Please wait a minute...

中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志  2008, Vol. 28 Issue (9): 52-55    
研究报告     
Bacillus Stearothermophilus IAM 11001 L-阿拉伯糖异构酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性研究
程丽芳 沐万孟 张涛 江波
江南大学食品科学与技术国家重点实验室 江南大学食品科学与技术国家重点实验室 江南大学食品科学与技术国家重点实验室 江南大学食品科学与技术国家重点实验室
Purification and Characterization of L-AI from Bacillus stearothermophilis IAM 11001 Expressed in E. coli
CHENG Li-fang MU Wan-meng MU JIANG Bo JIANG
 全文: PDF(539 KB)   HTML
摘要:

L-阿拉伯糖异构酶是生物法生产新型功能性因子D-塔格糖最为有效的酶。本文获得了一种新型耐热L-阿拉伯糖异构酶的编码基因araA,来源于Bacillus stearothermophilis IAM 11001,经NCBI Blastn分析,与GenBank中Thermus sp. IM6501 araA序列的同源性为95%,并将该新基因提交到GenBank,获得登陆号:EU394214。以pET-22b(+)为载体质粒,E. coli BL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,IPTG可诱导目的蛋白的过量表达;经亲和层析纯化的重组蛋白样品进行SDS-PAGE电泳分析,约在59 kDa处出现显著的特征蛋白条带;同时对重组L-AI的活性进行了初步研究,全细胞反应24小时D-塔格糖的转化率为39.8%。

关键词: L-阿拉伯糖异构酶D-塔格糖基因重组亲和层析    
Abstract:

Thermostable L-arabinose isomerase (L-AI) is the most potential enzyme for the biological production of D-tagatose from D-galactose, a novel functional factor. Gene araA encoding the L-arabinose isomerase from Bacillus stearothermophilis IAM 11001 was cloned and expressed in Escherichia coli. The araA gene of 1491 bp has 95% identity with L-AI from Thermus sp. IM6501. The GenBank accession number for the nucleotide sequence of this araA gene determined in this work is EU394214.The bacterium was induced by IPTG and analyzed by SDS - PAGE, approximately 59 kDa exogenous protein was observed on the SDS - PAGE. The recombinant L-AI was purified to electrophoretical homogeneity with affinity chromatography, and the activity of recombinant L-AI was also studied. The bioconversion rate of D-galactose to D-tagatose reached 39.4% after 24 h whole cell reaction.

Key words: L-arabinose isomerase    D-tagatose    gene recombinant    affinity chromatography
收稿日期: 2008-03-12 出版日期: 2008-09-25
通讯作者: 江波   
服务  
把本文推荐给朋友
加入引用管理器
E-mail Alert
RSS
作者相关文章  
沐万孟
张涛
江波
程丽芳

引用本文:

程丽芳,沐万孟,张涛,江波. Bacillus Stearothermophilus IAM 11001 L-阿拉伯糖异构酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(9): 52-55.

CHENG Li-fang MU Wan-meng MU JIANG Bo JIANG. Purification and Characterization of L-AI from Bacillus stearothermophilis IAM 11001 Expressed in E. coli. China Biotechnology, 2008, 28(9): 52-55.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/        https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2008/V28/I9/52

[1] 张玲,曹小丹,杨海旭,李文蕾. 连续流层析技术在亲和层析中的应用及生产放大评估[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(6): 38-44.
[2] 付大伟,孙莹莹,徐伟. 融合蛋白NusA-hRI的高效异源表达、纯化及活性分析[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(3): 21-28.
[3] 王云龙, 赵二霞, 李玉林. Thymidine Kinase 1(TK1)重组蛋白的表达、纯化及鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(9): 15-22.
[4] 薛玲, 刘江宁, 张耀, 张纯, 王祺, 秦川, 刘永东, 苏志国. EV71多表位抗原亲和纯化及类病毒颗粒胞外自组装[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(7): 34-40.
[5] 蒙国基, 邓义熹, 李乐, 罗豪晖, 于玉根. 变速上样在MabSelect填料上分离WLB303[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(6): 65-75.
[6] 王东波, 马义, 王孝丽, 赵绍军, 韩磊, 洪岸. 基因重组PACAP27衍生多肽RP2制备及促角膜上皮细胞增殖研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(3): 61-65.
[7] 代云见, 张勇侠, 何勇智, 丛聪, 张涛, 王明蓉. 技术与方法Anti-IgE单链抗体纯化工艺研究及活性鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(12): 51-57.
[8] 马义, 罗天杰, 洪岸. 新型重组VPAC2激动剂RD的制备及促进胰岛素功能的分子机制[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(11): 60-66.
[9] 赵倩倩, 周晓今, 柳小庆, 杨文竹, 李素贞, 刘奇, 陈茹梅. 转基因玉米中植酸酶蛋白免疫亲和纯化体系的建立[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(6): 125-130.
[10] 徐文娜, 马义, 叶祖禄, 罗天杰, 饶磊, 洪岸. 垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生多肽RHMP的重组制备及促角膜损伤修复的初步研究[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(2): 65-69.
[11] 吴爽, 周东, 张娟辉, 唐松山. 鼠源原蛋白转化酶2基因的构建及其表达[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(08): 19-23.
[12] 包海生, 高秀峰, 郑雪妮, 李永生. 壳聚糖锌离子固定化亲和层析填料的制备与性质[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(05): 85-90.
[13] 付凤根, 徐铮, 李贵祥, 李莎, 冯小海, 徐虹. 利用固定化重组大肠杆菌细胞生产D-塔格糖[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(7): 85-90.
[14] 马义,余榕捷,曾乐,谢珊珊,洪岸. 新型抗2-型糖尿病基因重组RMBAY的克隆、表达及生产环节优化[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(04): 17-21.
[15] 李永清,杨敬,罗长保,周雪媚,张莉,章振华. 表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒的构建[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(9): 24-30.