福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶的表达、纯化、活性检测及晶体生长的初步研究

中国生物工程杂志

2012, Vol. 32

Issue (08): 24-29

研究报告

福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶的表达、纯化、活性检测及晶体生长的初步研究

冯舵¹, 张阔², 李倩倩¹, 韩翠晓¹, 高伟¹

1. 北京林业大学理学院/林木育种国家工程实验室北京 100083;
2. 中国科学院生物物理所北京 100101

Expression, Purification, Activity Detection and Crystal Growth Studies on Sf2523 Protein from Shigella flexneri 2a Strain 301

FENG Duo¹, ZHANG Kuo², LI Qian-qian¹, HAN Cui-xiao¹, GAO Wei ¹

1. National Engineering Laboratory for Tree Breeding /College of Science, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China;
2. Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China

全文: PDF(1028 KB) HTML

摘要： Sf2523蛋白属于硫氧还蛋白过氧化物酶(Prx)家族,在有氧代谢过程中消除活性氧,起到保护生命大分子的重要作用。通过构建原核表达体系,可溶性表达并纯化了Sf2523酶蛋白,并对蛋白进行了过氧化物酶活性检测,证明其依然具有天然活性,酶的核心结构并未发生变化。由分子排阻色谱结果发现,酶蛋白体内和体外聚集状态不同,离体蛋白聚集状态不稳定,趋于二体化。将纯化的单体蛋白即时进行了结晶实验,初筛长出了针状晶体。通过进一步切除标签蛋白进行优化处理,最终得到了均匀的三维单晶。

关键词： 硫氧还蛋白过氧化物酶; 蛋白纯化; 酶活性; 晶体生长; 福氏志贺痢疾杆菌

Abstract: Sf2523 protein is a member from the Thioredoxin Peroxidase (Prx) family. Peroxiredoxins are ubiquitous proteins that catalyze the reduction of hydroperoxides, thus conferring resistance to oxidative stress. Sf2523 protein can protect the large biological molecules from reactive oxygen specie, playing an important role during aerobic metabolism. After the construction of prokaryotic expression system, the Sf2523 protein was expressed in soluble state, and purified by Ni Affinity Chromatography and Size Exclusive Chromatography. The peroxidase activity experiment proved that it still has a natural enzyme activity and the core structure has not changed. Enzyme protein in vivo and in vitro has different state of aggregation. The purified monomeric protein of crystallization experiments, screening out the needle-like crystals. Through further resection of label protein to optimize the processing, finally, a homogeneous three-dimensional crystal was got.

Key words: Peroxiredoxin Purification of protein Enzyme activity Crystal growth Shigella flexneri

收稿日期: 2012-04-19 出版日期: 2012-08-25

ZTFLH:

Q789

基金资助: 国家自然科学基金(3097057831070651)、教育部新世纪优秀人才支持计划(NECT－08－0731)资助项目

通讯作者: 高伟 E-mail: w_gao@bjfu.edu.cn

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冯舵, 张阔, 李倩倩, 韩翠晓, 高伟. 福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶的表达、纯化、活性检测及晶体生长的初步研究[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(08): 24-29.

FENG Duo, ZHANG Kuo, LI Qian-qian, HAN Cui-xiao, GAO Wei. Expression, Purification, Activity Detection and Crystal Growth Studies on Sf2523 Protein from Shigella flexneri 2a Strain 301. China Biotechnology, 2012, 32(08): 24-29.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2012/V32/I08/24

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