 詹秋文, 王丽华, 刘言龙. 植物肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(12): 96-102.
[12]	王世奇, 刘婧莹, 刘晨浪, 李纯, 胡晓凤, 夏立秋, 张友明. sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(12): 1-7.
[13]	杨杞, 尹佳佳, 王颖, 王瑞刚, 李国婧. *柠条锦鸡儿CkLEA1基因克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(5): 93-99.
[14]	朱蓓霖, 周杰, 汪正华, 赵云, 黄静, 吴自荣. 地衣芽孢杆菌谷氨酰内切酶的克隆表达与性质研究[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(3): 105-110.
[15]	冯远航, 王罡, 季静, 关春峰, 金超. *枸杞LmP5CS基因的克隆及表达分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(1): 33-40.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed