2013年, 第33卷, 第3期　
刊出日期：2013-03-25

  

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研究报告
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  还原型谷胱甘肽对人脐带间充质干细胞成软骨诱导的影响

  罗二梅, 宇丽, 张家文, 柳菁

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 1-8.

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  目的: 探讨还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)的成软骨诱导是否有促进作用。方法:分离培养人脐带间充质干细胞并鉴定其特异性。 在生长因子(tansforming growth factor beta 1,TGF-β1)存在的条件下,用500μmol/L GSH诱导hUC-MSCs向软骨样细胞分化。倒置相差显微镜观察诱导前后细胞的形态变化;甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应分别检测Ⅱ型胶原(COL2A1)、葡萄糖胺聚糖(GAG)(蛋白水平定性);阿利新蓝法及羟脯氨酸法分别检测COL2A1、GAG含量(蛋白水平定量);qPCR在分子水平检测COL2A1、GAG mRNA表达,观察诱导前后细胞的基质分泌情况。结果: GSH连续诱导培养 21d 后,基本诱导培养基组(B组)、基本诱导培养基+0.5% 二甲基亚砜(dimethylsulfoxide, DMSO) 组(BD组)及基本诱导培养基+0.5% DMSO +500μmol/L GSH组(BDG组)细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性; BDG组GAG和COL2A1含量及mRNA表达量均要高于B组、BD组,具有显著的统计学差异(P＜0.05)。结论: GSH可促进hUC-MSCs向软骨样细胞诱导分化。
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  载阿霉素柔性脂质体的性质及体外抗肿瘤效应

  郭春芳, 张阳德, 王吉伟, 潘一峰, 廖明媚, 王宁

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 9-14.

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  目的:通过比较膜软化剂的添加对阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体载药性能及体外肿瘤细胞杀伤活性的影响,评估柔性脂质体用于静脉给药的潜在应用价值。方法:以DOX为模型药物,膜水化法制备阿霉素传统脂质体(DOX-CL)及阿霉素柔性纳米脂质体(DOX-FNL)。葡聚糖凝胶层析柱法比较两种脂质体的包封率;膜透析法检测两种载体药物释放度;粒度分析仪测定不同pH和介质下两类脂质体的水动力学粒径、电位及多分散系数(Polydispersity index,PDI);MTT法检测两类脂质体对人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞的杀伤效率;流式细胞术(FCM)检测两类脂质体作用后MCF-7的细胞周期。结果:DOX-FNL的包封率较传统脂质体高;在中性pH条件以及在纯水、生理盐水、PBS、RPMI-1640培养液及10%FBS RPMI-1640培养液中,DOX-FNL的悬浮稳定性更为优良;DOX在中性pH下的释放度稍低于DOX-CL(P<0.05);MTT法测得两类脂质体对MCF-7细胞的细胞抑制率差别不大,但DOX-FNL的细胞抑制作用更为持久(P<0.05);FCM检测结果表明,DOX-FNL主要将MCF-7细胞阻滞于G0/G1期,且效果明显强于DOX-CL(P<0.05)。结论:与传统脂质体相比,DOX-FNL具有更高的药物包封率和稳定性。DOX-FNL不但可通过对细胞周期的高效阻滞抑制肿瘤细胞的生长,其在细胞内的作用时间也明显长于DOX-CL。
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  大肠杆菌表达诺如病毒P粒子生物活性及其超微形态

  杨桂华, 陈露露, 王晓磊, 李善爽, 赵凌侠

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 15-20.

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  诺如病毒(norovirus, NVs)是非细菌性急性胃肠炎的主要病原,严重地威胁着婴幼儿、老年人和公共场所人群的健康。疫苗是目前临床预防由NVs引发急性胃肠炎的主要策略之一。按番茄偏爱密码子设计合成编码诺如病毒(VA387)衣壳蛋白——P粒子基因PGENE(1 002bp),为便于纯化,PGENE的5＇端包含编码6×his-tag的DNA序列;构建原核表达载体PET32a-PGENE并导入BL21。在16℃条件下,用终浓度1mmol/L的IPTG(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析法纯化获得P粒子,并通过Western blot加以确认;在透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)下观察到了球形P粒子成功组装;用该蛋白免疫小鼠,成功获得了活性的抗体血清。为后续用番茄研制口服诺如病毒疫苗奠定了基础。
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  E.coli RecQ解旋酶克隆表达纯化及生物学活性检测

  黄振蓉, 吴海丽, 张三军, 杜冰, 钱旻, 任华

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 21-27.

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  RecQ解旋酶是生物分子代谢过程中重要的大分子物质,对保持遗传物质的稳定性具有重要作用。通过PCR从E.coli DH5α菌株的基因组中扩增出E.coli RecQ基因并克隆入原核表达载体pET24a(+)中,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,目的蛋白主要以可溶形式存在于菌体中。优化表达条件后,经镍柱螯合亲和层析纯化获得纯度大于90%的目标蛋白质,应用生物化学和生物物理学技术研究E.coli RecQ 解旋酶的生物学活性。结果表明,E.coli RecQ解旋酶具有DNA依赖性和蛋白浓度依赖性的ATP水解活性。在等蛋白质浓度下,E.coli RecQ酶结合DNA活性强弱依次为开叉dsDNA, ssDNA,平末端dsDNA。其还具有ATP依赖的dsDNA解链活性和时间依赖的DNA退火活性。实验为RecQ解旋酶家族其他重要成员的活性功能研究提供了理论依据和重要参考。
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  重组蛋白NtA-PACAP在大肠杆菌中的表达纯化及活性测定

  王晶, 吴陆生, 陈小佳, 董濠鋆, 沈巍, 张敏仪, 洪岸

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 28-33.

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  目的:通过构建PACAP38与Agrin的N端结构域(NtA)相连的重组基因的原核表达载体,获得重组NtA-PACAP蛋白,并验证其生物学活性,为未来的规模化制备奠定基础。方法:将PACAP38与层粘连蛋白的受体蛋白Agrin的N端通过连接肽相连,合成重组蛋白的基因片段,并在此基因片段末端连上6个组氨酸标签密码子,然后将此重组基因片段克隆至大肠杆菌表达载体pET-3c中,转化E.coli BL21(DE3),获得重组工程菌并摸索发酵和纯化条件,IPTG诱导表达后收集菌体破碎离心,收集上清液,经阴离子交换层析和Ni-NTA树脂亲和层析两步纯化法获得目的蛋白;通过PC12细胞饥饿损伤后修复实验模型来检测NtA-PACAP38的生物学活性。结果: 成功表达并获得纯度90%以上的NtA-PACAP38蛋白,生物学活性实验证明NtA-PACAP38具有促饥饿损伤后的PC12细胞增殖能力。结论:获得的重组蛋白NtA-PACAP38具有生物学活性,表达系统和纯化工艺可以用于下一步的规模化制备。
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  幽门螺杆菌BabA蛋白N段的基因克隆、表达纯化及体外粘附活性评价

  高涵, 薛利军, 刘小北, 冒晓蓓, 任丽丽, 耿建, 戴婷婷, 于锋, 褚晓源

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 34-40.

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  目的:克隆幽门螺杆菌BabA蛋白的N段(氨基酸1-437位)基因( BabA1 ),构建其原核表达质粒,表达并纯化获得携带6×His标签的BabA1融合蛋白,评价融合蛋白的体外粘附活性。方法:以幽门螺杆菌J99菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得 BabA1 基因片段,并定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)。经酶切及测序分析正确后,将重组质粒pET32a- BabA1 转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行IPTG诱导表达,并对表达产物进行镍柱纯化、SDS-PAGE和Western blot鉴定。采用菌落计数法评价BabA1融合蛋白在体外的细胞粘附活性。结果:成功扩增了BabA1基因,构建了pET32a-BabA1原核表达质粒,并通过优化该表达系统的最适诱导和纯化条件,获得了具有活性的6×His-BabA1融合蛋白,后者能显著增强大肠杆菌BL21(DE3)在体外对胃癌MFC细胞的粘附。结论:成功诱导表达并纯化获得了有粘附活性的6×His-BabA1融合蛋白,为进一步研究其免疫活性和生物学功能奠定了基础。
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  干扰 GINS2 表达对HL60细胞增殖和凋亡的影响

  张曦, 刘北忠, 高艳军, 黎亮, 高远梅, 胡秀秀, 马鹏鹏, 钟梁

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 41-46.

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  目的:探讨靶向抑制 GINS2 基因表达后对人早幼粒细胞白血病细胞株HL60增殖和凋亡的影响及其机制。方法:RT-PCR分别检测 GINS2 基因在三株白血病细胞HL60、U937、THP-1的表达。设计与合成针对 GINS2 基因的干扰序列,稳定转染高表达该基因的HL60细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况;RT-PCR和Western blot分别检测各组细胞转染后mRNA和蛋白质水平; MTT法检细胞的增殖和凋亡情况;流式细胞术分析细胞的凋亡率;Western blot 检测凋亡相关蛋白的表达。结果:在三株白血病细胞株中,GINS2的表达量由低到高依次是:THP-1,U937,HL60。干扰质粒转染HL60细胞后,与阴性对照组及未处理组相比,干扰组 GINS2 的mRNA和蛋白质水平均显著降低,且细胞的增殖能力明显受抑。同时,凋亡相关蛋白Bax表达水平显著增高而Bcl2显著降低。结论:干扰 GINS2 基因表达后,其mRNA和蛋白质水平均显著降低,可通过上调Bax表达,下调Bcl2表达来抑制HL60细胞增殖并促进其凋亡。
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  重组角质细胞生长因子-1在杆状病毒表达系统中的表达及其生物活性研究

  朱小静, 姜潮, 薛萍, 王晓艳, 徐丹, 南佳, 艾君, 李校堃

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 47-53.

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  目的:利用杆状病毒载体表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)表达重组角质细胞生长因子-1(KGF-1),并对其进行鉴定纯化及活性测定。方法:PCR扩增角质细胞生长因子-1基因(KGF-1)序列,克隆到pFastBac杆状病毒转座载体,经酶切测序鉴定出阳性重组转座载体pFastBac-kgf1后,转化含有穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞,蓝白斑筛选出阳性质粒Bacmid-kgf1,转染Spodoptera frugiperda (sf9)昆虫细胞。对收获的蛋白进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。利用肝素亲和层析柱和阳离子交换柱对目的蛋白进行纯化,BaF3细胞检测细胞增殖活性,并利用C57BL/6小鼠检测促毛囊增殖活性。结果:分子量约21 kDa的KGF-1在昆虫细胞中实现了表达。病毒侵染细胞48 h时开始表达目的蛋白,到96 h时表达量达到最高;且感染复数multiplicity of infection(MOI)为4时表达量较好。经过纯化之后,蛋白纯度达到90%以上,蛋白产量达2 mg/L。纯化之后的蛋白对转染FGFR2Ⅲb的BaF3细胞在0.10 ng/ml-1.56 ng/ml之间有促增殖活性,呈剂量依赖关系。并且KGF-1处理后小鼠毛囊增殖效果有所加强。
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  PTEN/NF-κB/Caspase信号通路对K562/ADM细胞阿霉素耐药逆转机制的研究

  成志勇, 梁文同, 王素云, 颜晓燕, 李华, 王宝艳, 田赫, 魏玉涛, 芦希

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 54-60.

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  目的:探讨PTEN/Akt/NF-κB信号通路对阿霉素耐药慢性粒细胞白血病细胞系K562/ADM细胞耐药逆转的分子作用机制。方法:将携带有野生型PTEN基因及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)或空载体(Ad-GFP)腺病毒转染K562/ADM细胞,在转染3d内联合应用不同浓度阿霉素(ADM),观察PTEN基因对阿霉素的协同抑制作用,根据IC₅₀计算药物逆转倍数。通过MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测转染效率、细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测 PTEN、NF-κB、I-κB、P53 基因水平变化,Western blot检测PTEN、Akt、p-Akt、P65蛋白质水平变化。结果:Ad-PTEN-GFP转染与阿霉素联合作用后,K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性增加,细胞增殖明显受抑,凋亡率明显高于Ad-GFP与阿霉素联合作用组,耐药逆转倍数为3.8倍。与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP 转染K562/ADM细胞3d后PTEN蛋白表达明显增加,p-Akt与P65蛋白表达明显下调,NF-κB mRNA表达水平下调,I-κB mRNA无明显改变,P53 mRNA表达轻度升高、Caspase-3/7活性增强。PTEN mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平负相关(r=－0.968,P<0.05),NF-κB 蛋白活性与Caspase-3/7活性负相关(r=－0.986,P<0.05)。结论:野生型PTEN可能通过抑制PI3K/NF-κB/Caspase信号传导通路,逆转K562/ADM细胞的多药耐药。
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  Wnt/β-catenin信号通路在大鼠BMSCs神经分化中的作用研究

  何丁文, 殷明, 邬亚华, 周荣平, 魏强强, 殷嫦嫦

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 61-67.

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  目的: 研究Wnt/β-catenin信号通路在大鼠BMSCs神经分化中的作用,探讨应用EGF、bFGF诱导BMSCs神经分化的可能信号分子机制。方法 采用全骨髓贴壁法体外分离纯化大鼠BMSCs。第3代BMSCs分别给予20ng/ml碱性成纤维生长因子(bFGF)和(或)20ng/ml表皮生长因子(EGF)在含10ml/L(1%)胎牛血清(FBS)的DMDM/F-12培养基中诱导,倒置相差显微镜观察其形态变化,免疫组织化学法检测细胞内神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,RT-PCR检测其β-catenin、BDNF、GDNF、nestin基因mRNA的变化。结果 诱导7d后bFGF和EGF+bFGF组细胞变圆,向四周伸出多个明显突起,部分突起间存在连接,而EGF组、空白组变化不明显;免疫组化染色示EGF组GFAP阳性率高于NSE,而bFGF和EGF+bFGF组NSE阳性率高于GFAP。EGF+bFGF组NSE、GFAP阳性率最高,bFGF组次之,与空白组、EGF组比较差异均有统计学意义(P<0.004 2);RT-PCR示nestin在bFGF和EGF+bFGF组较其他组显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05);β-catenin、BDNF在EGF组、bFGF组、EGF+bFGF组显著高于空白组,且各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);GDNF在bFGF组、EGF+bFGF组显著高于其他组,且bFGF组高于EGF+bFGF组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 bFGF、EGF可诱导大鼠BMSCs向神经细胞分化,分化过程中β-catenin、BDNF、GDNF基因表达增高,Wnt/β-catenin信号通路可能在BMSCs向神经分化过程中起重要作用。
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  非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子促小鼠烫伤愈合的研究

  沈娟, 金小宝, 丁静, 朱家勇

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 68-73.

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  目的:研究非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenic human acidic fibroblast growth factor, nmhaFGF)在促小鼠深II度烫伤创面愈合中的作用。方法:采用大肠杆菌系统表达纯化制备nmhaFGF,细胞增殖法检测nmhaFGF生物活性,构建Balb/C小鼠深II度烫伤创面模型,分为实验组(20 μg nmhaFGF/cm²创面,用PBS释稀)和空白对照组(外涂PBS),观察烫伤后1,3,7,9,14 d创面面积变化,并统计创面完全愈合所需要的时间;伤后7d,21d,取各组的伤口及周边皮肤HE及免疫组化染色(PCNA,胶原蛋白),观察创面病理组织学改变,胶原排列情况。结果:获得纯度为95.1%的nmhaFGF,有丝分裂活性较haFGF大大降低,外用nmhaFGF可促小鼠烫伤愈合,将愈合时间由17.2 d缩短至15.8 d (P<0.01);伤后7 d,nmhaFGF组创面肉芽组织生长较好,PCNA表达与空白对照组相比显著增加;21 d创面再上皮化较快,胶原蛋白排列较为整齐。结论:局部用nmhaFGF能促进小鼠深II度烫伤创面愈合,明显缩短愈合时间。
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  嗜热真菌木聚糖酶1YNA及其双硫键突变体在毕赤酵母中的表达

  李思佳, 王亚伟, 付正, 汪文俊, Ossi Turunen, 熊海容

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 74-79.

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  将前期已经获得的大肠杆菌表达的木聚糖酶1YNA的野生型(BL1)及定点突变后的双硫键型(C24)基因,分别克隆到表达载体pPIC9中,获得的重组质粒转入毕赤酵母GS115中,构建成功毕赤酵母工程菌并表达获得木聚糖酶野生型(TLX)及木聚糖酶双硫键型(DSB)。在对表达量和酶特性进行分析后的结果证实,2株重组毕赤酵母均能高效表达,在摇床培养水平上,野生型与突变型均表达出具有高活力的酶蛋白,表达量分别为1.75mg/ml(TLX)与1.82mg/ml(DSB),且在培养液中目标产物外的杂蛋白含量非常少。DSB显示出的热稳定性明显高于TLX。DSB的最适反应温度为75℃, TLX的最适反应温度为68℃。DSB在75℃下处理30 min分钟后仍能保留50%的残余酶活力,同等处理条件下TLX的残余酶活力则低于20%。本项实验是首次报道利用毕赤酵母表达木聚糖酶1YNA及其突变体。
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  三七中由RNAi介导的CAS基因沉默对三七皂苷含量的影响

  孙颖, 葛锋, 刘迪秋, 饶健

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 80-85.

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  三七总皂苷为三七主要的药用活性成分,但因其产量较低,使其药用价值很难得到推广。三七皂苷和甾醇分别经达玛烯二醇合酶(DS)和环阿屯醇合酶(CAS)的催化共同的前体物质2, 3-氧化鲨烯生成。利用Gateway技术建立了CAS基因的RNA 干扰(RNAi)表达载体,并利用农杆菌介导法将其转移并整合至三七基因组中,由此方法抑制CAS的表达,阻断植物甾醇的合成,间接增加三七皂苷的产量。
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  植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GUS-CaMVterm的构建及验证

  巩元勇, 冯永坤, 倪万潮, 束红梅, 郭书巧, 刘来华

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 86-91.

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  为拓宽pCAMBIA2300表达载体的使用范围,进一步方便植物基因工程科研工作者在构建表达载体时的需要,利用SacⅠ和XhoⅠ双酶切pJIT166载体获取"35S-GUS-CaMVterm"片段,将该片段插入到pCAMBIA2300表达载体的多克隆位点区,构建完成了pCAMBIA2300-35S-GUS-CaMVterm表达载体。所构建的表达载体通过农杆菌介导转化拟南芥,获得拟南芥转基因植株,转基因植株的GUS染色结果进一步验证了本文所构建表达载体的正确性和实用性。该表达载体的成功构建,方便了构建基因超表达载体,以及使得研究启动子的活性及GUS组织化学定位成为可能,还可以通过GUS染色对转基因植物进行鉴定,为植物基因工程科研工作提供了一个较好的备选植物表达载体。
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  微生物油脂酯化工艺优化

  刘会影, 薛冬桦, 潘安龙, 徐洪章, 叶小金, 孙国英

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 92-98.

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  深黄被孢霉M2(M.iabellina)高效利用玉米秸秆水解液中的五碳糖和六碳糖,发酵产微生物油脂(细胞干重21.2g/L,菌体油脂含量56.5%)。研究酸催化脱酸-碱催化酯交换两步法由微生物油脂产微生物柴油的工艺条件。确定了微生物油脂脱酸条件:催化剂H₂SO₄用量为5%,醇油摩尔比为12∶1,反应温度为65℃,反应时间为2h,在此优化反应条件下,微生物油脂从高酸值24.47mgKOH/g降至1.60mgKOH/g。利用Box-Benhnken中心组合设计实验和响应面分析法(response surface methodology,RSM)优化微生物油脂转酯化工艺参数:催化剂KOH用量为1.25%,醇油摩尔比为10∶1,反应温度为57℃,反应时间为1.47 h,此优化条件下微生物柴油收率达到93.39%。
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  “异养-胁迫”分段培养对原始小球藻生物量和油脂含量影响研究

  汪桂林, 桂小华, 邓伟, 赵志良, 姚杰, 闫云君

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 99-104.

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  在"异养-胁迫"分段培养模式下分析原始小球藻(Chlorella protothecoides)的生物量及油脂含量。结果表明,在500ml摇瓶中,分段培养生物量达5.32g/L,略低于一步异养培养5.45 g/L,油脂含量达34.81%,是一步异养培养的2.26倍,藻渣中微藻多糖含量由 9.57%提高到18.06%。在3L发酵罐中,一步异养培养模式下生物量为14.1 g/L,油脂含量为17.16%,微藻多糖含量为10.16%;而"异养-胁迫"分段培养模式下生物量13.20g/L,油脂含量40.15%,微藻多糖含量24.74%。本研究显示"异养-胁迫"分段培养模式是一种快速获得大量高油脂含量藻细胞的有效方法,可为规模化生产微藻生物柴油和进一步利用微藻奠定了技术基础。

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  地衣芽孢杆菌谷氨酰内切酶的克隆表达与性质研究

  朱蓓霖, 周杰, 汪正华, 赵云, 黄静, 吴自荣

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 105-110.

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  谷氨酰内切酶在食品行业应用广,但来源受限。以地衣芽孢杆菌ATCCl4580基因组DNA为模板,PCR扩增出670bp大小的谷氨酰内切酶基因,克隆入表达载体pET28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白主要以包涵体形式存在。通过与硫氧还蛋白融合、降低诱导温度和共表达分子伴侣三种策略,以期增加重组蛋白可溶性,结果表明分子伴侣对可溶性有明显提高作用,而低温和硫氧还蛋白影响甚微。将重组蛋白样品与底物(Z-Phe-Leu-Glu-pNA)进行孵育反应,结果表明,该酶可有效水解谷氨酸残基的羧基,释放出4-硝基苯胺。酶学性质研究表明,此酶的最适反应温度为42℃,最适作用pH为8.0,金属离子Mn²⁺对酶活有较好的激活作用。
技术与方法
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  “Golden Gate”克隆法构建靶向载体

  梁龙, 杨华, 杨永林, 刘守仁, 皮文辉

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 111-116.

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  在同一反应体系内,利用IIS型限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行"Golden Gate"克隆方法,将多 个目的基因片段按照设定的顺序连接,实现多基因片段一步"无缝"连接。为编辑小鼠β酪蛋白基因位点,利用"Golden Gate"克隆法,构建了小鼠β酪蛋白基因位点同源重组靶向载体。

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  IL3融合蛋白稳定性分析、改造及活性研究

  张砚君, 刘荣, 张梦楠, 苗庆芳, 甄永苏, 熊冬生, 张益芝

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 117-122.

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  白细胞介素3受体α链(IL-3Rα链)即CD123抗原在急性髓系白血病(AML)干细胞表面高表达,在正常造血干细胞表面几乎不表达,可用做白血病治疗靶点。本实验室构建融合蛋白IL3-LDM靶向杀伤CD123+的肿瘤干细胞,针对其结构不稳定部位进行质谱鉴定,发现IL3第131位丙氨酸和第132异亮氨对融合蛋白稳定性起关键作用,经分子克隆改造后,IL3融合蛋白的稳定性得以显著提高,蛋白产量、靶向结合能力没有变化,这一发现有望广泛应用于相关蛋白产品中,有效提高IL3融合蛋白类药物的稳定性。
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  尖吻蝮蛇出血毒素分离纯化及其抗体在蛇毒鉴别中的应用

  郑颖, 张绎, 叶锋平, 聂雪峰, 张志晓, 邱薇, 范泉水

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 123-129.

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  目的:纯化尖吻蝮蛇毒出血毒素,制备其特异性抗体,并建立该抗体对多种蛇毒的ELISA检测方法。方法:利用多种层析技术从尖吻蝮蛇蛇毒中分离得到出血毒素,利用该蛋白作为抗原免疫家兔,通过分步盐析和Protein G亲和层析法从免疫血浆中纯化IgG抗体,HRP标记纯化的抗体。用该特异性抗体ELISA法检测蝰科的五种蛇毒。结果:纯化的出血毒素HPLC检测纯度为99.49%,其特异性HRP-IgG抗体能有效从各蝰科蛇毒中鉴别出尖吻蝮蛇毒,与各蝰科蛇毒交叉反应<15%,检测的灵敏度为10ng/ml。结论:利用纯化的抗尖吻蝮蛇蛇毒出血毒素抗体建立的ELISA方法可快速准确地从多种蝰科蛇毒中鉴别出尖吻蝮蛇蛇毒。
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  离子液体强化选择性酶促合成异槲皮苷工艺优化

  孙国霞, 王俊, 丁伟桐, 王凯旋, 吴福安

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 130-134.

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  为了提高离子液体共溶剂效应强化选择性酶促合成异槲皮苷的得率,在前期单因素实验的基础上,利用响应曲面法对离子液体比例、酶浓度和底物浓度三因素进行优化。优化后的最佳工艺条件为:离子液体比例13.05%、酶浓度9.10 g/L、底物浓度0.72 g/L,优化后异槲皮苷的摩尔得率为99.27 ± 0.55%,较优化前提高了8.60%。
综述
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  哺乳动物精子体外诱导的研究进展

  常卓, 侯玲玲, 周雅琼, 彭洪尚, 柯屾

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 135-142.

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  研究雄性哺乳动物生殖细胞的增殖、分化、成熟机制以及对以上过程造成影响的诸多因素,为雄性不育症的治疗提供理论依据和潜在的治疗方法,研究人员不断尝试将各种种子细胞诱导为精子。体外诱导精子的实验由于具有可进行连续观察、排除了受体动物的个体差异影响、便于设计单因素实验等优点,近年来取得了许多突破性进展,精原干细胞(spermatagonial stem cell, SSC)、胚胎干细胞(embryonic stem cell, ESC)、诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell, iPS)、间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)等都在体外被成功诱导为精子。就目前的哺乳动物精子体外诱导进展做一综述。
农业生物技术专栏
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  基于DII的转基因大豆领域专利计量分析

  吴学彦, 韩雪冰, 戴磊

  中国生物工程杂志. 2013, 33(3): 143-148.

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  本文应用专利分析的研究方法,利用DII数据库的专利信息,对1963-2012年收录的有关转基因大豆领域的专利文献进行了统计分析,以了解当前转基因大豆领域技术的研发现状与态势、研究热点以及技术分布与格局。