中国生物工程杂志

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魏薇包福祥何金生付远辉王小波郑娴娴张莹

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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目的：从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法：以RSV F蛋白为靶抗原，通过“吸附-洗涤-洗脱-扩增”过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后，单克隆经ELISA检测，阳性克隆进行核酸序列分析，并将阳性克隆噬菌体感染E.coli HB2151，经IPTG诱导，制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体，并进行Western及Dot blot分析。结果：经过筛选，获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆，取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析，显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性，Western及Dot blot分析表明为单链抗体。结论：利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。

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β-内酰胺酶抑制多肽的串联表达及抑制活性研究

许明飞谢丽萍杨涛朱春宝朱宝泉胡又佳

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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细菌对β-内酰胺类抗生素及β-内酰胺酶抑制剂产生耐受性使新型β-内酰胺酶抑制剂成为抗生素领域的研究热点。我们曾通过酵母双杂交系统筛选到了一个β-内酰胺酶的结合多肽SIPIS04-01，体外实验表明其具有抑制氨苄西林的活性，为提高其表达量，本文尝试基因串联表达方式-随机定向串联法成功构建了密码子改造之后的小肽SIPIS04-01编码基因SIPIS04-01N的双拷贝质粒pYG563，使表达产物中融合蛋白占细菌蛋白总量的比例较单拷贝表达提高了48.4%。纯化所得小肽SIPIS04-01N对TEM-1类型的β-内酰胺酶具有体外抑制活性，并测定了抑制常数Ki。

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应用混料实验设计制备秸秆复合降解菌剂

刘睿

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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农业秸秆类废弃物含有大量木质纤维素，该类物质结构稳定，不易降解，为秸秆的合理利用带来诸多困难。本实验尝试利用混料实验设计对筛选出可以共同培养的五种木质纤维素降解菌的配比进行研究，寻求复合发酵降解剂各组分的最佳配比，并分析发酵产品得到适用于不同发酵目的的菌剂。通过对发酵产品中木质素和纤维素降解率及还原糖的含量的分析建立模型，分析预测纤维素降解率最高为35.75%，木质素降解率最高为27%，还原糖含量最高为3.39mg/g。通过优化得出发酵菌剂最优配比为枯草芽胞杆菌12.1%，克鲁斯假丝酵母10%，地衣芽胞杆菌27.2%，变色栓菌10.6%，黄孢原毛平革菌40%。对应三指标的实测值为：35.47%，26.41%和2.37mg/g。

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Rex-1通过和Oct4直接作用调控Oct4的活性

郭允倩饶艳华赵元裴端卿

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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Rex-1和Oct4是在多能性细胞中特异表达的转录因子，而Rex-1和Oct4调控胚胎干细胞(ES细胞)多能性和分化能力的机制尚不清楚。为探索维持ES细胞多能性的分子机制，探讨了Rex-1和Oct4的相互关系，通过免疫荧光实验和免疫共沉淀实验证明了Rex-1和Oct4两种蛋白共同定位于细胞核中，并且二者之间有直接的相互作用，进一步的活性分析得到Rex-1能够抑制Oct4的转录激活活性。

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重组人源脑红蛋白的高效表达、纯化及鉴定

吴永红王利红高艳张成岗

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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脑红蛋白(Neuroglobin，NGB)是新发现的主要表达于脊椎动物神经元及视网膜中的第三类携氧珠蛋白。已有诸多报道认为脑红蛋白在缺氧缺血性脑损伤的神经保护过程中，作为活性氧簇(ROS)的清除剂或缺氧信号的感受器起重要作用，但其神经保护作用的具体机制不明。显然，实现该蛋白的制备对于研究其功能具有重要作用。基于此，通过RT-PCR从人胎脑中扩增出脑红蛋白cDNA并克隆到原核表达载体pBV220，通过测序鉴定正确后转化至大肠杆菌HB101中诱导表达，表达产物超声破碎后经凝胶过滤柱Sephacryl S-200和阴离子交换柱Q Sepharose FF纯化，最后通过Sephadex G-25脱盐。经15% SDS-PAGE和Western blot检测及质谱和蛋白序列分析鉴定制备的蛋白样品为脑红蛋白。本文采用两步法实现了脑红蛋白高效特异性纯化，为后期基于脑红蛋白神经保护作用的功能及机制研究奠定了重要基础。

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醛糖还原酶抑制剂细胞筛选模型的建立

刘静叶玲

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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摘要目的：将糖尿病慢性并发症相关基因醛糖还原酶 (aldose reductase, AR) 基因与腺相关病毒(adeno associated virus, AAV) 表达载体pSNAV2.0重组，使其在HEK293细胞中表达，以基因工程表达的AR为靶向，建立醛糖还原酶抑制剂 (aldose reductase inhibitor, ARI) 细胞筛选模型。方法：首先采用酶切、连接等方法构建含有人AR基因序列的AAV表达载体pSNAV-hAR，将重组质粒转染HEK293细胞，通过活性测定、Western blot和免疫荧光检测目的基因转染及表达的情况。结果：PCR、酶切、DNA测序均证实表达质粒pSNAV-hAR构建正确。转染HEK293细胞后，一系列分析结果显示，腺相关病毒表达载体介导的AR真核细胞表达产物是具有功能活性的目的蛋白。应用经典醛糖还原酶抑制剂 Sobinil 和 Zopolrestat 对此模型进行了验证。结论：AR高表达细胞模型的建立，为进一步筛选ARI、探讨多元醇通路学说在糖尿病慢性并发症发病机制中的作用奠定了基础。针对先后建立的酵母细胞与真核细胞模型的特点及三种AR活性测定方法中的注意事项进行了讨论。

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新的生长激素释放激素类似肽Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys的构建和比较活性

唐松山

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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目的: 生长激素释放激素（GHRH）在农业和医学领域有很大的应用前景，为了寻找高活性和长半衰期生的GHRH类似肽。.方法: 通过使用独特酸敏感水解位点Asp-Pro的原核表达系统，构建了新的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽。通过细菌裂解、包含体洗涤、乙醇分级沉淀、酸水解、SP-Sephadex C-25和Sephadex G-10柱层析技术，肽获得了高纯度。通过SDS-PAGE、离子化质谱、大鼠垂体和人流产垂体，测定了肽的纯度、分子量、活性。结果: 肽分子量5,373道尔顿与实际值吻，0.1-10 μg/ml肽剂量不论是人垂体还是鼠垂体都增加了垂体生长激素的释放，大鼠垂体生长激素的释放具有剂量依赖性，与标准的hGHRH(1-40)肽比较，该肽有较高的GH释放活性。结果显示，Pro-GHRH(1-44)Gly-Gly-Cys肽的垂体GH的释放与Pro-hGHRH(1-44)的GH释放无统计学差异。结论：该肽有好的生长激素释放活性、功能选择性和种属特异性。

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根霉菌利用木质纤维素发酵生产有机酸的研究进展

徐晴马晓琛付永前李霜黄和

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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木质纤维素是世界上储量最丰富、最廉价的可再生生物质资源，利用木质纤维素发酵生产有机酸具有重大的经济效益及社会效益。本文对根霉菌的木糖代谢途径以及利用木质纤维素发酵生产乳酸、富马酸等重要有机酸的生产方式、发酵策略等进行了阐述，指出针对木糖的高效利用是实现利用木质纤维素生产有机酸的关键。

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噬菌体展示技术及其在肿瘤研究中的应用

强荣兵张楠楠魏丽丽侯颖春

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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噬菌体表面展示技术是一项特异性多肽或蛋白的筛选技术，它将随机序列的多肽或蛋白片段与噬菌体衣壳蛋白融合表达而呈现于病毒表面，使其能够与其配体作用而达到模仿性筛选特异性分子表位，从而提供了高通量高效率的筛选系统。近年来噬菌体展示技术已广泛应用于肿瘤抗原抗体库的建立、单克隆抗体制备、多肽筛选、疫苗研制、肿瘤相关抗原筛选和抗原表位研究、药物设计、癌症检测和诊断，基因治疗及细胞信号转导研究等。本文就近年来噬菌体展示技术在肿瘤相关研究中的运用作以综述。

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成纤维细胞生长因子21的研究进展

王秀然王会岩李校堃

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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成纤维细胞生长因子21（FGF21）是一种主要的脂肪代谢调节因子，主要在肝脏中表达；有助于肝脏的脂肪代谢以及生酮反应，可以促进脂肪细胞摄取葡萄糖，促进胰岛素分泌，延缓肿瘤的发展等功能。人们在研究过程中发现，FGF21可以用于糖尿病和降血脂等其他代谢疾病治疗，为进一步研究和利用FGF21提供了依据。

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生物降解萘的研究进展

王艳辛嘉英

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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萘的生物降解具有低成本，效果佳，无二次污染等优势，受到全世界的广泛关注。本文从降解菌和降解质粒的开发与研究、降解途径的发展以及表面活性剂、菌体固定化技术和有机溶剂的应用情况等方面综述了生物降解萘的发展历程，分析了目前还存在的问题，展望了其发展趋势。

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相对定量和绝对定量-以CsSAMDC基因表达分析为例

张吉宇,王彦荣,南志标

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0.

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以无芒隐子草干旱诱导的cDNA文库中获得的SAMDC序列为基础，应用实时荧光定量RT-PCR技术同时结合相对定量和绝对定量方法，以分析无芒隐子草SAMDC基因在不同组织、不同胁迫梯度下的表达为案例，详细介绍并比较相对定量和绝对定量在基因表达方面的应用。分别采集无芒隐子草幼苗自然干旱0、2、4、6、8、10d以及恢复浇水1、4d的叶片和根系材料，相对定量采用2 -△△CT法；以相应基因的质粒扩增产物为标准品制作标准曲线，对定量PCR的引物浓度进行了优化，而后筛选最稳定的内参基因，以内参基因获得的标准化因子对绝对定量数据进行标准化。相对定量2 -△△CT法结果显示，CsSAMDC基因在干旱胁迫8d后，叶片中的表达量为胁迫前的0.62±0.13倍，根中的表达量为胁迫前的5.93±0.71倍。绝对定量表明，CsSAMDC基因只在胁迫第8d和第10d的根组织中检测到表达量显著增大，胁迫第4～6d和恢复浇水后1～4d，CsSAMDC基因在叶和根组织中的表达较对照降低。相对定量和绝对定量在CsSAMDC基因表达研究中显示相对一致的趋势。

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检测小鹅瘟感染抗体的Dot-ELISA方法研究

布日额王君伟吴金花

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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本试验以GPV VP1-VP3非重叠序列重组原核表达多肽为检测抗原，建立了鉴别GPV感染抗体的Dot-ELISA方法，试验确定检测抗原包被浓度分别为700ng；兔抗鹅IgG-HRP-标记抗体的最适稀释度为1：200；被检血清最佳稀释度为1：400。检测GPV血清抗体的阳性率为100%；检测鸡抗GPV VP3禽痘重组病毒血清的阳性率为0 %。

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血清SELDI蛋白质指纹图谱在乳腺癌术前分级中的应用研究

庞达

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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摘要应用SELDI技术和生物信息学方法从血清中筛选乳腺癌蛋白质标志物并构建检测模型，为术前分级提供可能的简便易行的方法。应用美国Ciphergen公司的PBS IIc型蛋白质芯片—时间飞行质谱仪作为蛋白质组学研究平台，采用CM10芯片，对34例Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌患者和31例Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌的血清进行了检测，寻找两组人群血清中的蛋白质谱差异，并建立决策树分类模型。11个蛋白质峰在两组患者之间表达量有显著性差异（P<0.05），M/Z为 M2042.87，M2459.83，M3881.37，M4804.47，M6683.24和 M6706.06的6个蛋白质峰被选为分类变量构成决策树分类模型，该模型的交叉验证（测试组）总准确率为80.0%，Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌检出率为82.4%，Ⅲ～Ⅳ期检出率为77.4%。SELDI技术在乳腺癌患者术前分级的判断方面具有一定的应用价值。

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HepG2细胞膜上乙型肝炎病毒前S1蛋白（preS1）结合蛋白的研究

丁岗强张君杨凤杨键向光明唐霓黄爱龙

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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采用pull down技术研究preS1在HepG2细胞膜上的结合蛋白。以原核表达的GST-preS1融合蛋白为探针蛋白，与生物素标记的HepG2细胞裂解液进行pull down试验分离与preS1结合的膜蛋白。Western blotting结果显示HepG2细胞膜上有一大小约110kDa蛋白（p110）与preS1结合。通过对比实验证明该蛋白具有较好的组织特异性和种属特异性。研究结果显示该蛋白是HepG2细胞膜上与preS1结合的蛋白，可能与HBV的早期感染过程有关。

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发酵过程中微生物利用不同单糖的差异性

朱豫曹海龙李曙光白雪芳杜昱光

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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摘要：本文考察了多种发酵常见微生物对不同单糖的利用差异(尤其是葡萄糖/果糖利用差异)。并在分子生物学层面，从转运和磷酸化两个角度分析了造成这种差异的原因。通过定位与此相关的特殊操纵子或编码基因，能够帮助实现工业微生物的改造，从而使多种非葡萄糖基生物质能源得到有效利用，对能源模式的转化和可持续发展有着重要意义。

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胡杨异形叶的蛋白质组学研究

岳宁郑彩霞白雪郝建卿

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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通过探索不同的裂解液成分配比和优化2-DE条件，建立了适合胡杨叶蛋白质组学研究的技术体系，同时以同一小枝上的异形叶为试验材料寻找异形叶间差异表达的蛋白质。结果表明：使用含7mol/L尿素、2mol/L硫脲、2% CHAPS、60mmol/L DTT、0.2% 载体两性电解质的裂解液复溶蛋白沉淀的效果好。通过对差异蛋白点的串联质谱鉴定，发现异形叶在光合及呼吸作用方面存在差异。本研究为了解异形叶产生的分子调控机制，揭示胡杨的耐逆性积累了有价值的信息。

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人参遗传转化研究进展

侯春喜赵寿经梁彦龙王建华

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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遗传改良是人参育种的重要手段之一，而遗传转化和再生体系的建立是开展人参遗传改良工作的关键步骤。人参是多年生休眠植物，虽然在遗传转化和植株再生方面的研究具有一定的难度，但经国内研究人员的努力，目前已取得了实质性的研究进展。本文对人参的植株再生和转基因研究现状作了较为系统论述。并讨论了人参基因工程研究中存在的问题。

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蛋白骨架在随机肽库构建及靶分子筛选中的应用

郭红光吴海江茆灿泉

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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自然界有着丰富的蛋白骨架来源。选择适宜的蛋白骨架和展示、筛选方法，可构建基于合理蛋白骨架结构的优化限制性随机肽库及应用。与非限制性随机肽库相比，可望获得针对靶分子具有新功能的蛋白结构或更高亲和力的配体分子。目前，骨架蛋白限制的随机肽库已在高效靶分子筛选、基础研究、临床诊断和医学治疗等方面显示出巨大的潜在应用价值。本文以S-S限制性骨架、抗体分子、锌指蛋白、Z结构域、FN3结构域等为主要代表，综合介绍了蛋白骨架的结构基础、分类、基于蛋白骨架的限制性随机肽库构建及近年来在靶分子筛选等方面的应用最新进展。

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微生物脂肪酶蛋白质工程

林瑞凤舒正玉薛龙吟蔡少丽黄建忠

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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微生物脂肪酶催化的化学反应具有严格的立体选择性、位点选择性等专一性，催化活性高而副反应少，催化反应不需要辅助因子等特点，因此广泛应用于工农业生产中的诸多领域。利用蛋白质工程技术，提高微生物脂肪酶的特异性、活性和稳定性，对提高微生物脂肪酶制剂产品的市场竞争能力，扩大微生物脂肪酶的应用领域，具有重要的意义。本文综述了蛋白质工程技术在微生物脂肪酶改性方面的应用现状、存在问题及前景。

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植物亚原生质体分离及融合研究进展

徐小勇

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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植物亚原生质体中的胞质体和微原生质体在植物遗传改良等应用方面上具有重要意义，本文就国内外在胞质体和微原生质体分离和融合等方面的研究进行了综述，同时对研究中存在的问题提出了展望。

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转TaDREB基因提高芦荟抗低温特性的研究

赵华赵进董银卯何聪芬钟秦

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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本研究利用已购建好带有小麦功能基因TaDREB的表达载体pBIR1，通过农杆菌介导浸染库拉索芦荟(Aloe vera L.)幼叶外植体，在添加Carbenicillin和G418的MS培养皿上筛选诱导丛生芽，连续筛选后，转入1/2MS生根壮苗培养。共筛选58株生长良好的抗性植株。按照标记基因nptⅡ及目的基因TaDREB的序列设计上游引物，对所有抗性植株进行PCR检测，结果表明目的基因的转化频率分别达到0.22%。将转基因阳性植株置于4℃低温处理两周，-20℃冷冻处理30min，发现对照植株发生严重冻害，而转基因植株却生长良好，抗低温特性明显提高。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对低温胁迫条件下培养14天的转基因植株SOD、POD同工酶谱进行分析，结果表明低温胁迫下转基因植株SOD、POD活性均呈降－升－升－升趋势变化，与非转基因植株的变化趋势降－升－降－降有所不同。进一步利用电导率法检测，结果转基因植株电导率的平均值为0.462，明显低于对照的0.685；说明转基因芦荟细胞膜的稳定性得到很好的改善，是其抗低温特性提高的内在生理基础。

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A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究

陈元鼎李传印范耀春文喻玲张艳魏海涛

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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轮状病毒(RV）NSP6与NSP5由同一基因片段编码，至今对NSP6 性质了解很少。本研究用基因重组表达和免疫学方法，重组表达了A组人RV NSP6蛋白，进行了NSP6的动物免疫及其抗原反应性、免疫原性研究以及RV感染细胞中NSP6的合成及亚细胞分布研究。研究结果表明，NSP6可在原核系统中高效表达，表达蛋白占菌体总蛋白的34.2%；NSP6免疫豚鼠血清抗体可特异性识别菌体细胞中表达的NSP6和SA11及Wa病毒感染的MA104细胞中合成的NSP6蛋白；病毒感染细胞中合成的NSP6在感染后3h就可检测到，12h表达量达到最高；NSP6在病毒感染细胞质中呈弥散状分布，并主要积聚在细胞核的周围，未观察到毒质体样结构。该研究结果对深入了解RV NSP6的结构与功能具有重要的意义，具有重要的潜在应用价值。

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乙型肝炎病毒X蛋白化学发光定量检测试剂盒的研制

谢南王珊珊张婧王纯直王虹

中国生物工程杂志. 2009, 29(09): 0-0.

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HBV X蛋白（HBx）是由乙型肝炎病毒（HBV）基因组编码的调控蛋白，与由乙肝引起的肝癌发生具有密切的关系。血清HBx对乙型肝炎、肝癌的诊断及发病机理研究有较高的临床应用价值。在表达并纯化HBx、制备出HBx单克隆抗体与酶标抗体的基础上，研制了HBx定量检测试剂盒（增强化学发光法），对其灵敏度、特异性等指标进行分析，并将该试剂盒应用于临床研究。结果表明，原核表达并纯化的HBx纯度≥94%；试剂盒灵敏度达0.1ng/ml；线性范围达到0.5ng/ml -600ng/ml；特异性高，与球蛋白、脂蛋白、血红蛋白、酸性糖蛋白、HBc、HBe、HBs、HBV preS2不发生交叉反应；批间CV≤6.5%；临床标本检验慢性乙型肝炎阳性率为55%、肝硬化阳性率为68%、肝癌阳性率70%，表明此试剂盒可应用于乙肝、肝硬化、肝癌的临床诊断及发病机理研究。

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2009年, 第29卷, 第09期　
刊出日期：2009-09-25

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