热休克蛋白70 (HSP70) 在细胞修复、存活和维持细胞正常功能方面有着重要作用。作为分子伴侣，它起着心肌保护的作用。已经对重症心脏病人的心肌组织进行了蛋白组学研究，得到了HSP70在心衰病人心肌组织中较正常人心肌组织表达升高的结论，并且在血液中得到了进一步的验证。在进一步的离体细胞实验中用不同剂量的肿瘤坏死因子-alpha (TNF-α) 刺激乳鼠心肌细胞，以观察不同时间点HSP70的动态表达情况。培养乳鼠心肌细胞，分别对细胞进行热休克（42 ℃）、TNF-α和缺血缺氧处理，在不同的时间点收获细胞，以观察HSP70的动态表达情况。用免疫化学、ELISA以及Western blotting的方法对HSP70蛋白进行分析。结果表明，在正常对照细胞中基本没有阳性信号出现，而在经缺血缺氧、热休克（42 ℃）以及TNF-α处理的细胞中有明显的阳性表达。以上研究首次在乳鼠心肌细胞中证明TNF-α诱导的HSP70表达具有时间和浓度依赖性。通过运用TNF-α对HSP70蛋白表达影响的研究，初步推断HSP70的表达模式，为体内诱导产生HSP70从而发挥心肌保护作用的研究提供一定的理论基础。
Neurturin是神经营养因子家族成员，研究发现体外表达的重组Neurturin能够促进多巴胺能神经元的存活，对帕金森氏病的基因治疗有重要意义。但有研究指出野生型Neurturin在细胞中不能完成加工进而不能被分泌到胞外。因此实验对野生型Neurturin进行改造，将NGF的信号肽与Neurturin的成熟肽进行拼接，形成一种嵌合的NGF/NTN基因，并将该基因插入重组腺病毒基因组中，在AD-293细胞中包装获得重组腺病毒。通过免疫荧光和Western blotting证实Neurturin能够在胞内表达，并且能够对其进行加工最后分泌至胞外。最后通过鸡胚背根神经节培养实验证明该嵌合基因能够表达具有明显活性的Neurturin。
将大肠杆菌中高效表达的萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)及其底物还原型谷胱甘肽(GSH)联合作用于H2O2、过氧化叔丁基(t-BHP)以及磷脂氢过氧化物(PLPCOOH)损伤的小鼠NIH3T3成纤维细胞，研究其对于细胞过氧化损伤的保护作用。发现单独加入10 μg/ml RsPHGPx并不能明显保护细胞应对过氧化损伤，但是10 μg/ml RsPHGPx与3 mg/ml GSH共同作用，可显著提高GSH对细胞过氧化损伤的保护效果，提高细胞存活率，降低细胞膜脂质过氧化水平和胞内活性氧(ROS)水平，保护细胞维持形态完整和抑制细胞凋亡。这一联合作用结果说明RsPHGPx的催化作用可以快速清除细胞内多种过氧化物，高效地保护细胞免受过氧化损伤，为RsPHGPx的应用提供了实验依据。
研究表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒pAd-H5的遗传稳定性及重组病毒的滴度测定。将重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次，取第5、10、15和20代的重组病毒采用PCR 方法扩增禽流感病毒HA基因，并进行基因序列测定分析；用标记为GFP的快速测定法计算出20代次时重组病毒的滴度。从各代重组病毒DNA 中均扩增出了约1 700bp的目的条带，与HA基因片段长度一致，基因序列分析表明：第5 、10 、15 代重组病毒中的HA基因序列与原始转移载体序列完全一致，第20代重组病毒插入基因有1处发生了点突变(即HA基因417位A→G)，但其编码的氨基酸未发生变化(即同义突变)，表明表达的目的蛋白抗原表位未发生变化；计算出的重组病毒滴度为108.875pfu/0.1ml。重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次，具有良好的遗传稳定性，重组腺病毒的病毒滴度相对较高。
目的：旨在分离并选择一株香蕉内生细菌作为内生基因工程生防菌，并克隆其几丁质酶基因的信号肽序列。方法：从香蕉植株杆下部分离并选择了一株拮抗香蕉枯萎病且具有分泌几丁质酶能力的内生细菌，对该菌株进行了形态观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析，克隆了其几丁质酶基因的编码序列并预测了其信号肽，构建了含有信号肽和不含信号肽的几丁质酶的表达菌株BL-chi1和BL-chi2。结果：结合形态观察、生理生化特征和16S rDNA序列比对分析确定该菌株为Klebsiella属，将该菌株命名为KKWB5；BL-chi1和BL-chi2经IPTG诱导后，均表达了与预期蛋白大小一致的蛋白，同时BL-chi1诱导后的培养基上清中出现一条约45kDa的条带，而BL-chi2和空载体的BL-pET22b诱导后的培养基上清中均无此条带；几丁质水解试验发现，BL-chi1诱导后的培养基上清中的蛋白经浓缩和纯化后都能在几丁质平板上形成透明水解圈。结论：该几丁质酶的信号肽能被BL21（DE3）所识别，将几丁质酶分泌到培养基中，并且分泌的几丁质酶具有水解几丁质的生物学活性。内生菌KKWB-5的分离及其几丁质酶分泌信号肽序列的克隆为进一步构建内生工程菌来防治香蕉枯萎病打下了基础。
蓝藻NADPH脱氢酶(NDH-1)是一种重要的光合膜蛋白复合体，参与CO2吸收、围绕光系统I的循环电子传递和细胞呼吸。迄今为止，人们在蓝藻细胞中已鉴定出15种NDH-1复合体亚基(NdhA-NdhO)。然而，人们对NdhO亚基的研究尚不够，至今未见有反向遗传学等方面的研究。在通过构建同源重组载体、自然转化和多次继代筛选后，对转化子进行了PCR和蛋白免疫印迹鉴定。结果表明，卡那霉素基因已成功地插入到ndhO基因的保守区域，并完全破坏了ndhO基因的蛋白表达，从而获得了ndhO基因缺失的突变株，为进一步研究NdhO亚基对NDH-1复合体的稳定性和生理功能等奠定了实验基础。
为实现来源于Paenibacillus macerans JFB05-01的α-环糊精葡萄糖基转移酶（α-CGT酶）的高效胞外表达，以含分泌型信号肽OmpA的大肠杆菌E.coli BL21（DE3）{pET-20b（+）/α-cgt}为研究对象，比较了其在不同诱导条件下复合与合成培养基中生长产酶的规律。结果表明在添加甘氨酸的条件下采用合成培养基，以0.8 g/L/h的乳糖进行流加诱导所得的胞外酶活和生产强度最高。在该条件下发酵30小时后胞外α-CGT酶的环化活性达113.0U/ml（水解活性为79 100.0IU/ml），是复合培养基胞外产酶的2.3倍，完全满足工业化生产的需求。
研究了重组大肠杆菌JM001(△ppc)/pTrc99a-pck发酵产琥珀酸的性能，结果表明厌氧条件下其耗糖能力和产酸能力分别为对照菌株JM001的4.2倍和15.3倍。进一步优化发酵条件表明：采用接入菌泥的发酵方式比按照10%接种量转接厌氧发酵的效果要好，琥珀酸的对葡萄糖的质量收率提高了约10%，且副产物乙酸的量进一步降低。初始葡萄糖浓度高于60g/L时会对菌株的生长和产酸产生抑制，且浓度越高，抑制作用越明显。7L发酵罐放大实验中，整个厌氧发酵阶段葡萄糖的消耗速率为0.42g/(L.h)，琥珀酸对葡萄糖的质量收率为67.75%，琥珀酸的生产强度为0.28g/(L.h)。
钝齿棒杆菌（Corynebacterium crenatum）SYPA是本实验室筛选获得的一株高产精氨酸生产菌株。精氨酸琥珀酸酶（AL）是精氨酸合成过程中的最后一个酶，催化底物精氨酸琥珀酸生成产物精氨酸。为进一步提高精氨酸产量，本文以钝齿棒杆菌基因组为模板，扩增得到其编码基因argH，全长为1434 bp，编码476个氨基酸，理论蛋白分子量大小为50.8 kDa，其与C. glutamicum ATCC 13032比对其同源性为99.4%，相差10 bp，3个氨基酸。将其在E.coli BL21(DE3)及C. crenatum SYPA中成功表达。利用载体pET-28a上的6×His?Tag选用Ni柱亲和层析纯化AL，纯化后获得的重组蛋白的比酶活达156.9mU/mg蛋白，总回收率为72.3%，对该酶的部分酶学性质进行了初步研究，并发现产物精氨酸对其具有反馈抑制作用。成功构建钝齿棒杆菌重组穿梭表达质粒pJC1-tac-argH并将其通过电击转化法转入C.crenatum SYPA中，加强其代谢途径中AL蛋白表达量，并对其发酵产精氨酸做了初步分析。结果表明与出发菌株相比，转化子在精氨酸琥珀酸酶酶活增强了66.8%的基础上精氨酸产量达40.9 g/L，比出发菌株产量的35.8 g/L提高了约14.2%。
优化了尖孢镰刀菌液体发酵生产蒽醌类红色素的发酵条件。通过单因素实验和正交优化实验，确定最佳产色素发酵培养基为：可溶性淀粉30％，(NH4)2SO4 3％，MgSO4 0.3％，KH2PO4 4％，pH 6.0。产色素最适培养条件为：初始pH6.0，装液量20％，接种量10％，吐温-80添加量1％，温度28℃，摇床转速200r/min，发酵周期120h。此条件下，色素效价即可达到8.184U/ml，比优化前提高了1.8倍。国内首次对尖孢镰刀菌所产蒽醌色素进行研究，为其进一步应用奠定基础。
目的：建立一种基于T载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法，提高布鲁氏菌突变株构建的效率；方法：采用融合PCR的方法，将待缺失基因上下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合起来，构建突变盒，然后将突变盒直接与T载体连接，构建突变载体，将载体转入布鲁氏菌感受态细胞并筛选抗性克隆，进而获得布鲁氏菌的缺失突变株。结果：结合融合PCR和T载体快速克隆，能够在48h之内构建好突变载体，与传统的酶切连接相比，效率高、周期短。结论：基于T载体快速克隆是一种非常高效的构建突变株的方法，为布鲁氏菌突变株的构建提供了一种新方法。
筛选抗19-去甲睾酮（NT）单克隆抗体，建立异源性ciELISA试剂盒。用人工抗原NT-17-BSA免疫Balb/C小鼠，细胞融合技术建立1株抗NT单克隆杂交留细胞NT1-B7，同种型为IgG1 /k，腹水效价达0.64×105，亲和常数（Ka）为4.31×109 L/mol，半数抑制浓度（IC50）为0.55 ng/mL，与群勃龙和雌二醇的交叉反应率（CR）分别为2.2%和1.6%，与其它化合物无CR。异源性ciELISA试剂盒在猪肉、猪尿、牛肉和牛尿四种基质中的检测限分别为0.24、0.23、0.22和0.17 ng/mL，批内和批间相对标准差（RSD）在4.4％～21.8％，添加回收率在85％～110％，4 ℃下保存期至少6个月。NT-Kit的基质pH值适用范围为6.5～7.5，温育过程优化后可节约检测时间30～90 min。试剂盒灵敏度高、特异性强，可应用于样品基质中NT残留检测。
采用单因素试验和响应曲面试验优化灵芝药性固体发酵培养基。优化所得培养基组成为：以啤酒糟为基质，料水比1∶1.4，黄芪12.52%，葡萄糖4.78%，KH2PO40.21%，MgSO4·7H2O 0.25%，VB1 微量。在此优化条件下，灵芪菌质多糖含量高达8.42mg/g，较优化前提高了29.54%。
病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ (viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)由卡波西肉瘤疱疹病毒编码，前期研究证明了vMIP-II N端21肽(NT21MP)选择性的阻断趋化因子CXCR4，从而抑制乳腺癌细胞趋化的活性。通过化学合成法获得编码vMIP-ⅡN末端的基因序列，与pGEX-KG（克隆位点的N端有谷胱甘肽转移酶GST标签序列）连接构建原核表达载体，重组质粒在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中获得表达，免疫印迹显示重组蛋白GST-NT21MP主要在细菌裂解液上清中表达，可溶性部分经亲和层析、超滤、快速蛋白液相色谱（fast protein liquid chromatography,FPLC）纯化获得高纯度的GST-NT21MP蛋白。利用Transwell趋化试验测定GST-NT21MP的活性。结果显示，重组蛋白GST-NT21MP能够抑制乳腺癌细胞SK-BR-3的趋化活性，可作为治疗乳腺癌转移的潜在性靶向药物。
细菌的乳糖操纵子可以在哺乳动物中调控基因的表达，修饰阻抑物基因和操纵基因可调控阻抑物诱导能力及其对操纵基因的亲和力，更好的适应高等动物的内环境。半乳糖苷酶对乳糖操纵子系统有正向调控作用，利用乳糖操纵子在转基因动物中可诱导性调控半乳糖苷酶基因的表达，能有效的提高转基因动物利用半乳糖苷、吸收营养物质的能力。以下从乳糖操纵子的结构功能、乳糖阻抑物功能活性的基因调控、操纵基因的功能以及其在哺乳动物的应用现状四个方面，结合半乳糖苷酶的生理功能和其在转基因动物中应用两个方面进行综述，对乳糖操纵子介导的半乳糖苷酶在转基因动物中的应用效果和前景进行了分析探讨。
详细介绍了基于WMD3 (Web MicroRNA Designer 3) 软件平台的amiRNA (artificial microRNA)分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时，只需输入目的基因靶序列相关信息后便可获得候选amiRNA。根据选定的最佳amiRNA，可得到四条含有amiRNA以及载体中miRNA 两侧序列的寡聚核苷酸序列。重叠延伸PCR合成策略可以以这四条序列以及根据质粒模板设计的A、B两段序列作为引物，扩增出目标amiRNA。同样尿嘧啶切除的策略也可合成amiRNA，但这些引物序列需做适当调整变动。此外，本文还介绍了基于特异引物退火的amiRNA合成策略，该策略可保证amiRNA分子能够一步PCR合成，合成后的amiRNA表达盒可通过合适的限制性位点被克隆至目的载体中的相应位点。可以预见，这种amiRNA分子设计的科学性与合成策略的精确性将会使amiRNAi技术在生物基因功能分析中发挥更加重要的作用，对生命科学研究产生深远的影响。
植物MADS-box基因家族的不同成员在植物生长发育过程中起着非常重要的作用。拟南芥MADS-box 基因FRUITFULL(FUL) 在控制拟南芥开花时间、花分生组织分化、茎生叶形态以及心皮和果实的发育中起到重要作用。其他植物中，FUL的同源基因也在调控花发育，果实发育以及叶片发育等方面各自起到重要作用。本文综述了FUL基因及其同源基因的表达模式和功能，并就其在农作物及果树育种上的潜在应用价值进行了讨论。
详细综述了国内外对角质酶的研究概况，包括角质酶的主要来源，角质酶基因的克隆与表达，以及关于角质酶的发酵研究。着重阐述了目前角质酶在棉纤维的生物精炼，羊毛的防毡缩整理，以及合成纤维的生物改性等方面的应用进展。另外，作为推动纺织工业清洁生产的关键酶制剂，笔者对未来角质酶在纺织工业中的应用前景作了简要展望。
γ-亚麻酸是一种人体必需的多不饱和脂肪酸，具有多种重要的生理功能。最初γ-亚麻酸主要来源于植物种子油，如黑醋栗、月见草和琉璃苣等的种子油。但是从植物中提取γ-亚麻酸受到诸多因素的限制，远不能满足市场需求，采用微生物发酵法生产γ-亚麻酸具有广阔的应用前景。本文综述了目前发酵生产γ-亚麻酸的菌株，对其代谢途径进行了分析，重点总结了国内外有关菌种选育及发酵调控方面的研究，并探讨了今后的研究方向。
自然界中依赖烟酰胺类辅酶(NAD+或NADP+)的脱氢酶是氧化还原酶中最重要的一类，基于此类酶的生物传感器应用前景广阔，近年来发展迅速。构建这类传感器需要两项关键技术，即氧化型辅酶在电极表面的再生和辅酶固定化。本文介绍了辅酶电化学再生的主要方法、辅酶固定化的常见手段，以及相关的研究进展。
1990年9月14日美国NIH临床中心首次采用基因治疗成功治愈腺苷脱氨酶（ADA）基因缺陷而患重度联合免疫缺损和免疫系统功能低下疾患，至今已整整20年，其发展迅速，从单纯的重组技术导入基因DNA发展到了涵盖DNA和RNA两个干预水平、和基因上调（如基因增补、矫正、置换等）及下调（基因失活）的两大策略，近年来的进展使得基因治疗登入《Science》杂志2009年度十大科学进展，我国在基因治疗领域诞生了第一个上市药物，有10多个制剂临床前和多个在临床研究。基因治疗在遗传病治疗中具备巨大潜力，已经成为当代生命科学中最有前景的研究方向之一。
